鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及序列分析

用SPF鸡胚成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)J1C7毒株。用纯化的病毒颗粒提取RNA基因组。根据已报道的IBDV JD1株的VP2序列设计引物,利用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)进行扩增,将获得的1 359 bp片段克隆于pMD 18-T载体上。经过限制性酶切及PCR鉴定后,得到阳性重组质粒。对VP2基因进行全序列测定表明,克隆的VP2基因长1 359 bp,编码452个氨基酸。J1C7株VP2蛋白高变区内两个亲水区与其他标准Ⅰ型毒株完全相同,而且具有弱毒疫苗株的特征性氨基酸:222P、256V、279N、284T、294L、299N,七肽区的氨基酸序列为SWS ARGS,因此,从分子水平上推断本研究的J1C7株为标准Ⅰ型毒株,且属于弱毒疫苗株。与已报道的IBDV VP2基因的氨基酸序列进行比对,结果表明,本研究的J1C7株与来自欧洲和中国的弱毒疫苗株有密切的亲缘关系。     

Cloning and sequence analysis of VP2 gene of infections bursal disease virus

用SPF鸡胚成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV) J1C7毒株.用纯化的病毒颗粒提取RNA基因组.根据已报道的IBDV JD1株的VP2序列设计引物,利用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)进行扩增,将获得的1359 bp片段克隆于pMD 18-T载体上.经过限制性酶切及PCR鉴定后,得到阳性重组质粒.对VP2基因进行全序列测定表明,克隆的VP2基因长1359 bp,编码452个氨基酸.J1C7株VP2蛋白高变区内两个亲水区与其他标准Ⅰ型毒株完全相同,而且具有弱毒疫苗株的特征性氨基酸:222P、256V、279N、284T、294L、299N,七肽区的氨基酸序列为SWS ARGS,因此,从分子水平上推断本研究的J1C7株为标准Ⅰ型毒株,且属于弱毒疫苗株.与已报道的IBDV VP2基因的氨基酸序列进行比对,结果表明,本研究的J1C7株与来自欧洲和中国的弱毒疫苗株有密切的亲缘关系.     

自我调控延缓叶片衰老基因的亚克隆

利用亚克隆技术和反筛选策略,将含有延缓叶片衰老基因的双元载体上的卡那霉素抗性植物筛选标记更换为适合于水稻遗传转化的潮霉素抗性标记,并对新构建物进行了酶切鉴定和接头序列分析。     

红麻微卫星DNA的分离

分别采用RAPD、锚定PCR和磁珠捕获等3种方法富集含微卫星序列的红麻基因组DNA片段,并连接到pMD18-T载体,构建基因组文库.然后以通用引物M13F,M13R和根据微卫星核心序列所设计的引物[VRV(CT)12或VRV(TG)12],用PCR方法直接对文库筛选,并将获得的阳性克隆进行测序.分别从RAPD,锚定PCR和磁珠捕获3种富集方法构建的基因组文库中获得6,23,19个微卫星位点.     

牛甘露聚糖结合凝集素A基因糖基识别域生物信息学特征的研究

研究牛甘露聚糖结合凝集素A基因糖基识别域的分子特征,从生物信息学角度说明MBL功能的发挥主要依赖其糖基识别域.从牛肝脏组织中提取总RNA,经RT-PCR技术扩增MBL-A基因糖基识别域,与pMD18-T载体连接并测序.牛MBL-A分子CRD结构的分析,为进一步研究其识别效应和MBL介导的天然免疫防御功能的机制提供依据.     

