枝状枝孢霉MD2的Unigene A03231的克隆及原核表达分析

为研究真菌紫杉醇合成相关基因的功能,从产紫杉醇真菌枝状枝孢霉MD2中克隆了Unigene A03231的DNA和c DNA全长序列(918 bp).结果表明:该基因不含内含子,其编码产物含305个氨基酸,与短链脱氢酶/还原酶一致性为64%,预测蛋白分子量为33071.5 Da,不存在信号肽,含有2个跨膜结构.Unigene A03231以单拷贝形式存在于基因组,在0~30 h内其表达水平随茉莉酸甲酯诱导表现为先升高后降低.构建了该基因的原核表达菌株,初步优化了其在大肠杆菌BL21中的诱导表达条件为:诱导温度28℃,IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导时间8 h.为深入分析该基因的催化功能奠定了基础.     

香菇UGPase酶活性及转录表达水平对不同碳氮源的响应

【目的】尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 (UDP-glucose pyrophosphorylase,UGPase)是糖代谢途径中的关键酶,在生物体次生代谢产物合成过程中具有重要的作用,对其进行深入的研究,将有助于阐明糖代谢的分子机制。【方法】本实验以香菇新808为实验材料,设置不同的碳、氮源对香菇菌丝体进行液体发酵培养（25 °C,30天）,烘干菌丝体称取其生物量,利用苯酚-硫酸法测定菌丝体胞内多糖含量,通过荧光实时定量PCR检测不同碳氮源下菌丝体ugp基因的相对表达量,同时测定UGPase酶活性。【结果】结果表明,与普通PDA培养基比较,除以硝酸铵为氮源外,其余碳氮源均能提高香菇菌丝体生物量,其中以麦麸为碳源的生物量最大（0.63g）。以小分子糖（蔗糖、麦芽糖和甘露糖）为碳源、有机复合物（麦麸和黄豆芽）为氮源时,ugp基因表达量明显上调,UGPase酶活性更高,同时,其香菇菌丝胞内多糖的含量也更高。其中分别以蔗糖为碳源,以麦麸作为氮源时,ugp基因表达量、UGPase酶活性（分别为4043.80U/mg和3873U/mg）和菌丝胞内多糖含量（分别为3.60%和3.86%）最高,ugp基因表达量分别为对照组的8.19倍和6.52倍。【结论】香菇菌丝ugp基因转录表达水平、UGPase酶活性以及菌丝胞内多糖含量三者之间显示出较高的正相关性。小分子碳源（蔗糖、麦芽糖和甘露糖）、有机氮源（麦麸和黄豆芽）有助于香菇菌丝多糖的合成,其中蔗糖和麦麸可作为香菇液体发酵优势碳源和氮源。     

脑心肌炎病毒pCMV-HA-VP2表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的:构建脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis Virus,EMCV)衣壳蛋白VP2基因的真核表达载体pCMV-HA-VP2,并在HEK293细胞中表达.方法:提取EMCV的总RNA,RT-PCR扩增VP2基因,酶切后构建带HA标签的真核表达质粒pCMV-HA-VP2,运用脂质体介导法将其转染至HEK293细胞中,分别进行过表达检测、Westernblotting分析及IFA检测来验证VP2基因的转录及表达情况.结果:重组表达载体pCMV-HA-VP2构建成功,转染至HEK293细胞中,VP2蛋白和HA标签融合表达成功.结论:EMCV衣壳蛋白VP2基因的真核表达载体pCMV-HA-VP2在HEK293细胞中的成功表达,为EMCV衣壳蛋白的功能研究提供理想的实验材料,同时也为EMCV感染机制及其受体研究奠定基础.     

