水中SaV GⅣ的提取及荧光定量PCR检出方法研究

札幌病毒(Sapovirus/SaV)是引起急性腹泻的常见病毒,水体是SaV传播的主要途径之一。由于设备和检测水平的限制,水体中病毒的检出费时费力。本文利用分子诊断学中灵敏度高的水中病毒富集技术结合荧光定量PCR方法,对水中SaV GⅣ基因型快速检测方法进行了研究。获得了一套水中病毒富集、核酸提取及分子诊断学检出方法。对比了TaqMan探针法与SYBRGreen染料法在检测中的效果。初步建立了利用水中病毒分离装置富集SaV GⅣ病毒,应用TaqMan探针法与SYBRGreen染料法两种荧光定量PCR方法快速检出SaV GⅣ的分子诊断学方法。     

探讨人细小病毒B19与异位妊娠的关系

无菌留取85例异位妊娠妇女和43例妊娠无异常孕妇血清，用聚合酶连反应(PCR)检测的人细小病毒B19DNA，在异位妊娠组中人细小病毒B19DNA有20例阳性，阳性率为23．53％。正常对照组中，人细小病毒B19DNA有2例为阳性，阳性率为4．51％，用x^2检验，x^2＝6．47，P＜0．05，2组有显著性差异。由此总结，人细小病毒B19感染可能是异位妊娠的原因之一。     

18srDNA为内参照的Real-Time-PCR方法检测半夏病毒

利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.以带病毒半夏母株为外植体培养的组培苗,其病毒含量以叶片中的相对较高,在块茎和愈伤组织中病毒相对较低.而ELISA方法在检测病毒含量低的样品时有假阴性结果;RT-PCR方法灵敏度可靠但不适宜精确量化.     

利用实时荧光定量PCR技术检测转基因烟草

本实验通过荧光染料掺入dsDNA实时监控扩增产物的积累,根据质粒标准品的ct值制成标准曲线,结合标准曲线方程可知未知样品的起始含量,该方法灵敏度高、快捷,可用于基因突变和转基因植株的检测、病毒的检测、遗传疾病和肿瘤疾病的诊断。     

斑鳜轻链3基因(MLC3)cDNA的克隆及纵向表达分析

提取斑鳜肌肉组织总RNA,逆转录得到cDNA,然后利用常规PCR法扩增得到斑鳜肌球蛋白轻链3基因(MLC3)序列.斑鳜MLC3基因cDNA序列的全长为532 bp,编码150个氨基酸.通过PROSITE tools软件预测显示该序列具有2个EF-手相结构.通过实时荧光定量PCR法对斑鳜MLC3纵向表达进行分析发现,ML...     

细胞自噬与细小病毒感染相互作用的研究进展

细胞自噬是生物体内一个保守的生物学过程,通过溶酶体对外源微生物、胞内长寿蛋白以及衰老细胞器的吞噬和降解实现能量再循环.当细胞被外源性病原微生物(如病毒)刺激时,往往会触发自噬的激活或抑制.由于自噬具有抗病毒作用,因此许多病毒可能通过编码一些蛋白逃逸并抵抗该过程,同时病毒还可以利用自噬增强其自身复制或增加潜伏感染的持续性.关于病毒与细胞自噬的相互作用是十分复杂的.主要综述已发表的细小病毒与细胞自噬相互作用的研究进展,简要概述了自噬和细小病毒,并回顾了人类和动物细小病毒与自噬之间的已知相互作用,及自噬在细小病毒DNA复制中的作用和机制.     

血液筛查中核酸检测与ELISA联合应用的研究

通过对血浆标本的核酸和血清学检测结果进行比较分析,探讨核酸检测（NAT）与酶联免疫吸附试验（ELISA）联合应用在血液筛查中的意义.研究从血浆样本中同时提取HBV、HIV和HCV核酸,采用荧光实时聚合酶链反应（PCR）进行检测,同步进行ELISA检测HBV、HIV和HCV抗原或抗体.在5 184份血浆标本中检测出HBV“窗口期”标本12份,检出率为0.23％;检测出HCV“窗口期”标本3份,检出率为0.058％;未检测出HIV“窗口期”标本.从而得出结论,核酸检测可以有效检测出血浆中的HBV、HIV和HCV的“窗口期”标本.     