大肠杆菌cDNA文库的构建与质量分析

采用Stratagene公司的cDNA文库构建试剂盒构建大肠杆菌的cDNA文库,从中筛选出与RNaseⅢ有相互作用的蛋白,为研究RNaseⅢ蛋白在原核生物中的作用奠定基础.用Trizol试剂提取大肠杆菌的总RNA,在E.coli poly(A)Polymerase作用下给mRNA特异性地加上poly(A)尾,分离纯化mRNA,利用mRNA作为模板反转录合成双链DNA.经pfx酶补平双链末端,在两端加上EcoRⅠ接头,XhoⅠ酶切消化产生粘性末端.用CHROMA SPIN-400column分级分离纯化cDNA片段,与p TRG XR载体连接后,电击转入XL1-BLUE MRF'菌电转感受态中.得到原始文库,经计算文库的容量达到3×10~6个克隆.用PCR方法测得文库的重组率为100%,插入片段的平均长度基本位于300 bp以上,测定放大文库的滴度为:3.15×1010pfu/m L.说明构建的大肠杆菌cDNA文库质量比较高,适合用于筛选目的基因克隆.     

竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶的表达载体的构建及重组蛋白抗肿瘤的研究

将经BamHⅠ和HindⅢ酶切的pMD18-T-LAAO和Pet28a(+)质粒的纯化回收产物进行连接,将产物Pet28a(+)-LAAO表达载体转化BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经Western-blot分析表明,重组蛋白能被兔抗竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)阳性血清所识别.将鼻咽癌CNE-2Z、人宫颈癌LYA01021和卵巢癌A2780MSC细胞悬液接种小鼠建立小鼠实体瘤模型,分别用不同浓度重组蛋白接种荷瘤小鼠,根据瘤重和小鼠存活时间计算抑瘤率和对荷瘤小鼠生命延长率.结果表明:重组蛋白对低、中和高剂量组荷瘤小鼠抑瘤率和生命延长率与阴性对照组均存在极显著差异(P<0.01).本研究为开发利用竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶提供依据,为进一步研制新型的抗肿瘤药物打基础.     

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)arom基因3′-末端的克隆与分析

根据五功能AROM蛋白保守区域设计简并引物,从核盘菌基因组中获得了一段大小为1626bp的DNA片段。结合Southern杂交结果,用反向PCR克隆了arom基因3′-末端4104bp的序列。序列分析结果表明,该DNA片段推测的氨基酸序列与烟曲霉、粗糙脉孢霉、构巢曲霉和粟酒裂殖酵母等的AROM蛋白同源,包含了部分5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合成酶)结构域、莽草酸激酶结构域、脱氢奎尼酸脱水酶(脱氢奎尼酸酶)结构域和脱氢莽草酸脱氢酶结构域,其中含有EPSP合成酶模式2(255—273)、莽草酸激酶模式(426—453)和Ⅰ型脱氢奎尼酸酶活性位点模式(659-687)。     

一类大集合容量伪随机序列集的线性复杂度研究

具有大线性复杂度的序列可以抵抗Berlekamp-Massey算法攻击,提高数据的安全性,设计大线性复杂度伪随机序列是一个重要课题.使用d-齐次函数是增大序列的线性复杂度的一个有效方法.本文对正整数n=3m提出了一类周期为3n-1集合容量为3n的新序列集S(r),这里(r,3m-1)=1且1≤r<3m-1.通过取适当的参数r,精确地计算出了它的线性复杂度.     

黑麦草漆酶编码基因片段的克隆与序列分析

黑麦草中木质素的结构、含量是决定其饲用品质的主要因素。漆酶是木质素生物合成中的关键酶之一,属于多铜氧化酶基因家族。根据报道的植物漆酶编码基因的氨基酸序列中铜离子结合域及N-端糖基化位点两个保守区设计4对引物,以黑麦草总DNA为模板,经PCR扩增、克隆、测序后得到3个有效序列,分别命名为Lac10-1、Lac8-1和Lac11-1。序列分析表明,3个基因片段的编码蛋白不仅含有保守的蓝铜氧化酶结合区域HAH和N-末端糖基化位点,而且分别与黄杨、黑麦草中分离的漆酶编码蛋白的氨基酸序列具有较高的同源性。因而,推断克隆到的3个基因片段是黑麦草漆酶基因家族的成员。     

ChsA启动子驱动的IPT基因植物表达载体的构建

为研究异戊烯腺苷类细胞分裂素与花衰老进程的相关性,本研究通过PCR方法从矮牵牛中克隆到花瓣特异性表达的矮牵牛查尔酮合成酶基因A（ChsA）的启动子PchsA,并以其取代植物表达载体pBI121中的组成型启动子CaMV35S,然后将IPT基因插入到PchsA启动子下游,测序结果显示花瓣特异性启动子驱动的IPT植物表达载体构建成功.     

