强直性脊柱炎患者外周血单核细胞亚型检测的临床意义

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血单核细胞亚型检测的临床意义.方法应用流式细胞仪检测66例AS患者外周血单核细胞亚型百分率,并与40例正常对照组进行比较.应用ELISA法测定血浆4种细胞因子(TNF-α,IL-6,IL-18和IL-17)的含量,并分析AS患者单核细胞亚型百分率与细胞因子表达水平的相关性.结果AS组中间型单核细胞百分率明显高于对照组(P0.01),经典型单核细胞百分率低于对照组(P0.01),非经典型单核细胞百分率在AS组与对照组间无差异(P0.05); AS组血浆4种细胞因子与对照组比较均升高(P0.05),且与中间型单核细胞含量呈正相关.结论中间型单核细胞与AS的发生密切相关;检测AS患者外周血单核细胞亚型含量可为AS诊断提供新的实验指标.     

非小细胞肺癌外周血有核细胞miRNA表达特点研究

miRNA在非小细胞肺癌的发生发展中发挥重要作用,为了解非小细胞肺癌患者外周血有核细胞的miRNA表达特征及其作用,采用第二代高通量测序技术对7例非小细胞肺癌患者和7例对照的外周血有核细胞miRNA表达水平进行检测,比较非小细胞肺癌患者与对照的外周血有核细胞miRNA表达特征,分析两者miRNA表达水平差异情况,共鉴定出非小细胞肺癌患者与对照的外周血有核细胞中有显著表达差异的miRNA 209种,其中肺癌样本miRNA表达上调的有138种,表达下调的有71种.研究结果显示非小细胞肺癌患者与对照样本的外周血有核细胞中miRNA表达具有显著差异,其中部分已被证实参与肿瘤发生、发展等过程.     

LncRNA MUC5 B-AS1在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

研究LncRNA MUC5B-AS1在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义。本次研究对象均来自于2014年6月至2016年7月在我院治疗的弥漫大B细胞淋巴瘤患者106例作为研究对象,另选取淋巴结反应性增生患者106例作为对照组,观察两组患者的LncRNA MUC5B-AS1差异,比较不同病理类型观察组患者的lncRNAs MUC5B-AS1表达情况之间的差异,分析不同lncRNAs MUC5B-AS1表达情况的生存期以及弥漫大B细胞淋巴瘤的影响因素。与对照组相比(3.67±1.01),观察组患者的lncRNAs MUC5B-AS1相对表达量(8.55±2.33)显著提升,差异存在统计学意义(t=19.785,P=0.000);不同的原发病灶、疾病类型、肿瘤最大直径、国际预后指数(IPI)以及乳酸脱氢酶含量的lncRNAs MUC5B-AS1表达情况之间的差异存在统计学意义(P0.05);lncRNAs MUC5B-AS1高表达组患者的总生存期以及无进展生存期显著低于lncRNAs MUC5B-AS1低表达组,MUC5B-AS1高表达组患者的死亡率显著高于MUC5B-AS1低表达组患者;患者的原发病灶、疾病类型、肿瘤最大直径、国际预后指数(IPI)、lncRNAs MUC5B-AS1表达情况以及乳酸脱氢酶含量均为弥漫大B细胞淋巴瘤患者生存的独立影响因素。lncRNAs MUC5B-AS1表达情况在弥漫大B细胞淋巴瘤患者的发生发展过程中发挥重要作用,在弥漫大B细胞淋巴瘤患者的增殖过程中可能发挥促进作用,其可作为弥漫大B细胞淋巴瘤患者的未来治疗的靶点。     

Elf-1基因在急性髓细胞性白血病中的表达情况

目的:建立实时定量PCR检测Elf-1基因表达水平的方法,了解急性髓细胞性白血病(AML)患者外周血Elf-1基因表达水平.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测33例AML患者:M2型17例、M3型6例、M5型10例和20例健康人外周血的单核细胞的Elf-1表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2~(-△Ct)×100%计算Elf-1基因表达水平.结果:AML组Elf-1表达水平(13.518±19.197)%明显高于健康对照组(2.044±1.321)%(P<0.01),不同AML亚型之间Elf-1的表达水平没有显著性差异(P=0.52),但各亚型AML的Elf-1的表达水平均与健康对照组比较均有显著性差异(P<0.01).结论:建立SYBR Green Ⅰ荧光实时定量PCR分析外周血Elf-1表达水平的方法,检测急性髓细胞性白血病Elf-1基因高表达情况.     

