海百合Comanthina schlegeli共附生真菌Alternaria brassicae 93次级代谢产物研究

利用硅胶、Sephadex LH-20凝胶柱层析和高效液相色谱(HPLC)等方法对采自湛江海百合共附生真菌Alternaria brassicae 93的次级代谢产物进行分离纯化,根据化合物的理化性质、波谱数据以及与文献数据对照的方法确定化合物的结构。从海百合共生真菌Alternaria brassicae 93的次级代谢产物中分离得到5个化合物,分别鉴定为clavatol(1)、3R,14S-ochratoxin A(2)、3R,14S-ochratoxin B(3)、chaetoquadrin F(4)、ent-cycloechinulin(5)。化合物1,2,3,4,5,均为首次从海洋真菌中得到。     

一株海泥来源真菌Talaromyces flavus 210331次级 代谢产物及其抗氧化活性

为从Talaromyces 属中获得更多生物活性显著的次级代谢产物,对一株红树植物白骨 壤（Avicennia marina）根际海泥来源真菌Talaromyces flavus 210331的次级代谢产物及其抗氧化活性 进行研究。综合利用正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、半制备HPLC等色谱分离技 术,对该菌发酵产物的乙酸乙酯萃取物进行次级代谢产物分离纯化;综合运用NMR、MS波谱对纯 化的次级代谢产物进行结构鉴定,并评价鉴定次级代谢产物的抗氧化活性。结果显示从真菌T. flavus 210331 中分离鉴定 7 个单体化合物,包括 2 个异香豆素类化合物 hypoxymarin C（1）和 peniciisocoumarin F（2）,1个联烯类化合物penicilactone A（3）,4个苯衍生物diorcinol（4）、p-hydroxybenzaldenhyde（5）、trans-ferulic acid（6）和agidol 10（7）。抗氧化活性测试结果表明化合物1~3具有 显著的抗氧化活性,其IC50值分别为（0.180±0.025）、（0.180±0.037）和（0.230±0.013） mmol/L,强于 阳性对照trolox［IC50=（0.290±0.011） mmol/L］。     

南海红树内生真菌1947号代谢产物研究(Ⅱ)

首次研究了分离自香港红树Kandelia candel嫩叶的一株红树内生真菌（菌株编号1947）的代谢产物,从菌丝体共分离纯化得到3个化合物,经波谱解析或与标准样品对照分别鉴定其结构为1个神经酰胺——（5E）-N-十六碳酰基-2-氨基-1,3-二羟基-5-十八碳烯（A）和2个甾醇类化合物——过氧化麦角甾醇（B）和麦角甾醇（C）.     

南海红树林内生真菌B2次级代谢产物研究

 在对红树林真菌B2次级代谢产物的研究过程中,从培养液中分离得到3个化合物,通过波谱解析以及文献对照,分别鉴定为fusaric acid、 对苯二甲酸甲酯和4 butoxy benzeneacetic acid。其中fusaric acid单晶为首次从海洋真菌中分离得到, 并通过X射线衍射分析了它的晶 体结构。     

南海红树林内生真菌B77次级代谢产物研究

 红树林真菌B77是一株采自湛江红树Kandelia candel种子的内生真菌,该菌的种属尚未鉴定,首次研究了该菌的次级代谢产物。从该菌的培养液中分离得到4个化合物,通过波谱解析以及文献对照,分别鉴定为3-O-methylfusarubin,Fusarubin,大黄素,大黄素甲醚。3-O-methylfusarubin和Fusarubin为首次从海洋真菌中分离得到的化合物,初步的药理活性显示,它们对Staphyococcus aureus ATCC 27154的MIC分别为50.0和12.5μg/mL。考虑到该菌产生的生物活性物质,因此深入研究这一工作具有应用前景。     

红树老鼠簕来源真菌Talaromyces flavus TGGP35次级代谢产物及其抗氧化活性

为从Talaromyces属中分离获得更多生物活性显著的次级代谢产物,本文对一株药用红 树老鼠簕（Acanthus ilicifolius L.）来源真菌Talaromyces flavus TGGP35的次级代谢产物及其抗氧化 活性进行了研究。综合运用正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、半制备HPLC、薄层色 谱 TLC 等色谱分离方法,对该菌发酵产物乙酸乙酯粗浸膏部位进行系统分离纯化;综合利用 1DNMR、MS等波谱方法鉴定化合物的结构;采用抗氧化活性模型对化合物进行生物活性评价。从 内生真菌T. flavus TGGP35中分离得到7个单体化合物,分别为physcion（1）,paeciloxanthone（2）, 5-［（3E,5E）-3,5-nonadienyl］-1,3-benzenediol（3）,trans-ferulic acid（4）,3,4-二甲氧基甲苯 （5）,对羟基苯甲醛（6）和对羟基苯乙酮（7）。从Talaromyces属真菌中分离鉴定了7个次级代谢产 物,抗氧化活性测试结果表明,化合物6具有显著的抗氧化活性,其IC50值为0.12 mmol/L,强于阳性 对照trolox（IC50值为0.23 mmol/L）     

