利用Ti质粒介导的二元载体法向小麦导入几丁质酶基因的初步研究

以小麦ＮＰＦＤ、９４－１６７、鄂恩一号３个品种的幼胚、幼穗为受体材料,利用Ｔｉ质粒介导的二元载体法,将含有几丁质酶基因的质粒ｐＢｃｈ导入小麦,经过抗性筛选,ＰＣＲ检测,获得一株转基因小麦,证实了外源几丁质酶基因已整合到小麦基因组中．     

利用Ti质粒介导的二元载体法向小麦导入几丁质酶 …

以小ＮＰＦＤ、９４－１６７、鄂恩一号３个品种的幼胚，幼穗为受体材料，利用Ｔｉ质粒介导的二元载休不幸针含有几丁质酶基因的质粒ｐＢｃｈ导入小麦，经过抗性筛选，ＰＣＲ检测，获得一株基因小麦，证实了外源几丁质酶基因已整合到小麦基因组中。     

转美洲拟Die抗冻蛋白基因（afp）番茄过氧化物酶,过？…

检测了转抗冻蛋白基因番茄Ｄ４代植株在低温条件下过氧化物酶（ＰＯＸ）,过氧化氢酶（ＣＡＴ）,超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活性。实验显示,转ａｆｐ基因番茄植株在苗期低温锻炼中,三种酶活性明显高于对照未转基因植株,表明转基因植株在生理生化水平上获得了有益的变异,且抗寒性增强。     

转美洲拟鲽抗冻蛋白基因(afp)番茄过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活性测定

检测了转抗冻蛋白基因番茄Ｄ４代植株在低温条件下过氧化物酶（ＰＯＸ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活性．实验显示：转ａｆｐ基因番茄植株在苗期低温锻炼中,三种酶活性均明显高于对照未转基因植株,表明转基因植株在生理生化水平上获得了有益的变异,且抗寒性增强．     

CCoAOMT基因反义表达载体的构建及转化苎麻的研究

采用RT-PCR的方法,克隆烟草木质素合成关键酶咖啡酰甲基转移酶(CCoAOMT)基因并测序．构建CCoAOMT基因反义表达载体,通过农杆菌介导法对苎麻进行遗传转化,得到转基因植株．采用PCR方法对其进行分子检测．为利用基因工程技术,创造适合我国国情的环保型低木质素苎麻转基因新品种奠定了基础。     

紫杆柽柳谷胱甘肽硫转移酶基因的烟草转化

将所克隆的紫杆柽柳谷胱甘肽硫转移酶基因(TaGST)构建成植物表达载体pBI-TaGST,通过农杆菌介导法将其转入烟草W38(Nicotiana tabacum cv.W38),获得了转基因的烟草植株.转基因植株的PCR和RT-PCR检测表明,该目的基因已经整合到烟草基因组上.     

拟南芥胚胎发生基因LEC1对水稻胚胎发育的遗传学效应

从拟南芥的球型胚-心型胚期荚果cDNA中,通过特异引物PCR,克隆到胚胎发生调控基因LECl.将克隆的目的基因构建到植物表达载体pWM101中,将其置于35S启动子下游,并通过PCR和酶切实验验证,获得了在植物中组成型表达LECl的表达载体.提取表达载体质粒,用Nhe Ⅰ酶切质粒,使其成线型,通过花粉管通道法分别转化可育系水稻0099和不育系金23A.转基因的不育系金23A结种子,但胚乳发育缺陷,将胚乳缺陷的种子安于无激素的1/2 MS培养基中培养,其中有一株发芽,长成外观正常的植株,另一株则只长出根.提取其DNA,以特异引物P35S和P2进行检测,为阳性转基因个体.不经授粉,从不育系获得具萌发能力的种子,说明LECl基因在单子叶的农作物水稻中能促进胚胎发生.通过叶片基因组DNA特异引物PCR分子检测,证明从可育系水稻0099也获得阳性转基因植株.     

含ipt基因的根癌农杆菌转化大豆萌动种胚的研究──Ⅲ苗期形态特征分析

将含有３５ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－ｉｐｔ基因－Ｎｏｓ基因的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４,做为供体．以大豆萌动种胚为受体,用菌液浸染法转化大豆品种黑农３６．对转化植株及对照植株苗期在发芽率、株高、叶子、致瘤等形态特征进行观察．发现转基因植株与对照植株有明显差异．转化植株生长状况明显弱于对照植株．植株矮小、叶子畸形生长,根致瘤率低．间接验证了外源ＤＮＡ的导入．说明苗期形态学分析可做为转基因植株早期筛选的方法之一．     

PCR扩增HBV x基因特征序列检测乙肝病毒DNA

提出了通过扩增特征序列检测乙肝病毒DNA的新方法．根据乙肝病毒DNA保守区的特点,利用Primer Premier 5.0设计出乙肝病毒x基因的特异性引物,并在以血清DNA为模板的聚合酶链反应体系中进行扩增,由此检测待测血清中是否存在乙肝病毒DNA．实验结果表明,该方法较传统的酶联免疫法灵敏,可以检测出酶联免疫法所检测不到的乙肝病毒,具有与免疫印迹一样的准确度;通过与以乙肝病毒s基因为靶序列的PCR反应体系比较,发现乙肝病毒x基因比s基因在序列上更为保守,更适合做乙肝病毒DNA检测的特征序列．     

基因枪法导入cyclAt和GUS基因获得转基因水稻

以cyclAt基因为目的基因,HPT和GUS为选择和报告基因,应用PDS-1 000/He型基因枪协同转导,通过轰击来源于水稻成熟种子诱导产生的胚性愈伤组织,获得了转基因水稻植株.结果表明:通过X-Gluc染色分析,GUS基因在愈伤组织和再生植株叶片中的表达效率高.以转基因植株的基因组DNA为模板,用cyclAt基因的特异性引物对其进行PCR扩增,只检测到1 000 bp左右的片段,比其1 604 bp的完整序列小,因此推测cyc1At基因在转导入水稻后被剪接.此外,在协同转导过程中,cyc1At和GUS可能与受体基因组DNA随机整合,因此视GUS基因为报告基因有一定局限性;但两者同时被整合的频率远高于单一基因的整合.