早期单核细胞增高对儿童肺炎支原体感染的诊断价值

目的 探讨早期单核细胞数增高与肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)感染的相关性,为MP肺炎早期诊治提供临床依据.方法 选取符合肺炎诊断标准住院患者513例,根据外周血单核细胞数分为外周血单核细胞增高组和外周血单核细胞正常组,采用金标法检测MP抗体(IgG、IgM),统计各组阳性病例数.在外周血单核细胞增高组中统计组内阳性病例数,并统计支原体感染阳性病例数在不同季节的分布情况.结果 早期外周血单核细胞增高组支原体抗体检测阳性率明显高于外周血单核细胞正常组(χ2=31.060,P<0.05),以冬春季患病率最高(χ2=9.973,P<0.05),且在早期外周血单核细胞增高组中支原体抗体阳性率高达57.8％,而单核细胞正常组支原体感染阳性率仅为29.5％.结论 儿童肺炎患者如早期单核细胞增高应高度警惕MP感染的可能,尤其在冬春季,需及时检测MP抗体,以指导早期临床诊断和治疗.     

生物信息学分析在非小细胞肺癌关键通路和基因鉴定中的应用

目的 通过高通量平台筛选差异表达基因间的相互联系和其相互作用的途径.方法 从高通量基因表达数据库(GEO)下载原始数据,比较非小细胞肺癌患者与健康样本的基因表达谱,确定差异表达基因(Differential Gene Expression,DEGs)和差异表达的microRNAs(DEMs).随后利用GeneSprin...     

长链非编码RNA在正常皮肤、瘢痕、瘢痕癌组织中的表达差异

目的分析正常皮肤组织、瘢痕组织、瘢痕癌组织中lncRNAs的差异表达,为瘢痕癌相关LncRNAs功能研究、生物标志物筛选提供实验基础.方法通过基因芯片技术,高通量获得正常皮肤组织、瘢痕组织、瘢痕癌组织中LncRNAs和mRNAs表达情况.筛选差异表达的LncRNAs,并应用RT-PCR方法进一步验证芯片结果.通过基因本体论(Gene Ontology,GO)分析及信号通路(Pathway)分析,分析差异表达的lncRNAs和mRNAs的功能分布.结果瘢痕癌组织与邻近未癌变瘢痕组织比较,有477种LncRNA表达上升,1 576种LncRNA表达下降.瘢痕癌组织与邻近正常皮肤组织比较,有1 753种LncRNA表达上升,2 435种LncRNA表达下降(差异倍数fold≥2.0,P 0.05).其中,125种LncRNA在正常皮肤组织、瘢痕组织、瘢痕癌组织中表达呈递增式增长,324种呈递减式下降(差异倍数fold≥2.0,P0.05).GO分析发现:差异表达的mRNAs主要参与免疫反应、趋化功能、细胞周期、生长调节、蛋白结合、蛋白质代谢等生理活动.Pathway分析发现:差异表达的mRNAs主要参与肿瘤蛋白P53途径、趋化因子途径、内质网蛋白加工途径以及黑素合成途径等.结论瘢痕及瘢痕癌组织中差异表达的LncRNAs极可能与皮肤瘢痕增生及癌变密切相关.     

茎瘤芥根和茎组织转录组比较分析

茎瘤芥是十字花科芸薹属植物的变种.本研究在前期的转录组测序和数字基因表达谱(DGE)测序的基础上进一步对榨菜的根组织进行了测序和分析.通过高通量RNA-Seq测序我们获得了高质量的数字基因表达谱数据超过一千万条,其中有约71%能比对到参考基因序列上.我们将根组织的数字基因表达谱数据与榨菜瘤茎膨大过程中的3个时期的数字基因表达谱数据进行了比较,获得了共有的(3组差异表达基因的交集)差异表达基因共3594个,对这些差异表达基因的表达趋势可以分为8个簇.同时对这些差异基因进行代谢途径的功能注释,发现这些差异表达基因除了在光合作用相关的途径外,主要分布在细胞壁的合成、降解以及二级代谢如类黄酮代谢等途径方面.通过对榨菜根组织的转录组测序,我们筛选得到了部分榨菜根与茎的差异表达基因,这些基因可能与榨菜的瘤茎膨大有关.     