海洋来源普通青霉菌(Penicillium commune 366606)的化学成分研究

研究海洋来源普通青霉菌Penicillium commune 366606的化学成分.人工海水发酵,发酵产物通过乙酸乙酯萃取后得浸膏,运用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱(Sephadex LH-20)和反相RP-18柱色谱进行分离纯化.运用现代波谱学方法(NMR、MS)和结合文献数据等对分离所得化合物的结构进行鉴定.从海洋真菌发酵液中分离得到7个化合物,结构分别鉴定为melithasterol B(1)、chrysophanol(2)、2’,3’-dihydrosorbicllin(3)、2-pyruvoybenzamide(4)、2-aceylquinazolin-4(3H)-one(5)、fenestins A(6)、cyclo(D-Pro-D-Leu)(7).所有化合物均为首次从普通青霉菌(Penicillium commune 366606)中分离得到,并报道了化合物4～7对5株癌细胞活性研究.     

南中国海红树林海洋真菌2492号次级代谢产物研究

研究了来自香港海红树林Phragmites australi的海洋真菌2492号的次级代谢产物.用乙酸乙酯对该菌的培养液进行了液-液萃取,用硅胶柱层析法对提取物进行分离纯化,并用IR,MS,UV NMR波谱法推导确定了单离到化合物的结构.结果在发酵液中分离纯化得到4个有生物活性的生物胺,分别是Hypoxylin A(2),Hypoxylin B(1),N-乙酰酪胺(3)和2492-1(4).     

凤眼草抗肿瘤活性成分的分离与鉴定

对苦木科臭椿属植物臭椿(Ailanthus altissima(Mill)Swingle)的果实即凤眼草的提取物进行抗肿瘤活性研究.经反复纯化制备化合物,并根据化合物的理化性质分析、波谱解析、对照品比较及与文献报道对比鉴定化合物的化学结构;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法对粗提物和单体化合物进行抗肿瘤活性的测试.分离并鉴定出4个化合物,分别为shinjulactone A(1),shinjuglycoside B(2),5-hydroxymethylfural-dehyde(3),protocatechuic acid(4),化合物3,4为从该属植物中首次分离得到.活性筛选结果表明,凤眼草水提取物的大孔树脂60%乙醇洗脱物(Ⅰ)对人神经胶质肿瘤细胞株U87,95%乙醇浸提物的乙酸乙酯萃取物(Ⅱ)对人神经胶质肿瘤细胞株SF188,化合物1和2对以上两种细胞株,均有较好的抑制作用.     

榄钱两株附生真菌混合培养次级代谢产物研究

 通过混合培养2株附生于南海榄钱的真菌产生了2个抗菌次级代谢产物(A和B),其结构通过完整的波谱数据(主要是2D NMR数据)分别解析为新曲霉酸(A)和曲酸(B)。化合物B的结构进一步通过单晶X-射线衍射分析得到证实。当单独培养这2株真菌时未能得到化合物A。研究结果进一步表明,混合培养技术有助于从海洋微生物中发现更多独特的天然产物。     

濒危肉叶金腰内生真菌Cladosporiumsp.J6次级代谢产物研究

研究濒危藏药肉叶金腰内生真菌Cladosporium sp.J6次级代谢产物。采用硅胶、LH-20凝胶、C-18反相硅胶及HPLC等柱色谱技术对Cladosporium sp.J6的次级代谢产物进行研究;采用波谱分析及与文献比对等方法进行化合物结构鉴定;结果从肉叶金腰内生真菌Cladosporium sp.J6的发酵提取物中分离得到5个化合物,分别鉴定为alternariol(1)、alternariol 5-O-methyl ether(2)、β-咔啉(3)、尿嘧啶(4)和尿嘧啶核苷(5)。关于金腰属植物内生真菌次级代谢产物研究是首次报道。     

