《分子克隆实验指南》(第3版)

作者:J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔译者:黄培堂等出版单位:科学出版社出版日期:2002年8月定价:168元     

中国人HLA-G1的cDNA克隆、序列分析、表达和蛋白质空间结构预测

从中国人外周血单个核细胞、胎盘组织和肝癌组织等样品中克隆了包含完整HLA-G1读框的cDNA;与国外同行获得的该基因及其蛋白质序列比较分析表明,该基因虽然有着细微的种族特异性,但高度保守;并获得了它的截断型重组蛋白,根据蛋白一级结构和同源比较方法,模建了它及其与特异性受体KIR2DL4形成复合体的空间结构模拟,预测了它们之间相互作用的特征.     

以胚胎干细胞为核供体能促进异种重构胚的体外发育

体细胞在异种成熟的去核卵母细胞中能够去分化和重编程,并能发育到囊胚,甚至能全程发育正常出生。为了评价胚胎干细胞作为供核细胞在异种动物克隆中的意义,以小鼠胚胎干细胞（ES）为核供体,兔成熟的去核卵母细胞为受体构建异种重构胚,分析其在体外的发育能力,并以小鼠胚胎成纤维细胞和成年小鼠外耳皮肤的成纤维细胞为对照。通过核移植的方法分别把3种细胞移入成熟的兔去核卵母细胞透明带下,经电融合和激活后,在体外培养,胚胎干细胞作为供核细胞所构建的异种重构胚在体外发育到囊胚的比例为16.1％,明显高于用成年小鼠外耳皮肤成纤维细胞（0％～3.1％,P<0.05）和小鼠胚胎成纤维细胞（2.1％～3.7％,P<0.05）所构建的异种重构胚的体外囊胚发育率.重构囊胚细胞经染色体分析,证实其染色体来源于小鼠胚胎干细胞。以上结果显示,用胚胎干细胞作为供核细胞,比体细胞作为供核细胞所构建的异种重构胚更容易进行重编程,并且胚胎干细胞指导异种克隆胚胎正常发育的能力强于体细胞。     

哺乳动物异种间体细胞核移植技术进展

自1997年绵羊体细胞核移植成功后,克隆技术发展迅速,克隆技术与胚胎干细胞的结合,产生了治疗性克隆的理念.文中对克隆技术的研究进展、方法和意义作了综述,并重点对哺乳类动物异种间核移植的方法技术和伦理学进行讨论.     

几丁质酶和葡聚糖酶生物学特性及其编码基因的克隆和转化

几丁质酶和葡聚糖酶在植物病害生物防治作用中具有重要的作用，本文着重介绍了几丁质酶和葡聚糖酶的分子生物学方面的特性，以及几丁质酶和葡聚糖酶编码基因的克隆和转化研究概况，将编码几丁质酶和／或葡聚糖酶的基因导入到植物中，能够提高植物抗病能力，导入到植物病害生防直菌或细菌中，可以提高生物防治菌的效果。     

广西产眼镜王蛇毒α-神经毒素基因的分子克隆及序列分析

为获得眼镜王蛇（Ophiophagus hannah，简称Oh）蛇毒α－神经毒素（α-NT）的基因序列，依据眼镜蛇科不同毒蛇种类来源的α－NT基因有较高的同源性，设计1对上下游引物，为克服引物带来模糊扩增，在蛋白编码部分再设计1对上下游特异引物，用Nacleospin RNA Kit法从3条活眼镜王蛇毒腺中提取mRNA，以3′端引物合成的cDNA作为模板进行PCR扩增反应，测定产物的核苷酸序列，得到全长474bp的眼镜王蛇cDNA基因核苷酸序列。该核苷酸序列的信号肽与眼镜蛇树属Pseudonnaja textilis(Pt)、海蛇Laticauda semifasciata(Ls)100%同源，与眼镜蛇南洋亚种Naja sputatrix (Ns)、银环蛇（Bungarus multicinctus)(Bm)96.8%同源；蛋白密码部分有83．3％与Ns、79．2％与Pt、76．4％与Ls、74．1％与Bm同源。信号肽后紧接着的72个氨基酸有90．3％与已发现的眼镜王蛇毒长链α-NT Toxin a同源，大约有73．6％与Toxin b、69．7％与Oh-4、66．7％与Oh-5、56．9％与Oh-6A和6B同源，并与α－银环蛇毒素54．2％同源。说明新发现的眼镜王蛇cDNA是一条长链α-NT基因。     

图像增强的自适应免疫算法

介绍了自适应免疫算法的基本原理及实现步骤，并将其应用到图像的增强处理中，在传统的图像管理处理中，针对图像灰度分布的不同情况，需要定义相应的灰度变换函数。Tubbs将图像增强处理中几种常用的非线性变换函数表示成一个归一化的非完全Beta函数，但确定Beta函数参数仍是一个复杂的问题，本文利用自适应免疫算法来确定该变换函数的最佳参数值，通过对自然图像的仿真实验可以看出本文方法的有效性。     

旋毛虫新生幼虫cDNA文库的构建与鉴定

利用λZAPExpress载体成功地构建了中国猪株旋毛虫分离株Trichinellaspiralis新生幼虫的cDNA文库 ,并对其重组噬菌体质粒pBK—CMV进行酶切鉴定 .结果表明 :所构建的cDNA文库容量为 1 92× 10 6,重组效率为 98 6 % ,所有的克隆片段都在 0 5— 2 0Kb之间 ,说明此cDNA文库几乎覆盖了全部mRNA .     

青岛文昌鱼profilin样蛋白基因的克隆与同源性分析

对青岛文昌鱼神经胚cDNA进行序测，获得了6个profilin样蛋白基因的EST，经拼接得到编码文昌鱼profilin样蛋白基因的cDNA序列并据此演绎了文昌鱼profilin样蛋白的氨基酸序列。对演绎的文昌鱼profilin样蛋白的一级结构进行了分析，对其二级结构进行了预测，并将其与多种真核生物中的profilin进行同源性比较，为profilin分子进化的研究提供资料。