巨细胞病毒感染

人类巨细胞病毒感染一般呈示显性感染和潜优感染,机体免疫力下降常引起活动性感染,并可导致致命性疾病,过去20年由于器官移植,艾滋病等免疫缺陷患者的大量增加,HCMV感染的诊断、防治引起医学科学工作者的广泛关注,文中对HCMV病毒学、临床特征以及其诊断、治疗、预防的研究进展作了论述。     

母猪产科疾病的防治

母猪的产科疾病主要发生在产前半个月至产后7～10天.疾病的发病原因较为复杂,大多数人认为是由细菌感染引起的,同时繁殖障碍性疾病(如蓝耳病、伪狂犬病、圆环病毒病、细小病毒病)的危害也较严重,此外母猪附红细胞体病的隐性感染也很普遍.     

Co60辐照聚苯乙烯微孔板的ELISA研究

为了探讨Co60γ射线辐照对聚苯乙烯微孔板吸附小分子多肽的影响,建立了检测HIV(人类免疫缺陷病毒)抗体的间接酶联免疫法(ELISA).分别用未经辐照处理、经紫外线(UV)辐照处理和经Co60辐照处理的聚苯乙烯微孔板吸附重组HIV抗原,再配以辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG,可以考察其灵敏度、特异性、均一性和稳定性等相关指标.实验结果表明:聚苯乙烯微孔板经Co60辐照(最优剂量为8×105rad)后,可明显改善酶联免疫法的测定效果,检测灵敏度和均一性均有显著提高.     

火鸡源性成分数字PCR通用定量检测方法的研究

建立了一种特异、灵敏和通用的火鸡源性成分数字PCR(digital Polymerase Chain Reaction,dPCR)定量检测方法,可对肉制品中火鸡源性成分的质量百分比进行准确定量,同时适用于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)和芯片式数字PCR(chip digital PCR,cdPCR)平台。ddPCR平台对火鸡源性成分拷贝数浓度定性检测限(Limit of Detection,LOD)和定量检测限(Limit of Quantitation,LOQ)分别为1.75和6.43 copies·μL~(-1),cdPCR平台对火鸡源性成分拷贝数浓度LOD和LOQ分别为1.71和3.43 copies·μL~(-1)。对混合鲜肉中火鸡源性成分的质量百分比定量检测限为5%。本方法可对食品中火鸡源性成分进行定量检测。     

猪伪狂犬病诊断方法研究进展

概述了伪狂犬病的常用诊断方法:生物学实验、血清学诊断技术和分子生物学诊断技术.生物学诊断方法包括动物实验和病毒分离鉴定等.在血清学诊断技术方面,其诊断方法主要有微量血清中和试验、酶联免疫吸附试验、反向间接血凝试验、荧光抗体技术和乳胶凝集试验、琼脂免疫扩散试验等.随着分子生物学的发展,国内外相继建立核酸探针技术、聚合酶联反应技术、基因芯片技术、环介导等温扩增技术、胶体金免疫层析技术等分子生物学诊断方法.     

具有相同被感染能力的SIR模型传播阈值存在性研究

提出一个具有相同被感染能力的SIR模型.通过限制易感染节点连接边的感染能力,即易感染节点只能通过本身连边中的A条边受到感染,得出在非齐次不相关网络中,存在一个固定的传播阈值λc=1A:当λ≤1A时,病毒在网络中迅速消失;当λ>1A时,病毒在网络中传播扩散并感染一定比例的节点.     

