玉米幼苗两种形态建成中3个生化指标的比较研究

采用ＰＡＧＥ方法，对玉米幼苗和暗形态建成过程中ＥＳＴ、ＰＯＤ各可溶性蛋白进行比较研究后发现：光促进分化而抑制生长，暗则与此正相反；光或暗条件下各自都有部分基因特异性表达，植物能够适应光与暗的环境，进行形态建成。     

Shewanella haliotis BP-1海藻酸裂解酶基因的克隆表达

【目的】了解海洋细菌Shewanella haliotis BP-1中海藻酸裂解酶降解海藻酸钠的生物活性。【方法】应用基因克隆和大肠杆菌异源表达技术,过量表达海藻酸裂解酶,将粗酶液通过DEAE Sepharose FF柱分离纯化后检测其酶活性。【结果】从S.haliotis BP-1菌株的基因组DNA中克隆得到一个大小为2 157bp的海藻酸裂解酶基因Alg17S,该基因编码的海藻酸裂解酶Alg17S属于PL17家族的蛋白,大小为79 726Da,其中包括N端26个氨基酸的信号肽,与Saccharophagus degradans 2-40菌株产生的海藻酸裂解酶Alg17C具有高度同源性,相似性为52%。经纯化后获得的重组酶Alg17S和△snAlg17S(N端不含26个氨基酸的信号肽)均具有降解海藻酸钠的活性,但△snAlg17S对海藻酸钠的催化活性比Alg17S高,其酶比活力高达9 635U/mg。【结论】重组海藻酸裂解酶△snAlg17S兼具高表达水平及高酶活性,是进一步研究海藻酸盐糖化和生物燃料生产的潜在的优势酶。     

构建杂化酶体系解析对羟基苯乙酸脱羧酶小亚基的功能

对羟基苯乙酸(HPA)脱羧酶是一类甘氨酸自由基脱羧酶,催化前体对羟基苯乙酸或吲哚乙酸的脱羧反应,形成终产物对羟基甲苯和对甲基吲哚。由于其蛋白质结构中小亚基(HpdC)的存在,使其显示了一些不同于其他已知的几种甘氨酸自由基体系的特性,被认为是一类新型的甘氨基自由基酶体系。前期的研究结果初步显示了HpdC在整个脱羧酶体系中的重要性,但缺乏系统的实验验证。通过构建系列杂化脱羧酶(包括组合杂化酶体系与嵌合杂化酶体系)高表达质粒,对相应的编码蛋白质进行分离纯化以及酶活性检测等,探究了小亚基在整个脱羧酶体系中的功能。研究结果证明,小亚基HpdC的存在,一方面直接影响整个编码蛋白质的溶解性及复合物的稳定性,另一方面则通过介导脱羧酶高级聚合状态的形成,决定着酶的催化活性。     

天津滨海新区法国梧桐展叶期生理生化特性研究

为了了解重盐分胁迫地段植物展叶期的生理生化特性变化,于春季在南开大学滨海学院选择长势较好和长势较差的法国梧桐作为研究对象,从早8:00到晚20:00,每两小时采集植物的根、枝、叶(各3次重复),分别测定分析了水分生理和保护酶活性的变化.结果表明,可溶性糖与组织水势的相关性不显著,可溶性蛋白与组织水势呈显著的线性正相关:SOD活性与组织含水量呈显著的线性正相关,CAT活性与组织含水量呈显著的线性负相关,POD与组织含水量呈相关性不显著,此时较高的组织含水量伴随较高的保护酶活性,这既反映了植物稀盐的抗逆性,又反映了保护酶清除活性氧自由基的耐逆性.分析表明,重盐分地段植物体内保护酶活性不但与盐分胁迫程度有关,而且与植物生长活力有关.     

产纤溶酶菌株的分子鉴定及其液体产酶特点分析

通过对实验室分离筛选出的2株产纤溶酶能力较强的细菌菌株进行16S rRNA碱基序列测定,并与已发表的16S rRNA序列进行对比分析,确定2个菌株均属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).在此基础上,对2个菌株液体发酵产纤溶酶的特点进行了对比分析.实验结果表明,2个菌株适宜的发酵产酶时间均为60～108 h.在优化的液体发酵条件下,2个菌株单位发酵液中纤溶酶平均产量可分别达到773.07 U/mL(菌株1)和962.28 U/mL(菌株2).     

