缅怀“多莉”

多莉,这只曾经享受过生命的快乐、并且为全世界带来过无数惊喜的可爱的小绵羊,于2003年2月14日平静安详地离开人世。它的“英年早逝”,引起了人们对克隆动物健康的关注、以及对克隆技术发展前景的再思考。     

新基因ZNF325在人类早期胚胎中的表达

锌指蛋白基因家族是人类最大的基因家族之一，目前已知的很多转录调控因子都是锌指蛋白成员^[1]。初步克隆了一个与RBAK基因有着高度同源性的人类C2H2型锌指蛋白新基因，经国际基因命名委员会批准命名为ZNF325，此基因位于染色体7p22，长2697个碱基，含5个外显子，在基因组DNA上长15kb。它编码的蛋白质全长462个氨基酸，含15个C2H2型的锌指。Northern Bolt分析表明该基因在人类早期胚胎的各个组织中普遍表达，在肺和脑中的表达水平最强，但在肝中的表达随着胚胎的发育而逐渐减少。它的结构和表达特征预示着它编码的是一个具DNA结合功能的转录调控因子。     

水稻含隐性抗白叶枯病基因xa5的24 kb片段的鉴定与基因预测

水稻xa5基因是具有重要研究和育种价值的隐性广谱抗白叶枯病基因. 利用水稻品系IR24及其近等基因系IRBB5(含xa5基因)杂交组合, 构建了含4892个单株的F₂定位群体. 同时, 利用与xa5连锁的RFLP标记筛查含xa5基因的水稻抗性品系IRBB56的BAC文库, 构建了一个覆盖目标基因位点的长约213 kb的跨叠克隆群. 根据国际水稻基因组和中国超级杂交稻基因组序列, 以及跨叠克隆群的部分亚克隆测序, 设计了一系列SSLP和CAPS标记对目标基因进行精细遗传定位. xa5基因定位在2个CAPS标记K5和T4之间且与T2共分离, 标记K5和T4之间的遗传距离为0.3 cM, 物理距离约为24 kb. 对xa5基因所在的24 kb片段DNA序列进行基因预测, 揭示出可能编码ABC转运蛋白和转录因子TFIIA小亚基的2个基因. 对这一区段及其编码基因的功能研究将阐明xa5抗白叶枯病的分子机制.     

影响哺乳动物体细胞克隆效率因素的研究进展

动物克隆技术的低效率在很大程度上限制了它的应用.克隆过程的多步骤决定了影响因素的多样性.综述了体细胞核的重编程、供体细胞的选择、受体胞质、活化方法、培养条件等对克隆效率的影响,对这些问题的认识将有利于对克隆机理的研究.     

哺乳动物异种克隆的研究进展

哺乳动物异种克隆是通过异种核移植和异种妊娠两个种克隆的原理,存在的问题和可能的解决办法进行了阐述,并对近年来本实验室以及国际上该领域中的研究进展作了介绍.     

斜带石斑β-珠蛋白cDNA的克隆和序列分析

从斜带石斑EpinephelusCoioides白细胞cDNA库随机挑取噬菌斑，做为模板，用λTriplEx5'3'长距离插入子筛选引物，进行插入片断的PCR扩增，并进行表达序列探针（ESTs)测定。从中克隆到了血红蛋白β亚基cDNA,cDNA包含长达444bp的开放阅读框，编码147个氨基酸的多肽。用www.expasy.ch网站的compute pI/MW程序计算其可能的相对分子质量为16544，等电点为6.95。其氨基酸序列与草鱼β-珠蛋白Ⅲ的同源性最高，为73.0%。在远端和近端的与血红素结合的组氨酸都是保守的，另外，与其它鱼类及蛙，鸡和人的β-珠蛋白比较，在血红素结合区及亚基结合区的氨基酸残基均是高度保守的。     

哺乳动物克隆的研究进展

哺乳动物体细胞克隆是20世纪末生命科学领域最引人注目的高新技术,该技术在农业、生物学和医药等方面具有广泛的应用前景。近年来克隆技术发展迅速,多种哺乳动物相继克隆成功,但也存在着克隆效率太低、克隆动物表型正常而实质异常等问题。本文在近年来克隆技术研究的基础上,对克隆的概念、研究历史以及克隆的方法、过程进行了综述,展望了克隆的意义及克隆动物的应用前景,分析了目前克隆技术尚存在的问题,并提出了解决这些问题的关键。     

用长臂光敏生物素标记的cDNA探针核酸斑点杂交检测马铃薯纺锤块茎类病毒

用长臂光敏生物素标记含有马铃薯纺锤块茎类病毒（Ｐｏｔａｔｏｓｐｉｎｄｌｅｔｕｂｅｒｖｉｒｏｉｄ，ＰＳＴＶｄ）双拷贝ｃＤＮＡ的重组质粒ｐＳＴ－Ｂ１４，制备成光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针，用核酸斑点杂交检测感染ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片和块茎提取物均出现较强的阳性杂交信号，而健康马铃薯为阴性．试验结果表明：光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针检测感染ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片汁液最高稀释度为１１２８     

草珊瑚单细胞克隆的平板培养

在草珊瑚细胞克隆的平板培养中，很多因素能影响其植板率。ＫＴ，２，４—Ｄ及ＮＡＡ能提高草珊瑚细胞克隆的植板率，这三种激素对细胞生长的最佳搭配是ＫＴ０．４ｍｇ／１，２，４－Ｄ０．８ｍｇ／ｌ，ＮＡＡ０．２ｍｇ／ｌ；草珊瑚细胞悬浮继代数不同，其植板率相差甚远，用悬浮培养第２代的细胞做材料最好；最适细胞克隆生长的培养基ｐＨ值为５．８；细胞植板密度低于每毫升５００个细胞时，几乎没有克隆形成。     

水稻花药特异表达基因启动子的扩增及克隆

采用ＤＮＡ聚合酶链式反应扩增技术，以水稻黄化苗总ＤＮＡ为模板成功地扩增到水稻花约特异表达基因扇动２子Ｏｓｇ６Ｂ的７７０ｂｐ和９６０ｂｐ两个片段Ｏｓｇ６Ｂａ和Ｏｓｇ６Ｂｂ。并将其克隆到ｐＵＣ１８上形成完整的Ｏｓｇ６Ｂ，这为通过基因工程方法进行水稻杂种优势利用奠定了基础。