南沙石珊瑚来源真菌Aspergillus terreus SCAU139的聚酮类代谢产物研究

为了从海洋来源真菌的次生代谢产物中寻找抗植物病原真菌药物先导结构,采用PCR扩增技术对一株南沙石珊瑚来源真菌进行种属鉴定,运用柱色谱分离方法和波谱分析手段分离鉴定该菌株的次级代谢产物,并结合滤纸片扩散法测试单体化合物的抗菌活性。菌株鉴定为Aspergillus terreus,从其代谢产物中分离鉴定出7个已知化合物,分别为4-hydroxy-3-（3-methyl-2-buten-1-yl）-benzaldehyde（1）、terrein（2）、4-hydroxybenzaldehyde（3）,monacolin K（4）、butyrolactone I（5）、pernolide D（6）、hydroxysulochrin（7）,以上单体化合物对苹果黑点致病菌Alternaria alternate和菠萝黑心致病菌Curvularia australiensis的生长无明显抑制效果。石珊瑚来源真菌的次级代谢产物含有多种结构类型的聚酮类化合物。     

大花绿绒蒿内生真菌Neurospora sp.DHLRH-F次级代谢产物研究

为了研究藏药大花绿绒蒿内生真菌Neurospora sp.DHLRH-F的次级代谢产物,采用硅胶、C-18反相硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱及HPLC技术对其发酵物进行了系统分离;采用波谱分析技术进行化合物结构鉴定;采用光度法研究所得化合物对Fe2+,Fe3+的络合能力。结果从大花绿绒蒿内生真菌Neurospora sp.DHLRH-F的发酵物中分离得到3个多羟基化合物,分别鉴定为2-氯-6-甲氧基间苯二酚(1)、6-epi-5'-hydroxy-mycosporulone(2)、霉酚酸(3)。本文是首次关于绿绒蒿属植物内生真菌次级代谢产物研究的报道;分离得到的化合物1是新天然产物,有一定的络合Fe3+能力。     

延胡索内生真菌的分离鉴定及产功能酶菌株的初步筛选

采用纯培养分离方式获得纯化延胡索内生真菌菌株,通过形态学特征、ITS r DNA序列分析对分离菌株进行鉴定,利用6种培养基筛选出代谢产功能酶菌株。分离获得312株内生真菌,可归类于9个属,其中镰刀菌属是优势类群。对已测序的30株内生真菌产酶活性研究表明20株试验菌株产纤溶酶,18株产复合酶,16株产碱性蛋白酶,10株产接触酶,1株产纤维素酶;其中4株内生真菌可代谢产生4种不同功能酶,为代谢产多酶系菌株。延胡索内生真菌的分离鉴定及产功能酶菌株的筛选不仅丰富了内生真菌资源,而且也为获得新颖结构化合物提供理论基础。     

红豆杉内生真菌Fusarium solani B2-1萘酮类代谢产物研究

从红豆杉中分离得到一株内生真菌Fusarium solani B2-1,经大米固体发酵以后,从乙酸乙酯提取物中分离得到4个萘酮类次级代谢产物1～4,鉴定为Dihydronaphthalenone(1)、5-Hydroxydihydrofusarubin C(2)、镰红菌素(3)和Chrysanthones B(4).其中,化合物4为首次从镰刀霉属(Fusarium)真菌中分离得到.化合物1～4具有微弱的抑制海分枝杆菌Mycobacterium marinum ATCCBAA-535增殖活性,浓度为10 μg/mL下的抑制率分别为27.6%、25.0%、28.4%和24.4%.     

南海红树林内生真菌Fusarium solani 387~#次级代谢产物研究

采用色谱技术对Fusarium solani 387#的次级代谢产物进行分离纯化,根据化合物的理化性质、波谱数据以及与文献谱图、数据对照的方法确定化合物的结构。从南海红树林内生真菌Fusarium solani 387#的次级代谢产物中分离得到了9个镰红菌素类化合物,分别鉴定为5(R)-deoxyfusarubin(1)、5(S)-deoxyfusarubin(2)、3-methyl ether fusarubin(3)、Fusarubin(4)、Anhydrofusarabin(5)、Anhydro-5-deoxyfusarubin(6)、2-acetonyl-3-methyl-7-methoxy-naphthazarin(7)、Javanicin(8)、2-acetonyl-3-methyl-5-hydrogen-7-methoxy-naphthazarin(9)。通过X-射线单晶衍射首次确定了化合物1和2的绝对构型及存在形式。     