Src真核表达载体的构建与表达

构建酪氨酸蛋白激酶Src真核表达载体,并检测其在HEK293T细胞中的表达.根据Genebank（GI：4574718）提供的大鼠Src的cDNA序列设计特异性引物,以大鼠海马总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增Src的目的基因,然后克隆至真核表达载体pcDNA3.1.将筛选的阳性重组子转染入HEK293T细胞系,免疫印迹检测Src的蛋白表达水平,经限制性内切酶双酶切及测序分析,扩增的Src的cDNA成功连接入pcDNA3.1,并且序列与Genebank中一致.免疫印迹结果表明,构建的Src-pcDNA3.1可在HEK293T细胞中表达.成功构建了Src-pcDNA3.1真核表达载体,并且可在HEK293T细胞中高效表达.     

基于证据框架的模糊超球面支持向量机超参数优化

模糊超球面支持向量机(FHS-SVM)在处理一类分类问题时比超平面支持向量机泛化能力更强,特别是在雷达目标检测中得到了成功应用.FHS-SVM训练时需要预设一些超参数,不同的超参数得到的FHS-SVM性能差异很大.文中首先证明了FHS-SVM训练过程与证据框架第一层贝叶斯推理的等价性,然后在证据框架下提出了FHS-SVM超参数优化迭代方法.基于超宽带合成孔径雷达探雷数据,通过与穷举方法结果的对比检验了迭代优化方法的有效性.     

O_H~5O~3 ■T~1结构空间群母分系数的计算

OH5O3■T1摘要:将陈金全的本征函数法应用于空间群链,计算了晶体第一布里渊区中*X(?)*M→*X耦合的母分系数。与传统群论方法相比,其理论本身显示出许多特有的优越性, 概念简单,简明易懂,与量子力学关系密切,便于理解和应用,且易于程序化。计算结果表明所得母分系数满足幺正性、归一性,证明了本征函数法处理群论问题的正确性和简洁性。     

线性代数中秩概念的引入顺序探讨

分析了传统线性代数教材中秩的概念引入顺序的不足．在教学过程中，抛开矩阵的秩的行列式定义，直接从向量组的秩出发定义矩阵的秩，这样推导更易帮助学生理解向量组的秩和矩阵的秩的本质联系．     

矢量积与楔积的联系

给出了矢量积与楔积的关系,并且证明了只有n=3时,n维向量空间才有矢量积.     

线性变换正交次对角化讨论

提出了双重正交特征向量概念,从线性变换角度出发给出了线性变换可正交次对角化的若干充要条件及相关的证明.并由此推得反对称变换必可正交次对角化,给出了正交次对角化的具体方法.     

利用强部分平衡t-设计构造分裂认证码

本文在有限域上的二维向量空间中构造了一个带约束的强部分平衡设计，在此基础上构造了完善分裂认证码.首先，借助方程组的理论构造了一个强部分平衡t-设计，得到了第一类分裂认证码.然后对第一类构造增加限制条件，得到了第二类分裂认证码.分别计算了两类认证码的r-阶欺骗攻击成功概率，并证明了它们分别是I型和Ⅱ型的完善认证码.最后，分析了所构造认证码的性能.通过对具体实例的编码矩阵进行数值仿真，验证了本文构造的合理性和相应结论的正确性.通过与相关文献的结果进行对比，得出如下结论：本文信源数目较多，各阶欺骗攻击成功概率都达到最小；且所用理论较基础，编码算法更简单，模拟仿真易于实现.因此本文所构造的认证码，无论从传送信息量还是从安全性与实用性的角度来看，均具有一定的优势.