Tm值差异型不对称PCR方法的建立及其在分子诊断中的应用

多数分子诊断方法对靶基因的检测都是以单链DNA为基础的,如何获得大量和高质量的单链靶DNA分子一直是研究热点.以包含BRCA1基因上3个单核苷酸多态性(SNP)的DNA片段为研究对象,通过调整不对称扩增引物碱基序列组成(5′-端引入错配或加入锁核苷酸(locked nucleic acid,LNA)),使用相差10倍浓度来增加不对称引物间Tm值差异,改进扩增条件(添加增强剂的扩增缓冲液,不同退火温度的二阶循环扩增程序)后,进行不对称扩增来产生大量单链靶DNA产物.结果表明Tm差异型不对称PCR(Tm difference asymmetric PCR,TDA-PCR)可有效提高单链DNA分子产率,降低引物设计难度,也扩大了模板序列的适用范围.此外,还针对禽流感病毒H5N1的血凝素(haemagglutinin)HA基因保守序列进行不对称扩增,用获得的单链DNA为模板进行焦磷酸测序检测,所得结果与参考序列一致且无明显干扰信号.因此,采用Tm值差异型不对称PCR可使焦磷酸测序等分子诊断流程更为简便,成本更低,效率更高,具有很好的通用性和实用性.     

大采高综采煤壁片帮的原因与防治

综合机械化放顶煤开采技术是近些年来发展较快、较为先进的采煤方法之一。它具有单位产高、掘进率低、适用范围广、减少工作面搬家次数、且成本相对较低等优点。但在煤层开采中,特别是仰斜开采时,片帮现象较易发生。如不能及时加以有控制,极易导致上覆煤岩层在支架前端发生冒落现象,就会造成工作面支架前端发生直接顶大面冒落,而影响生产,并给煤矿生产带来极大的不安全隐患。     

金丝桃素抑制慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及Fas／FasL蛋白表达

目的观察金丝桃素对慢性病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌细胞凋亡及Fas／FasL蛋白表达的影响。方法Balb／C小鼠多次接种心肌柯萨奇段病毒复制慢性VMC模型，首次感染病毒45天后将存活小鼠分为模型组、金丝桃素组及氯沙坦组，同时设正常对照组．分别给予相应药物干预30天，采用原位末端标记法检测心肌细胞凋亡及免疫组化方法检测Fas／FasL蛋白表达。结果模型组心肌细胞凋亡率较正常组显著增加（P〈0．05），金丝桃素组和氯沙坦组凋亡率较模型组显著降低（P〈0．05）。模型组Fas／FasL蛋白表达较正常组显著增多（P〈0．01），金丝桃素组和氯沙坦组较模型组显著降低（P〈0．01）。结论金丝桃素保护心肌细胞与抑制VMC心肌细胞的凋亡．下调Fas／FasL蛋白表达有关。     

沉降观测和位移观测技术的综合应用

城市建筑施工中,为了避免造成经济损失,按一定的方法要求对周围高层建筑物同时进行沉降观测和位移观测是非常必要的。通过布设高等级平面和高程监测网定期对建筑物的沉降观测点和位移观测点进行观测。使用这种方法所得到的数据准确,使施工单位在施工中有可靠的依据。     

巴西石油分身乏术

有油采不出,还不能涨油价巴西人习惯的乐观情绪和及时行乐,对巴西石油公司而言,成了苦不堪言的泥潭。若以2011年为分水岭,2011年之前和之后的巴西国家石油公司(Petrobras,简称巴西石油公司),展现的是完全相反的境遇,如水火之隔,走势互为镜像。2010年9月24日,圣保罗股票交易所,时任巴西总统卢拉和当时巴西石油公司总裁卡布里埃利一起摁下按     

神奇的蛎蚜山

在南黄海海面上有一座中国唯一的蛎蚜山。它入水为礁、山水为岛，被当地人称为“沉浮山”。山影犹如碧波丛中托出一盘“海龟听潮”的盆景，它的成冈至今还是一个谜。     

反对监管,却在关键时刻露出漏洞 摩根大通尴尬了

正摩根大通亏损20亿美元,关于金融业监管争论的天平瞬间倾斜。"伦敦鲸鱼"让支持自由市场的一方都傻了眼。这是"茶杯里的风暴"。今年4月,摩根大通(JPM organChase)2012年第一季度财报分析师会议上,首席执行官杰米·戴蒙(Jamie Dimon)在面对外界关于绰号"伦敦鲸     

小蜜蜂本领

紫黄色的外表上。有一道道黑圈儿，一双大眼，一根吸管。这便是可爱活泼的、小蜜蜂，它的本领可大哩!     

昆虫歌王—知了

盛夏酷暑天，知了趴在高高的树枝上，以寸体之躯，叫得那样的高亢嘹亮，那样的长远持久，怎不令人称奇！     

陈子龙文学思想摭谈

陈子龙所处的时代,经历了多次复古与反复古更迭的文坛并没有大放异彩,明王朝更是内忧外患、风雨飘摇。文坛浅陋、庸俗的诗风并不能承担起拯救时弊的重任。陈子龙在这种情况下祖述六经、力返风雅,承前后七子之余续,宗法唐诗秦文,提出了"文以范古为美"、"诗之为经"、"诗有六义,比兴要焉"等文学主张。强调诗人要忠君爱国、济世安邦,诗歌要雅正崇古、忧时托志。