基于离散量算法预测酶的亚类

从酶的一级序列出发,以20种氨基酸和其紧邻与次邻的氨基酸二联体在序列中出现的个数为参数,用离散量算法对酶的亚类进行预测.通过用Self-consistency和Jack-knife两种检验方法检验时,均获得较好的预测精度.结果表明该方法新颖、简单、有效.     

复合酶解法提取的天然杜仲胶结构及提胶效率分析

以复合酶解处理的杜仲树叶、皮、籽为原料,石油醚为溶剂,在一定温度下进行提胶,采用偏光显微镜、核磁氢谱、凝胶渗透色谱对杜仲原丝、所提取产物的结构进行了表征,并对产物相对分子质量和提胶效率进行了研究.结果表明,提取出的杜仲胶中几乎不含有顺1,4聚异戊二烯,具有较大的相对分子质量,达30万～40万.     

马铃薯贮藏蛋白Patatin及其突变体分子动力学和分子对接的研究

马铃薯贮藏蛋白Patatin具有水解脂肪的能力,且特定位点的突变能够影响Patatin的水解酶活性.Patatin的水解酶活性中心是由Ser77和Asp215组成,首先采用分子动力学方法研究Patatin及其突变体的稳定性和构象变化,通过结构比对没有发现构象规律性的变化,然后采用分子对接方法,发现了两个基团(Patatin及其突变体活性位点Ser77的羟基与底物p-硝基苯基癸酯的酯键)间的距离具有规律性:即H109A和D182A(活性减弱)两个基团之间的距离偏大,而R368A,E140A,H109N(活性增强)两个基团之间的距离偏小,符合之前的生化数据.这说明Ser77的羟基与底物PNPC10的酯键间的距离可能能够影响底物小分子与Patatin蛋白的结合,从而影响Patatin酯酶的活性.同时,根据细胞内溶质磷脂酶A2(cPLA2)反应过程,我们推测了Patatin与底物之间可能的催化机制.     

酶法提取方格星虫多糖的条件及优化

【目的】确定胰蛋白酶酶解法提取方格星虫(Sipunculus nudus)体壁中水溶性多糖的最优条件。【方法】分别从料液比、浸提温度、浸提时间、浸提pH值、酶底比等5个方面进行了初步研究。研究分为两部分进行,先确认提取方法中各单因素的最优条件,再根据单因素试验结果选取4个主要因素(料液比、浸提温度、浸提pH值、酶底比),进行四因素三水平的正交试验,得到方格星虫水溶性多糖水提法的最佳组合。【结果】正交试验结果表明:对方格星虫多糖提取率影响最大的为浸提温度,其次是pH值和料液比,影响最小的为酶底比。最佳浸提条件为:温度60℃、pH值8.0、料液比1∶12g·mL-1、酶底比为2.0%、时间3h。【结论】在最优浸提条件下,方格星虫水溶性多糖酶提法所得的最佳提取率为1.59%。此方法高效稳定可行,能有效提高方格星虫的多糖提取率。     

猪肺血管紧张素转化酶分离纯化的工艺优化

血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme, ACE)存在于生物体组织和血液中,并在血压调控方面发挥着重要作用,高效分离纯化ACE对研究其结构和功能具有重要意义。文中将猪肺匀浆液进行酶解处理,优化浆液比、盐析初始蛋白浓度等条件,并经盐析、透析和离子交换层析等步骤,得到高活性的ACE。当猪肺以1：3浆液比匀浆并经胰蛋白酶处理1 h后,其总酶活可增加27.06%;匀浆后初始蛋白浓度为3%时进行盐析,同时将废弃的一级盐析沉淀蛋白再回收处理,盐析过程粗酶纯化倍数为3.94倍,总酶活回收率可达73.73%,较常规处理提高了24.33%以上,经离子交换层析后,ACE酶比活为0.1303 U/mg,总酶活回收率为59.14%。 ACE酶学性质研究表明,ACE的最佳反应温度为42℃,最适pH为8.3。由酶促反应动力学方程计算得到的猪肺ACE的米氏常数Km为1.521 mmol/L,最大反应速率Vmax为17.301 nmol/min。新分离纯化工艺可使ACE收率大大提高。