南五味子叶绿体DNA的提取

<正>随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)是在DNA水平上进行遗传标记的常用分析方法之一。在操作过程中,DNA的提取质量是影响实验结果最为关键     

信息放大显型技术—应用与前景

信息放大显型(Message Amplification phenotyping:MAP-Ping)是在 PCR(polymerase Chain Reaction)基础上发展起来的分析微量细胞中 mRNA 表型的新技术。此法灵敏快速、简便省时,已广泛用于生物、医学研究和癌症及代谢性疾病的诊断。是具有广阔应用前景的新技术。本文对其基本原理技术要点,应用现状和前景作了介绍。     

对赤点石斑鱼多态性微卫星位点的跨种扩增和特征分析

利用近缘种中已发表的微卫星DNA标记引物,对赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)进行跨种PCR扩增,得到12个多态位点,其等位基因数目从2到20不等;表观杂合度范围是0.222～0.861,平均为0.595;期望杂合度范围是0.200～0.932,平均为0.637.数据分析结果表明,在经过邦佛伦尼校正(Bonferroni correction)后,这些微卫星位点均符合哈迪温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium),并且各位点两两之间不存在显著的连锁不平衡(linkage disequilibrium)现象.因此可以认为,这12个多态性微卫星位点是研究赤点石斑鱼种群遗传结构的良好分子标记.     

黑麂粪便DNA的简易提取方法

收集九龙山自然保护区野外自然条件下的黑麂粪便样品,用无水乙醇保存于-70℃冰箱,经十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）裂解液温浴粪便、酚／氯仿抽提及聚合酶链反应（PCR）纯化试剂盒纯化等步骤提取黑麂粪便DNA,并扩增线粒体DNA细胞色素b基因和2个微卫星位点进行检测;同时提取黑麂肌肉和皮毛样品的DNA作为对照．结果显示,该方法可以从粪便中提取到高质量的黑麂DNA,并可进行有效扩增,为黑麂及其他濒危鹿科动物的非损伤取样提供了一种简易方法．     

大鼠胚胎神经干细胞体外培养及诱导分化

神经干细胞在理论研究和临床应用上有着广泛的前景.本文主要在体外分离培养SD大鼠胚胎前脑的神经干细胞,并分别用去除生长因子或添加全反式维甲酸(ATRA)两种方法诱导分化.免疫荧光染色技术分别检测细胞巢蛋白(Nestin)的表达及分化后β微管蛋白Ⅲ(β-Ⅲtubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计算分化率.结果显示:细胞生长状态良好,呈Nestin表达阳性.分化后可获得β-Ⅲtubulin及GFAP表达阳性的细胞,其中ATRA诱导方法获得β-Ⅲtubulin阳性细胞较多.     

匍匐茎草本蛇莓RAPD反应体系优化

为了建立蛇莓RAPD反应的最佳反应体系,我们对每个反应因子进行优化研究。在本实验室常用的RAPD反应体系的基础上,根据RAPD扩增效果确定蛇莓基因组DNA的最佳RAPD反应体系。经优化后,我们建立了适合蛇莓的最佳RAPD反应体系:25μL反应体系中含10×Buffer 2.5μL,2 mmol/L Mg2+,1.5 UTaqDNA聚合酶,50 ng模板,0.22 mmol/L dNTPs,0.35μmol/L随机引物S30。本研究结果为下一步野生蛇莓遗传多样评估奠定基础。     

鹀科8种鸟类遗传多样性及亲缘关系的AFLP分析

应用扩增片段长度多态性(AFLP)技术研究鹀科8种28只鸟类的亲缘关系及遗传多样性. 28只个体分为两类, A类包括所有鹀属鸟类, B类包括铁爪鹀属和雪鹀属的铁爪鹀和雪鹀. 将A和B类中的不同物种分为不同分支: 栗斑腹鹀与三道眉草鹀和白头鹀为一支, 芦鹀、 红颈苇鹀和苇鹀为一支, 结果表明它们之间具有较近的亲缘关系. 其中雪鹀和铁爪鹀位于分支的最底部, 支持了其应从鹀属中分离的观点.     

PCR扩增黄鳝和刺鳅SRY盒基因

性别是从酵母到人类几乎所有真核生物所共有的性状,性别决定机制的探索一直是生物学研究的热点之一,其研究工作涉及遗传、发育和进化等领域,它不仅具有重要的理论意义,而且对实现动物性别的人为控制,对认识人类性分化异常等多种与性别有关的疾病,准确地进行产前性别诊断和预防性连锁疾病等都有重大的现实意义,同时,对性别这一在进化上保守性状进行深入研究,将会为生物的进化分析提供新的线索。近年来,在人和哺乳动物性别决定机制的研究方面,已取得突破性进展。位于Y染色体上的SRY基因被认为是性别决定的关键基因。在胚胎发育过程中,它决定着睾丸的形成,由此决定着个体向男(雄)性方向发育。最近的研究表明,在其他染色体上以及在进化程度明显不同的物种中,也广泛存在SRY的同源基因。这些拟SRY基因现已被命名为SRY盒(SRY-box)或者SOX基因。鱼类约占脊椎动物种数的一半,作为较低等的脊椎动物,是从水生到陆生进化上的一个重要环     

一种简便、高效的实时荧光PCR 相对定量方法的建立

摘要: 目的建立一种简便、高效的实时荧光PCR 相对定量方法。方法采用严格一致的引物参数,对Fabp5、 Ppar-α 及β-Actin 三个基因分别设计特异性扩增引物,制备相应的质粒标准品,10 倍梯度稀释后制作标准曲线。并以这三个标准曲线分别单独定量正常小鼠肝组织、H-ras12V 转基因小鼠肝肿瘤周围组织和肿瘤组织中的Fabp5、Ppar-α 和β-Actin 的表达水平,以β-Actin 为内参,分别采用双标准曲线法、2 － △△Ct 法和单标准曲线法对Fabp5 和Ppar-α 的表达进行相对定量分析。结果单标准曲线法与双标准曲线法测定的Fabp5 和Ppar-α 差异性表达的相对定量值没有显著差异,而用2 － △△Ct法获得的相对定量值与双标准曲线法相比,波动较大。结论在引物参数严 格一致的基础上,单标准曲线法是一种可行、简便、高效的实时荧光PCR 相对定量方法。