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51.
利用模式生物斑马鱼,通过微注射的方法,研究了人肝脏特异性转录因子TCP10L对斑马鱼早期胚胎发育的影响.结果显示:人TCP10L基因对斑马鱼胚胎发育有一定的毒性.表现为早期的脊索发育异常,个体严重畸形;当血液循环出现后,表现为血流延缓和围心腔水肿等症状.该项研究表明:人肝脏特异性转录因子TCP10L在斑马鱼胚胎中的过表达会引起显著的形态异常和心血管障碍,并且这种影响与其是否在斑马鱼肝内的特异表达有关,为进一步探明该转录因子在人肝脏内发挥的功能奠定了基础. 相似文献
52.
反转录病毒介导的人凝血因子IX小基因在奶山羊乳腺中的分泌表达 总被引:1,自引:0,他引:1
通过受精卵显微注射胚胎移植建立哺乳动物乳腺生产系统是近年来生物工程领域的研究热点,但该工作周期长、成本高、难度和工作量都很大.1994年Johanna等人曾经报道以反转录病毒作载体将hGH(human growth hormone)cDNA导入山羊乳腺组织并获得表达.但是由于病毒LTR控制下的hGH基因的表达在活体动物乳腺组织内受到一定程度的抑制,因此表达水平比较低,持续时间短.我们以微小MCK(Muscle creatine kinase)增强子,β-actin启动子控制hFⅨ(human clotting factorⅨ)小基因(minigene)表达顺序反向插入GINa框架,构建为复制缺陷反转录病毒载体.首次通过反转录病毒直接转染活体奶山羊乳腺小叶和乳腺导管导入的方法建立了hFⅨ蛋白的乳腺表达系统.hFⅨ蛋白在羊奶中的最高表达量为47.9ng/mL乳汁,其中1头奶山羊2个月后表达量仍维持在12ng/mL乳汁.Western blot和活性检 相似文献
53.
54.
55.
利用精原干细胞建立人凝血因子Ⅸ转基因小鼠 总被引:3,自引:2,他引:3
用玻璃针将EffecteneTM包裹的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)表达载体注入小鼠的曲精细管. 通过PCR和Southern印迹法对子代41只小鼠进行鉴定, 有2只小鼠的基因组中整合有hFⅨ基因表达框架, 整合率为4%(2/41). 通过ELISA方法在其中1只小鼠的血浆中检测到hFⅨ的表达, 表达量为4.6 ng/mL. 实验证明, 精原干细胞法是建立转基因动物的有效途径, 为乳腺反应器的研究提供了另一个技术手段. 同时也为通过生殖细胞途径治疗血友病B提供了新的选择. 相似文献
56.
血友病B为一种严格的X连锁隐性遗传病, 由于其单纯的分子遗传基础和明确的临床表现, 容易观察疾病治疗的效果; hFⅨ较小的基因规模可以适用于几乎所有的常用基因载体系统. 在多种细胞均可以获得有效的表达使得基因治疗时可以有广泛的细胞选择范围, 同时也为生物工程制备重组蛋白药物提供了便利. 而且, 血友病B有天然和基因操作形成的动物模型便于治疗的临床前实验研究. 基于上述理由, 血友病B一直是遗传病基因生物治疗和重组蛋白药物制备的重要模型. 我国在20世纪90年代成功完成了基因治疗血友病B的临床试验, 对推进我国的基因治疗起到重要作用. 本文简述我国在血友病B的生物基因治疗方面的研究情况与发展方向, 希望为基因治疗和重组蛋白药物研究人员提供参考. 相似文献
57.
前期的研究发现Cdc20介导Sp100通过泛素-蛋白酶体途径降解,Sp100中的D-box在底物识别过程中具有重要作用.尽管在PML和DAXX中都存在典型的D-box序列,但是这两种蛋白都不能被Cdc20所识别.本研究中,我们构建了一系列含D-box的Sp100截断体来探讨Cdc20底物识别的必要序列.研究发现GFP-Sp100(152-182)截断体包含D-box但是不能被APC/C-Cdc20降解.GFP-Sp100(151K→G)突变潜在泛素结合位点后,Sp100降解显著受到抑制.远离D-box的潜在泛素化位点(217K,219K,225K)破坏后对Sp100降解没有影响.我们的结果表明,Sp100蛋白中D-box附近泛素化位点(151K)在Cdc20介导的蛋白降解中是必要的. 相似文献
58.
携带人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因重组腺相关病毒的大量制备与体内外表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
构建了一系列携带有人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因(hⅨR338A)及不同调控元件的腺相关病毒 表达载体,并经体外转导不同的细胞系,筛选、优化,挑取高表达质粒及其转导稳定细胞克隆,然后, 以一个携带有腺相关病毒包装蛋白的rAAV/HSV杂合病毒包装系统介导进行重组腺相关病毒的大量制 备,建立了可进行产业化制备的技术路线及高滴度、大量制备重组腺相关病毒的技术方法,所获得的重 组病毒滴度达 1.25 × 1012病毒颗粒/mL,然后,利用这一重组病毒,对rhFⅨR338A进行离体及在体表达, 获得了 rhFⅨR338A在肌细胞系 C2C12及血友病 B小鼠体内的高效表达,表达峰值分别达(2551.32± 92.14)ng·(106细胞)-1·(24h)-1及463.28ng·mL-1,与野生型Ⅸ因子的表达水平(2565.76±64.36)ng· (106细胞)-1·(24 h)-1及453.92 ng· mL-1无显著性差异.然而,其凝血活性却成倍增加,约为后者的 2.46倍..将人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因引入血友病 B基因治疗研究之中,同时,探讨了一个新的包装 系统──rAAV/HSV杂合病毒包装系统──在重组AAV载体大量制备中的应用 相似文献
59.
目前,人体基因组的全顺序分析是个大热点,《21世纪的大科学——人体基因组的全顺序分析》一文详细而又全面地介绍了该领域的研究情况,值得一读。 相似文献
60.
本实验以性成熟猕猴(Macaca mulatta)12只,分为对照、一次急性照射和分次累积照射三组,每组4只猴子。经200仑X 射线一次急性和分次累积(每隔24小时照射20仑,10天内累积总剂量为200仑)局部照射猕猴睾丸,以精子发生中精母细胞第一次减数分裂后期和早末期所出现的染色体畸变为指标,此较研究猕猴在总剂量和剂量强度相同的情况下,经一次急性照射和分次累积照射的细胞遗传学效应。对照组的平均染色体畸变率为0.297±0.103%,200仑X 射线一次急性照射组和分次累积照射组的平均染色体畸变率分剐为2.979±0.179%和1.276±0.144%。由此可见,两种不同处理组的染色体畸变率均高于对照组,而一次急性照射组的染色体畸变率又比分次累积照射组增加一倍以上。经统计分析指出:各组染色体畸变率之间差异是显著的,对照~处理P<0.001(对照~一次急性照射P<0.001;对照~分次累积照射P=0.005-0.001),一次急性照射~分次累积照射P=0.005-0.001。实验证明:在总剂量和剂量强度相同时,猕猴睾丸经X 射线一次急性照射所引起的细胞遗传学损伤比分次累积照射更为严重,并表明200仑X 射线分次累积照射诱发染色体畸变的效应并不是按照简单的相加法则而累积的。 相似文献