运用农杆菌介导的瞬时表达体系研究PDS基因沉默

农杆菌介导的瞬时表达体系是一个研究整株植物基因沉默的快速实用系统.本文介绍了运用该系统研究马铃薯X病毒诱导烟草(Nicotiana benthamianan benthamiana)八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因的沉默问题.实验结果表明:携带有与PDS基因同源的409个碱基大小的cDNA片段的重组的马铃薯X病毒载体抑制了内源的PDS基因的表达.     

一个烟草Mlo基因的电子克隆及其序列特性分析

电子克隆并探讨了一个烟草Mlo基因的结构和功能．以GenBank公布的水稻Mlo基因序列为信息探针对烟草的EST数据库进行同源搜索,并将获得的同源性高的EST序列进行序列拼接,最后得到了一个烟草Mlo基因的cDNA序列．采用生物信息学方法分析该基因编码蛋白的一级、二级结构,并对其功能进行预测．结果表明,此烟草Mlo基因...     

过表达本氏烟基因NbPAP2对转基因植物生长发育的影响

为探究紫色酸性磷酸酶基因在本氏烟草中所发挥的生物学功能,该研究利用生物信息学软件发现本氏烟NbPAP2与拟南芥AtPAP2的氨基酸同源性达到64.2%,其具有特征性的信号肽和靶向叶绿体的C端疏水基序以及双核金属离子中心. qRT-PCR结果显示NbPAP2在植物中组成性表达,花瓣中表达量最高,测定叶片气孔导度平均提高30.5%、净光合速率平均提高23%,然而蒽酮比色法测定糖平均含量下降21%.因此,NbPAP2通过介导碳代谢促进本氏烟草花期提前、生物量提高、种子体积增大等.     

烟草和元麦叶肉原生质体吸收尼古丁机制的研究

用EA_3-867纤维素酶分离的烟草(Nicotianatabacum)和元麦(Hordeumdistichon)叶肉原生质体,分别保温在尼古丁溶液中,用紫外分光光度计测定它们对尼古丁的吸收。结果表明,这两种原生质体能迅速地吸收尼古丁;原生质体吸收尼古丁的量,随介质尼古丁浓度的升高而增多;在生理学pH范围内,介质的pH对原生质体吸收尼古丁没有多大的影响。初步认为,这两种原生质体对尼古丁的吸收是一种简单的扩散机制。     

烟草与TMV不同互作中PAL活性变化

漂盘培育云烟87和三生烟,苗期接种TMV后0h,12h,24h,36h,48h,60h和72h分别取样测定其叶片和根系中PAL的活性,并以未接种TMV烟苗叶片和根系中PAL的活性为对照.结果表明：烟草与TMV非亲和性互作时,叶片和根系中PAL活性上升速度比烟草与TMV亲和性互作时PAL活性上升速度快;烟草与TMV无论是亲和性互作还是非亲和性互作,烟草叶片中PAL活性升高速度快于根系中PAL活性上升速度.     

农杆菌介导的大豆反义fad2-1基因转化烟草研究

以烟草无菌苗叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,将大豆反义油酸脱饱和酶基因导入烟草中,经梯度卡那霉素筛选,获得可在含75mg/L卡那霉素选择生根培养基上再生的抗性植株75株,其中67株抗卡那霉素植株的PCR分析扩增出目的片段;RT-PCR分析表明该基因在烟草中表达.结果表明大豆反义油酸脱饱和酶基因在烟草基因组中整合和表达.这为大豆反义油酸脱饱和酶基因转入大豆和表达奠定基础,也为烟草基因工程育种提供了依据.     

Cloning of two plastid division ftsZ genes from Nicotiana tabacum and their expression in E.coli

Two cDNAs of plastid division gene NtFtsZ1-1 and NtFtsZ1-2 are isolated from Nicotiana tabacum by RT-PCR and rapid amplification cDNA ends (RACE) method. Analysis of the deduced amino acid sequences encoded by NtFtsZ1-1 and NtFtsZ1-2 indicate that these two proteins possess the typical conservative motifs and GTP binding sites existing in all FtsZ proteins. The existence of putative plastid transit peptide in their N-terminal suggests that there are at least two transit-peptide containing FtsZ proteins in higher plants. Phylogenetic analysis based on amino acid sequences of FtsZ proteins also supports this interference. These two NtFtsZ genes demonstrate a similar expression pattern during the plant development, detected by Northern blot. Expression of NtFtsZ1-1 and NtFtsZ1-2 in E.coli interrupts the normal division process of host cells. These results suggest the diverse functions of FtsZ proteins in higher plants.     

烟草叶片蔗糖酶的化学修饰

采用PMSF、NBS、IAc、BrAc、SUAN、TNBS、PCMB、DTT等8种化学修饰剂在一定的条件下选择性修饰蔗糖酶,研究烟草蔗糖酶分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系.结果表明:PMSF、NBS、PCMB等3种化学修饰剂能显著地抑制酶的活力,而BrAc、IAc、TNBS、SUAN、DTT等对酶的活力影响不大.说明对丝氨酸残基、色氨酸残基和巯基的化学修饰后对酶的活力影响很大,而酶分子中的组氨酸残基及赖氨酸残基不在酶的活性中心,修饰后对酶的活力没有直接影响.     

烟草内源细胞分裂素变化与植株形态发育的初步研究

农杆菌介导将异戊烯基转移酶基因(isopentenyl transferase,ipt)导入烟草SD株系的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得转基因植株.酶联免疫吸附(ELISA)测定叶片内源玉米素核苷(ZR)、异戊烯基腺苷(iPA)和吲哚乙酸(IAA)的质量分数.结果表明:转基因株系的ZR和iPA的质量分数w不同程度地升高,IAA水平随之升高.高水平细胞分裂素导致叶片的气孔密度增加、气孔长度和花型大小减小,以及花粉萌发率降低.当w(iPA+ZR)与w(IAA)的比值大于2时,成年植株上部侧枝茎端生长发育异常,出现丛生状小叶.本文讨论了细胞分裂素水平和细胞分裂素与生长素的比值对转基因烟草生长发育的影响.