米曲霉碱性蛋白酶基因的克隆表达及水解特性

米曲霉碱性蛋白酶对植物蛋白具有高效的水解能力和较好的脱苦作用.为了便于大量获得该酶以利于工业上的应用,文中通过RT-PCR克隆获得米曲霉碱性蛋白酶基因,将之转化到毕赤酵母KM71菌株中并成功表达,之后用该酶进行牛胰岛素氧化链B链及大豆和花生蛋白的水解试验.结果显示:在10L发酵罐中诱导表达时,发酵液中重组碱性蛋白酶的酶活达4100U/mL;该蛋白酶最适反应pH值和温度分别为8.5 ～9.5和50℃,在pH值为6.0 ～10.0和温度低于40℃时具有较好的稳定性;该酶具有广泛的肽键选择性;该酶对大豆和花生蛋白显示出了强于部分商品化蛋白酶的水解能力.以上结果表明:该重组蛋白酶具有较大的开发利用潜力.     

雅致放射毛霉蛋白酶SP1基因的克隆及序列分析

雅致放射毛霉蛋白酶具有较好的脱苦味和水解豆类蛋白的能力.为了揭示其结构和功能的关系,促进其开发应用,文中通过RACE和PCR技术克隆获得丝氨酸蛋白酶SP1基因.根据生物信息学中的理论和方法,对SP1进行了较全面的预测和分析.结果表明:SP1基因由4个外显子和3个内含子组成,编码454个氨基酸残基.SP1属于蛋白酶K家族,与Rhizopus microsporus var.chinensis的丝氨酸蛋白酶同源性最高,亲缘关系最近.以蛋白酶K晶体结构(PDB code:1IC6)作为模板进行同源建模,通过对模拟结构的分析可知:SP1分子内无二硫键,具有1个Ca2+结合位点;SP1与蛋白酶K在底物结合区域、氢键、盐键和二硫键等方面均存在差异,这些差异可能就是SP1具有独特的水解作用和脱苦能力的原因.     

产辅酶Q10大肠杆菌工程菌的构建

克隆放射型根瘤菌ddsA基因,用于构建red重组的打靶片段,通过同源重组替换大肠杆菌基因组上的ispB基因,使合成辅酶Q8的大肠杆菌具备合成辅酶Q10的能力.通过强化辅酶Q合成过程中的ddsA、ubiA、ispA、idi等关键酶基因,可使大肠杆菌辅酶Q10的合成能力提高126.9%.综合分析表明,ddsA与ubiA为辅酶Q10合成的关键基因,ispA与idi为辅酶Q10合成的次关键基因.     

蛤蚧消化道嗜银细胞的分布及形态学观察

用龙桂开银浸法对蛤蚧消化道嗜银细胞的分布及形态作了观察，结果表明：蛤蚧消化道嗜银细胞在胃贲门部和幽门部分布密度大，胃体部密度小，呈“U”形分布；在十二指肠密度大，从空肠到回肠密度逐渐变稀；在大肠上、下段分布密，中段稀，也呈“U”形分布；从食道中段到下段密度中等，并呈递增分布．细胞颗粒被染成黑色、棕黑色，细胞形态多样，有锥体形、三角形、长梭形等。主要分布在黏膜上皮和腺上皮之间，在结缔组织里发现有少量的嗜银细胞，细胞充满嗜银颗粒，嗜银颗粒在细胞外有时可见到。     

以科技金融创新推进国家自主创新示范区建设

金融是现代经济的核心,高新技术产业在发展过程中对金融的需求很大,我国每年转化为现实生产力并形成规模的科枝成果和专利技术,只占经过国家验收登记的20％,造成如此低的转化率,其中一个重要原因就是缺乏必要的资金支持。海淀区作为国家科技金融创新中心,在为科技金融创新搭建政策平台和技术平台;强化多层次资本市场服务能力,加快形成中关村板块;打造全国股权投资中心,形成海淀金融业新增长点;不断推进债权融资等方面取得了一定的成效。本文在借鉴发达国家科技金融创新方面经验的基础上,深入剖析了海淀区在金融服务体系、科技型中小企业自身以及银行信贷支持等方面存在的问题,提出了发挥科技园区重要平台作用,实现科技和金融的结合;选准科技与金融结合的突破口,大力促进科技型中小企业的创新发展;有效整合资源,切实解决科技型中小企业发展面临的融资难问题等有针对性的建议。     

谷氨酸生产菌的诱变育种

经化学诱变,通过改变谷氨酸棒杆菌B1的代谢途径,筛选出以琥珀酰CoA和乙醛酸为碳源的营养缺陷型,该突变菌株B4的产酸率和转化率分别比出发菌株高11.1%和8.7%.