木榄内生真菌Penicillium sp. GXIMD00006的次级代谢产物及其降血糖活性研究

为挖掘木榄内生真菌的降血糖功效，对木榄内生真菌Penicillium sp. GXIMD00006进行扩大培养，采用柱层析技术对其次级代谢产物进行分离纯化，利用NMR、MS等技术结合文献对比对分得的化合物进行鉴定。结果表明：共获得11个化合物，分别为：(+)-sclerotiorin (1)、 sclerotioramine (2)、 isochromophiloneⅧ(3)、 terretonin (4)、 terretonin A (5)、 chrodrimanin A (6)、 chrodrimanin B (7)、 chrodrimanin E (8)、 3,5-二羟基麦角甾醇-7,22-二烯-6-酮(9)、麦角甾醇(10)和过氧化麦角甾醇(11),其中，2个萜类衍生物4和5均为首次从青霉属中分离得到。该研究首次发现化合物1具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，IC₅₀值为3.30μmol/L,表明木榄内生真菌的次级代谢产物具有开发成为新的α-葡萄糖苷酶抑制剂的潜力。     

冠突散囊菌与金黄色葡萄球菌混合发酵次级代谢产物及细胞毒活性

 为研究冠突散囊菌与金黄色葡萄球菌混合发酵次级代谢产物及细胞毒活性,采用硅胶柱、凝胶柱和高效液相色谱等方法进行分离纯化,并通过各种波谱技术进行结构鉴定,以4种肿瘤细胞A549、MCF-7、Bel-7402、Colo205为供试细胞株,采用MTT法对化合物进行细胞毒活性研究。从冠突散囊菌与金黄色葡萄球菌固体混合发酵提取物中分离鉴定了7个化合物,其中4个吲哚二酮哌嗪生物碱为echinulin(1)、cristatumin F(2)、neoechinulin A(3)、preechinulin(4),2个聚酮类化合物为flvoglaucin(5)、tetrahydroauroglaucine(6),1个nonadride类化合物为epiheveadride(7)。活性结果表明,化合物对4种肿瘤细胞株均具有不同程度的细胞毒活性,化合物3、5和7对肝癌Bel-7402细胞毒活性较强。     

863课题“深海微生物活性物质的挖掘及其利用技术”2013年度进展

2013年为863课题"深海微生物活性物质的挖掘及其利用技术"实施的第二年。该年度该课题进展顺利,完成了预期的研究计划。取得的研究进展主要分为以下5个方面:(1)在深海沉积环境样品中分离、纯化、保藏869株菌株,确定了729个菌株的系统进化地位,在深海海水样品中分离了海洋微生物237株,完成了其中168株的细菌测序工作;其中发现一个潜在的新属级类群。(2)对21株深海微生物进行次生代谢产物的分离和纯化,从中分离鉴定代谢产物186个,其中新结构化合物71个;其中1个对称的环四肽类新骨架化合物;发现具有较好药用活性的化合物25个;对Staurosporine的衍生物HDZ-115和Xanthocillin X进行深入的药理药效研究,确定为下一步成药性评价的先导化合物。(3)从深海来源微生物中发现对植物病原真菌具有良好抗性的脂肽类活性物质;筛选得到一系列抗污损活性的活性物质,其中1个单体化合物在海洋挂板实验中较好抗海洋污损生物活性,具有进一步开发价值。(4)完成了1株深海海洋放线菌SCSIO ZH66的全基因组扫描测序,克隆鉴定了Grincamycin,Lobophorin的生物合成基因簇,完成了Grincamycin,marinacarboline,lobophorin的生物合成途径。(5)从深海微生物中分离纯化两种具有重要经济价值的新蛋白酶,分离得到到新型高温α淀粉酶和生淀粉酶基因,成功实现异源表达,并对酶学性质进行了研究。     

光叶巴豆中的西松烷型二萜

光叶巴豆（ Croton laevigatus Vahl）枝叶用甲醇提取,利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20 凝胶柱层析和薄层层析对其化学成分进行分离纯化,从中得到了5个西松烷型二萜类化合物,经波 谱解析及对其理化性质进行对比,将结构确定为sublylactones A（1 1）、B（2 2）,laevigatlactones C（3 3）、 E（4 4）和F（5 5）,其中sublylactones A（1 1）和B（2 2）为首次从该植物中分离得到。