PCR-ELISA和PCR-PAGE法检测血液肿瘤细胞株的端粒酶活性

目的：通过端粒酶聚合酶链反应—酶联免疫测定(PCR—ELISA)和聚合酶链反应—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR—PAGE)方法检测血液肿瘤细胞株HL—60、K562、Raji的端粒酶活性，探讨其临床应用价值。方法：PCR—ELISA方法是将端粒重复序列PCR变性产物与地高辛标记且对端粒重复片段特异的探针杂交，杂交产物通过ELISA进行测定。PCR—PAGE法是将端粒重复序列PCR产物直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过硝酸银染色测定端粒酶活性。结果：在端粒酶PCR—ELISA方法检测中，PCR在25-35次循环之间，吸光度A值与循环次数呈线性关系，35-45次循环己达到平台期。PCR—ELISA法检测显示HL—60、K562、Raji细胞均表达高水平的端粒酶活性，吸光度A均值分别为2．362、2．336、2．145。对HL—60、K562、Raji细胞的端粒重复序列扩增的PCR产物直接进行PAGE电泳、银染均呈现3条以上间隔6bP的特征性阶梯状条带。结论：对端粒重复序列PCR产物可同时进行ELISA检测和PAGE—银染，两种方法均可用于恶性肿瘤的临床诊断，ELISA法更为灵敏而简单，且可相对定量。     

氮磷营养元素对多环芳烃降解的影响研究

多环芳烃是一类普遍存在的环境污染物。本文研究探讨了氮、磷两种营养元素对湿地底泥降解多环芳烃的影响。结果表明,湿地底泥中本底浓度的氮和磷已经能够满足三环和四环多环芳烃的降解,外加氮磷对五环的苯并芘降解具有显著的促进作用。变性梯度凝胶电泳分析显示随着营养元素的添加菌群的种属多样性呈下降趋势。功能基因分析显示底泥中nidA基因的表达在多环芳烃降解中发挥重要作用。     

除草剂丁草胺对虎纹蛙成体红细胞的DNA损伤

以栖息于水田的虎纹蛙(H op loba trachus rugu losus)成体为研究对象,用碱性单细胞凝胶电泳方法(或慧星试验,SCGE)对暴露在不同质量浓度的丁草胺(4.25×10-3,8.50×10-3,4.25×10-2,8.50×10-2,0.43,0.85,1.70,5.10 m g/L)溶液中的红细胞进行了遗传毒性的检测.结果表明,在实验室条件下,随着农药质量浓度的增加,红细胞的DNA损伤程度随之增加;在丁草胺质量浓度为4.25×10-3m g/L时,虎纹蛙红细胞的DNA损伤程度与对照组无统计学差异(P>0.05);当质量浓度为8.50×10-3m g/L的丁草胺处理1.5 h,就会造成显著的损伤(P<0.05);丁草胺的剂量与DNA损伤程度呈显著的线性关系:细胞的损伤率:y=12.129 x 20.084,r=0.919,P<0.01;AU:y=33.684 x 56.698,r=0.885,P<0.01.研究表明丁草胺对两栖动物具有遗传毒性作用,在检测环境污染物对两栖类的遗传毒性方面,碱性单细胞凝胶电泳分析是一种合适的方法.     

Preparation of protein samples for gel electrophoresis by sequential extraction

Since preparation and solubilization of protein samples are crucial factors in proteome research,the authors established a sequential extraction technique to prepare protein samples from the body wall of the 5th instar larvae of silkworm.Bombyx mori.Two kinds of protein samples were obtained from the body wall using the method.Between the two types of samples only about 15% proteins were identical;the majority were different,indicating that more species of proteins could be obtained with the sequential extraction method;which will be useful for preparation of protein samples for proteome study.     

幼年和成年小白鼠胸腺LDH同工酶谱变化的电泳分析

用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳方法分析了不同时期幼鼠和成年鼠胸腺的ＬＤＨ同工酶谱变化,结果表明,成年鼠胸腺ＬＤＨ酶谱的５种带是以ＬＤＨ４和ＬＤＨ５带占主要优势,幼鼠胸腺ＬＤＨ酶谱只显现ＬＤＨ１和ＬＤＨ２两条带。同工酶谱的变化说明,我腺ＬＤＨ同工酶显现的为心酶谱,它与Ｂ基因表达有关;成年鼠胸腺ＬＤＨ同工酶显示的是肌型酶谱。它民Ａ基因表达为主有关。     

应用单细胞凝胶电泳技术测定农药对蚯蚓的DNA损伤

探讨采用当前国际上较先进的ＤＮＡ损伤检测技术－单细胞凝胶电泳技术,来检测农药对蚯蚓ＤＮＡ的损伤,由于蚯蚓是陆生生物与土壤生物之间传递污染物的桥梁,能很好地指示土壤环境的变化,是评价农药对生态环境安全性的一项重要指标。尝试建立蚯蚓的单细胞凝胶电泳来评价农药对生态环境的影响,结果表明两种新型农药对蚯蚓的ＤＮＡ均有损伤作用。认为蚯蚓的单细胞凝胶电泳技术能敏感地农药对细胞ＤＮＡ的损伤,并可作为农药对土壤污     

MMP-2 PEX结构域的最佳表达条件

为研究MMP-2 PEX结构域在大肠杆菌BL21(DE3)中的最佳表达条件,直接从构建好的表达载体PET-MMP2 PEX中高效表达MMP-2 PEX结构域蛋白.经SDS-PAGE与软件分析,确定其最佳表达时间为2 h,菌液密度值为0.6时,所表达的蛋白含量最高,而IPTG在一定浓度范围内对表达含量不产生影响.     

两种染色方法对聚丙烯酰胺凝胶电泳回收蛋白的影响

以牛血清白蛋白(BSA)为材料进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分别采用考马斯亮蓝(CBB)G-250染色和咪唑-Zn反染,用电洗脱仪回收.它们的灵敏度分别为500ng和5 ng;蛋白质回收率分别为37.9%和74.4%.     

青海湖裸鲤、鲤鱼的血红蛋白的电泳研究

本文用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳方法,对鲤科（Ｃｙｐｉｉｎｉｄａｅ）２种鱼类：青海湖裸鲤（Ｇｙｍｎｏｃｙｐｒｉｓ Ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ）、鲤鱼（Ｃｙｐｉｉｎｕｓ Ｃａｒｐｉｗ Ｌｉｎａｅｕｓ）的血红蛋白进行了分析研究讨论了两者血红蛋白的种间差异以及它们各自的遗传特异性,以期积累生化遗传学资料,以便进上步在生化水平上为临别物种的牧民性和它们在进化上的亲缘关系提供佐证。结果显示：两种鱼类各自的血红蛋     

橡胶树胶乳C-乳清死皮相关蛋白的鉴定及分析

橡胶树死皮是影响天然橡胶产量的重要限制因子。通过双向凝胶电泳技术(2-DE)研究了橡胶死皮树与健康树胶乳C-乳清蛋白表达谱的差异。以软件分析后共获得31个差异表达的蛋白点,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析后,搜索NCBInr数据库,结果有10个蛋白点被成功鉴定,其中6个为未知蛋白,其余4个蛋白分别为chain A,struc-ture of ubiquitin-like protein,Rub1;β-1,3-glucanase;AIR9 protein和flagellar inner dynein arm heav-y chain 11。这些蛋白可能在橡胶树死皮发生过程中扮演重要角色。