郁金香ACC氧化酶基因RNAi表达载体的构建

为了构建郁金香ACC氧化酶基因的RNAi表达载体.采用Trizol法提取了郁金香花瓣总RNA,根据郁金香ACC氧化酶基因编码区序列,设计了带有限制性内切酶位点的特异性引物,成功地扩增得到了郁金香ACO基因保守片段.将此片段以正向和反向插入到中间载体pBSin内含子的两端,构建成发卡结构的RNA片段,利用pCAMBIA35S-1301作为桥梁载体,构建了带发卡结构的RNAi表达载体pCAMBIA-ACO.     

双水相非离子表面活性剂萃取法分离胆固醇氧化酶

TritonX -114是一种常用的表面活性剂。双水相萃取分离法适合于分离具有一定疏水特性的水溶性蛋白质。在研究了其浊点、浓度、pH值、分离时间和分离温度等影响因素后 ,得到了分离胆固醇氧化酶的优化条件。可以直接对发酵上清液进行处理 ,一次萃取可使酶液体积缩小10倍 ,总酶活回收率为70%。     

栗子多酚氧化酶催化动力学及抑制机理的研究

用丙酮从栗子中提取多酚氧化酶, 用分光光度法测出酶催化反应的最佳条件是ｐＨ 值为６ ．３ , 温度为２５ ℃, 反应活化能等于２４ ．３６ ｋＪ·ｍｏｌ－ １ , 米氏常数ＫＭ＝ １ ．０５４ ×１０ － ２ｍｏｌ·Ｌ－１ ; 研究了八种抑制剂对酶活性的抑制作用,其中柠檬酸的抑制机理是属于可逆竞争性抑制, 求得与抑制有关的常数ＫＩ＝ １ ．３４ ×１０ － ２ｍｏｌ·Ｌ－ １ , 对果蔬的保鲜有重要的指导意义     

离子注入水稻的同工酶研究

研究离子束辐照水稻干种子对幼苗过氧化物酶（ＰＯＤ）和细胞色素氧化酶（ＣＯＤ）同工酶的影响。结果表明：根的ＰＯＤ同工酶和苗的ＣＯＤ同工酶谱带数量和酶活性均有变化,而苗的ＰＯＤ同工酶和根的ＣＯＤ同工酶仅表现为酶活性的变化。植物体中不同种同工酶和不同器官对离子束辐照的敏感性不同。     

终止剂法测定胆红素氧化酶活性

以L-抗坏血酸(Vc)为终止剂改进的经典胆红素氧化酶(BOD)酶活测定方法.反应体系:0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液,含50 mmol/L甘露醇,pH 8.1,总体积3 mL,30μL胆红素贮存液,10μL酶液.25℃反应3 min,加入50μL 50 g/L的Vc,终止酶催化反应,440 nm测定光吸收.同时加入空白对照组.终止剂法只需一般的分光光度计,操作方便,数据重复性更高,可以同时测定多个样品.     

一种利用甘氨酸氧化酶生产乙醛酸的方法

为实现生物法工业化生产乙醛酸,采用基因工程技术对甘氨酸氧化酶（ThiO）进行表达优化,使用SDS-PAGE电泳手段验证ThiO的可溶性表达,通过全细胞转化法检测重组菌体生产乙醛酸的能力,并优化了反应条件,在放大体系中考察其应用性。结果表明：构建的菌株Bacillus subtilis 168（pP43NMK-ThiO）...     

葡萄糖氧化酶介导的癌症多模态协同治疗研究进展

简要介绍了葡萄糖氧化酶（GOx）在癌症治疗研究中的单一疗法（包括饥饿疗法（ST）、氧化疗法）、双模态疗法（包括协同化学疗法（CT）、化学动力学疗法（CDT）、声动力学疗法（SDT）、光动力学疗法（PDT）、光热疗法（PTT）、气体疗法、放射疗法），以及GOx介导的多模态联合疗法（协同免疫疗法/CDT/PTT/SDT），系统地阐述了GOx介导的相关癌症治疗研究的进展和最新动态.     

菠菜乙醇酸氧化酶基因家族的鉴定及表达分析

在菠菜全基因组中鉴定了菠菜(Spinacia oleracea L.)乙醇酸氧化酶(GLO)家族成员,并对其理化性质、亚细胞定位、基因结构、保守基序、同源关系及基因表达进行了分析,发现菠菜中存在5个SoGLOs蛋白,通过进化树分析,菠菜GLO蛋白与甜菜GLO蛋白亲缘关系较近.通过基因结构分析发现该家族基因由9～11个外显子构成.实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)结果表明:硝态氮仅能短期诱导SoGLOs的表达,而铵态氮可以持续抑制SoGLOs的表达,从而影响菠菜草酸的含量.在胁迫处理后,SoGLOs的表达均有明显变化,SoGLO1,SoGLO3和SoGLO5对盐胁迫的响应最明显,SoGLOs可能在菠菜的抗盐、耐高温、耐寒、抗旱以及抗氧化过程中起作用.植物激素的喷施普遍使SoGLOs的表达在短时间内增加,这可能引起菠菜体内草酸的快速积累.     

NADH氧化酶的研究进展

NADH氧化酶是一类催化NADH氧化为NAD+并消耗氧气的氧化还原酶,因其能够再生NAD+而成为人工调控微生物代谢流向的重要调控酶.文中综述了NADH氧化酶的分类、理化性质、反应机制,并分析NADH氧化酶清除细胞内氧毒性、介入细胞代谢过程,以及调节细胞生理和代谢等重要的生理功能.