极端嗜热菌Thermosipho melanesiensis普鲁兰酶基因的异源表达与酶学性质分析

选择来源于极端嗜热菌Thermosipho melanesiensis(DSM12029)的普鲁兰酶基因,以购自德国菌种保藏中心的基因组为模板,扩增出普鲁兰酶基因TM-pulA;利用酶切酶连构建了重组质粒pET21a-TM-pulA;转入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中诱导表达并经纯化后,进行了水解产物分析和酶学性质测定.结果显示:TM-pulA为Ⅰ型普鲁兰酶,最适pH为5.8;最适温度是80℃;70℃下半衰期为4.75 h;Mn~(2+)、Co~(2+)、AL~(3+)、Fe~(3+)、SDS及EDTA对其酶活有不同程度的抑制作用;该酶的K_m、V_(max)、K_(cat)及K_(cat)/Km值分别为4.68 g·L~(-1)、0.0085 mmol·L~(-1)·s~(-1)、71.18 s~(-1)、15.21 L·g~(-1)·s~(-1).     

汉语成语中的空间量研究

成语中的空间量有大与小、客观与主观、明确与模糊、具体与抽象等种类;在一条成语中,空间量常与其他某一种量(物量、时间量、动量或程度量)搭配;成语描写空间量具有显著性与隐蔽性、静态性与动态性、借具体的空间量表达抽象的空间量、属性相同的或相反的空间量配用、空间量形成对比等特点;空间量具有语义、语法和语用等作用;抽象空间量的表达得力于隐喻;成语描写空间量有词汇、语法和修辞三大手段。     

一种基于深度学习算法的电网故障诊断方法

电网故障原因复杂,开关和保护的误动、拒动以及信道的信号干扰均会给传统的浅层智能模型带来困难,所以需要从更深入的层面表征电网故障,并对其进行故障诊断。针对这一问题,本文提出一种基于深度学习算法的电网故障诊断方法,该算法利用由Convolution层、Pooling层、Flatten层及MLP层构成的深度网络结构,对电网故障信息进行学习并获得对应的诊断模型。试验表明PGFD-DL算法具有更高的稳定性与精度。     

水稻基因ST1的克隆及原核表达

指出了基因ST1是决定水稻柱头和花柱形成的关键基因,属于水稻中的XHS基因家族.将ST1的全长cDNA序列构建到原核表达载体pET-28a中,并转化了表达菌株大肠杆菌BL21.经Western bolt验证表明:所表达80 kD蛋白即为目的蛋白,为后续的蛋白功能等研究提供了实验基础.     

游戏作品法律定位变化及展望

【目的】为促进司法实践的发展，为游戏作品提供法律保障，有必要对游戏作品法律定位进行研究。【方法】运用案例分析与比较研究的方法，对我国司法实践进行分析。【结果】在司法实践中，游戏作品法律定位因纠纷所针对游戏内容与表达形式的不同而有所不同，且在不同时期存在着不同的问题。【结论】著作权法应该区别对待游戏的内容与表达形式，内容主要包括技术实现与画面实现两个方面，表达形式包括游戏画面与游戏音乐两部分，应将游戏的具体规则的表达归入内容中，纳入保护范围。基于司法实践中的不足和对于游戏作品保护的欠缺，倡导应该将游戏作品统一归类，在著作权法上予以规定，进行保护。     

Cartogram图的制作与应用研究

Cartogram图是以制图者特别强调的量来代替地理实体面积的地理分布图,是地图和统计图结合的产物,其以面积来表现特定属性值,通过面积变形使得读者能够识别出对应地理区域的特征值。该文总结了Cartogram图的研究背景,给出Cartogram图的概念和特点,分析了Cartogram图的信息表达特点,研究了Cartogram图的制作方法和流程,最后就Cartogram图适合的应用领域进行制图实验和结果分析。     

对习近平形象化反腐表达的理性认识

习近平总书记近年反腐的形象化表达，从反腐主体领导干部“打铁还需自身硬”，反腐对象“‘老虎’‘苍蝇’一起打”，反腐路径“把权力关在制度的笼子里”等视域，为中国共产党反腐倡廉、拒腐防变工作厘清了思路，指明了方向。理性认识这些表达和思路，有助于各级领导干部自觉做到警钟长呜，拒腐蚀、永不沾。