联合检测TSGF、CEA、CA153在诊断肺癌中的应用

为评价肿瘤相关因子（TSGF）联合癌胚抗原（CEA）和癌相关黏蛋白抗原CA153在肺癌诊断中的临床应用.通过检测正常人58例、肺癌81例、肺良性病变65例、肺部急性感染52例及急性感染抗感染后血清中TSGF、CEA和CA153水平.结果表明：肺癌和肺急性感染组患者TSGF、CA153水平明显升高,肺癌组CEA水平也明显升高,但肺急性感染组患者经抗感染治疗后血清TS-GF、CA153水平明显降低,回复至正常水平.TSGF、CEA、CA153诊断肺癌的敏感率分别为88.9%、42.0%、69.1%,其特异性＆gt;95%,准确性＆gt;78%,TSGF与CEA、CA153联合诊断肺癌的敏感性和准确性均达到90%以上.结论为：血清TSGF、CA153、CEA水平增高对诊断肺癌有一定的临床价值,三者联合能提高肺癌诊断的敏感性和准确性,但需复查以排除假阳性.     

低温处理对保加利亚乳杆菌冷应激蛋白表达影响的研究

通过PCR克隆了保加利亚乳杆菌中冷应激蛋白基因Csp A,并采用20℃的低温条件对对数期的菌体预处理2 h。提取菌体低温处理前后的总RNA并分别纯化得到mRNA,利用实时荧光定量PCR技术对保加利亚乳杆菌在低温预处理前后的冷应激蛋白基因转录数进行对比分析。结果表明,20℃、2 h的低温处理可使保加利亚乳杆菌冷应激蛋白Csp A基因的mRNA拷贝数增加3.34倍左右,推测冷应激蛋白Csp A的表达有所增加。     

碳纤维复合材料激光超声可视化检测系统设计研究

针对碳纤维复合材料的快速可视化检测,分析了激光超声可视化检测系统的原理.采用扫描激光方式,根据超声传播的可逆性原理,设计了结构简单、操作简便的碳纤维复合材料快速激光超声可视化检测系统,并进行了实验研究.实验结果表明,激光超声可视化检测系统能有效用于碳纤维复合材料结构的缺陷检测,且准确性高,检测速度快,单次检测仅需几十微秒.检测结果直观,可实时动态展示构件内部缺陷,也可对超声传播信息按时间帧回放、选取,利于分析缺陷的位置和尺寸.该系统易于实现完全非接触式检测,适合碳纤维复合材料结构的实时在线监测.     

免疫荧光制剂的制检及其在流行性出血热(EHF)方面的应用

本文对人和动物补体成份“C_3”和抗“C_3”抗体的提取精制及荧光标记作了探试性研究,首次将补体免疫荧光法由理论记载推向具体实用,所设计的抗IgG和抗C_3双重免疫荧光法,经对EHF免疫荧光检定证实,它较其它免疫荧光染色法具有更高的灵敏度,在EHF和其它疾病的临床诊断、疗效考核及病理研究中是一种理想的检测新方法。     

猪蓝耳病的防治

一、病症 猪蓝耳病的一个重要特点是亚临床感染病例多,阴性感染的母猪可通过胎盘将病毒垂直传染给胎儿,使猪群呈持续感染.猪蓝耳病病毒可在感染的猪体内存在很长时间.     

杆状病毒SeMNPV Se29基因的克隆、表达与抗体制备

目的:克隆和表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multieapsid nueleopolyhedrovirus,SeMNPV) ORF29全长基因(Se29),制备SE29蛋白的多克隆抗体,方法:用PCR的方法扩增得到Se29基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌B...     

斑马鱼心脏标记基因pitx2的多克隆抗体的制备

pitx2基因是一类bieoid相关的同源异型框因子成员,介导心脏左右不对称发育和内脏器官的偏侧化.pitx2基因位于Nodal信号途径的下游,直接由Nodal信号分子控制.用PCR技术扩增斑马鱼pitx2基因的部分编码区,并将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pGEX-4T-1-pitx2)转入B121感受态细胞,通过IPTG诱导表达融合蛋白.用GST珠亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.获得了pitx2原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗pitx2多克隆抗体.提取斑马鱼不同器官和组织蛋白,用自制的多克隆抗体检测pitx2基因在斑马鱼中的表达情况,发现pitx2基因特异性地在心脏、脑、肌肉、小肠和肝脏表达,尤其在心脏中有很高的表达,表明制备的抗体特异性非常好.