维生素对乳酸菌细胞活性和代谢途径相关酶活性的影响

研究了拟干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)发酵生产乳酸过程中,添加维生素对菌体生长、细胞活性、产酸,以及在碳流代谢中与乳酸生物合成密切相关的4种酶[乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸脱氢酶(PDC)和丙酮酸羧化酶(PC)]活性的影响。结果显示:维生素添加促进了菌体生长,使乳酸产量提高了42.47%;同时降低了发酵过程中菌体的死亡率,降低的最大幅度可达53.46%;PFK和LDH的活性比对照有提高,最大幅度达62.30%和126.65%,PDC的活性在发酵中期也有一定的提高,但PC的活性变化很小。实验结果表明:组合维生素的添加可以提高乳酸菌的活性,同时使代谢通量有利于乳酸生成。     

L-赖氨酸在中空纤维膜和平板膜中的超滤动力学

分别在中空纤维膜和平板膜中考察了L-赖氨酸超滤动力学，结果表明：中空纤维膜的过滤通量大于平板膜，总过滤时间正相反；L-赖氨酸超滤动力学可以拟合为浓差极化-凝胶层模型，中空纤维膜较平板膜更符合此模型。     

甲醇浓度和VHb蛋白表达对重组毕赤酵母生产SAM的影响

以插入AOX1启动子调控S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶/VHb表达单元的重组毕赤酵母为对象,研究了甲醇浓度及vgb表达对茵体生长、SAM产量及SAM合成酶活力的影响,同时也考察了vgb表达对胞内ATP含量及细胞活性的影响.结果表明:甲醇浓度(?(CH3OH))由0.008提高至0.016后,可提高菌体浓度、SAM产量及单位菌体SAM含量;当?(CH3OH)=0.024时,SAM产量及单位菌体SAM含量与?(CH3OH)=0.016时相当,而菌体浓度稍低于?(CH3OH)=0.016时,高于?(CH3OH)=0.008时的菌体浓度.提高甲醇浓度导致SAM合成酶活力降低,细胞死亡率增加,说明在所考察的重组菌中SAM合成酶的活性并不是SAM合成的限制因素.在上述3种甲醇浓度时,透明颤菌血红蛋白VHb表达都改善了细胞活性,并在较高甲醇浓度(0.016和0.024)时提高了胞内ATP含量.     

基因工程菌Pichia pastoris连续培养的生长及抑制动力学

在同一稀释率μ（μ＝0．14h^-1）下用不同浓度的甘油流加进行连续培养,研究甘油浓度对基因工程菌毕赤酵母（Pichia pastori）生长的影响。结果表明甘油浓度对细胞生物量（DCW和WCW）、底物得率系数（Yx/s）、底物比消耗速率（qs）、呼吸熵（RQ）与二氧化碳释放率（CER）都有影响,在低甘油残留浓度（＜63．3g／L）下,甘油是激活剂,菌体生长符合Monod方程,Ks＝19．62g／L,甘油激活常数Ka＝19．45g／L;而在高甘油残留浓度（＞63．3g/L）下甘油是抑制剂,菌体生长特征符合Haldance方程,Ks＝0．014g／L,K1=156．67g／L。毕赤酵母生长的甘油抑制浓度为55．2g／L。     

谷胱甘肽合成酶在大肠杆菌中的高效表达及性质

在成功构建了谷脱甘肽（ＧＳＨ）合成酶基因表达质料（ｐＴｒｃ－ｇｓｈ）的基础上,对不同大肠杆蓖突主菌进行了比较,筛选出高效、稳定表达ＧＳＨ合成酶的工程菌并进行了最佳酶表达条件的研究。结果表明：重组工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ｐＴｒｃ－ｇｓｈ）表达量最高,质粒稳定性好;以５％接各量于３７℃、ｐＨ７．２培养至ＯＤ５５０＝０．５左右,加入诱导剂ＩＰＴＧ（０．ｍｍｏｌ／Ｌ）,同时切换培养条件为３４℃、ｐＨ６     

离子交换与膜超滤耦合提取L-赖氨酸

采用离子交换与膜超滤耦合法,研究了用中空纤维膜提取Ｌ－赖氨酸的动力学行为。该动力学符合浓差极化－凝胶层模型,吸附浓缩过程中操作压力影响大,料液流速影响小;而在脱附浓缩过程中这种影响正好相反。建议当流速在０．１４￣０．２１ｍ／ｈ时,操作压力维持在２２．５￣２５．０ｋＰａ。     

葡萄糖限制的流加培养中杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成

研究了葡萄糖限制的流加培养和批培养中杂交瘤细胞的生长、代谢和单抗生成。与批培养相比，流加培养的培养周期长，细胞密度、单抗浓度高。随着葡萄糖浓度的下降，葡萄糖比消耗速率和乳酸比生成速率也下降，葡萄糖转化成乳酸的比例从60％～70％下降到0，葡萄糖更多地参与三羧酸循环，提高了葡萄糖的有效利用率和ATP的生成效率。     

酶法测定卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性

催化血浆中游离胆固醇酯化反应的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)是胆固醇逆向运输过程中的关键酶之一。本研究针对原测定方法中本底过高的问题，改变了对照本底的反应条件，使原反应体系中的前两步酶反应无法进行，最终测得的反应速率真实地反映了样品中本底(甘油—3—磷酸)的水平。经改进的测定方法除成功地用于人血清测定外，还应用于细胞培养液和兔血清的测定，对于相关药物的研究和筛选具有实际应用价值。     

用于生物反应器多尺度问题研究的数据采集系统

本文针对生物反应器中活体细胞大规模培养过程中多尺度问题，重点讨论了有关数据采集系统的研制，其中包括参数与传感器系统配置与要求，计算机软硬件配置与设计，以及过程数据远程通讯技术等。并根据以上原理设计制造了专门用于生物反应器中多尺度问题研究的实验室FUS—50L(A)新概念发酵罐，并研制了中试与生产规模数据采集系统。本装置用于不同发酵产品的过程优化时，发现了一些过去以单尺度观点研究时容易忽略的问题，改进后的系统使发酵水平大幅度提高。     

人神经营养因子-3在哺乳动物细胞中瞬时表达和稳定表达的初步研究

将人神经营养因子－3全长cDNA克隆入真核表达载体pcDNA3,分别COS-7儿CHO细胞中获得了瞬时表达和稳定表达，经大乳鼠脊髓背根神经节测活，瞬时表达和稳定表达产物均能明显促进其神经突起的生长，瞬时表达量约为10^-7g/mL，稳定表达量可达10^-8g/mL。