老年房颤患者认知功能障碍特点分析

评估老年房颤患者认知功能状态,分析其认知功能障碍(CI)的特点。选取兰州市第五离职干休所平凉服务站医疗保健中心收治住院的330例老年患者为研究对象,其中老年房颤患者166例(房颤组),未患有房颤的老年患者164例(非房颤组)。采用MMSE、MoCA评估认知功能状态,比较基线资料和评估结果。MMSE评估结果显示房颤组存在CI53例,占31.93%,非房颤组存在CI29例,占17.68%,CI发生率差异明显(P0.05)。房颤组MMSE量表中时间/方向定位、语言即刻记忆、注意和计算、语言能力(物体命名、图形描绘)各维度评分均低于非房颤组(P0.05)。MoCA评估结果显示房颤组存在CI120例,占72.29%,非房颤组存在CI93例,占56.71%,CI发生率差异明显(P0.05)。房颤组MoCA量表中视空间与执行功能、注意力、语言功能、抽象思维、定向力各维度评分均低于非房颤组(P0.05)。老年房颤患者认知功能障碍的发生率较高,以注意功能、记忆功能、语言功能、定向力、物体命名、图形描绘、抽象思维等能力下降为主要表现。     

遗传性球形红细胞增多症——一家系中SPTA1基因突变分析及产前诊断

对1遗传性球形红细胞增多症(HS)家系进行基因检测分析,为家系成员提供遗传咨询和产前诊断。收集家系成员的临床资料,提取家系成员外周血及羊水细胞DNA,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)分析红细胞膜蛋白缺陷情况,用高通量测序、PCR结合Sanger测序检测分析基因突变情况。Western blot结果显示:患儿及其父亲α-血影蛋白表达量减少。高通量测序、PCR结合Sanger测序发现患儿SPTA1基因中存在c.2179_2180delAG和c.3710AG复合杂合突变,分别来自父亲和母亲,均为新突变,其中c.2179_2180delAG为致病突变的可能性大。PCR结合Sanger测序检测胎儿羊水细胞DNA未发现其携带上述突变,胎儿娩出后随访与产前诊断结果一致。本研究发现2个SPTA1基因新突变,扩展了SPTA1基因突变谱,对HS的基因诊断和遗传咨询有重要意义。     

牙鲆感染迟钝爱德华氏菌的miRNA转录组分析

为了探究牙鲆感染迟钝爱德华氏菌过程中miRNA的分子调控机制,以牙鲆头肾组织为研究材料,分析其感染迟钝爱德华氏菌后miRNA的差异表达情况.利用高通量测序平台(Illumina HiSeq)分别对感染迟钝爱德华氏菌3 h、6 h以及未感染的牙鲆头肾组织的RNA进行转录组测序,并对数据进行生物信息学分析.将测序结果与斑马...     

105例肺癌患者外周血中miRNA-10b的表达

目的 探讨miRNA-10b在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血的表达情况.方法 选取156例非小细胞肺癌患者,其中,105例列入实验组,51例排除入组,另选50例健康志愿人员为正常组.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测两组外周血中miRNA-10b的表达,并分析实验组患者外周血中miRNA-10b表达与临床、病理、治疗方法 的关系.结果 实验组外周血中miRNA-10b表达为1.85±0.14,而正常组外周血中miRNA-10b表达为1.03±0.18,实验组明显高于正常组;患者外周血中miRNA-10b的表达高低与烟草吸食情况、病理学TNM分期、肺癌的类型相关(P<0.05).结论 非小细胞肺癌患者外周血中miRNA-10b升高明显,miRNA-10b的高低与吸烟、病理类型、淋巴结转移和病理分期有关,可作为疗效的监测指标.     

ITP中T细胞活化信号分子c-Cbl和Cbl-b的表达变化

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)中T细胞活化信号通路相关分子Cbl-b和c-Cbl基因的表达情况.方法:利用SYBR Green实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测18例ITP患者外周血单个核细胞(PBMC)中Cbl-b和c-Cbl基因的表达水平,20例健康成人作为对照.结果:ITP组Cbl-b的表达水平(中位数为0.091%)与健康成人组Cbl-b的表达水平(中位数为0.366%)相比,明显降低(P0.001);而c-Cbl基因在ITP组中的表达水平(中位数为0.372%)与健康成人组的表达水平(中位数为0.298%)相比没有统计学差异,但c-Cbl基因在ITP女性患者样本中的表达水平(中位数为0.236%)明显低于男性患者样本c-Cbl的表达水平(中位数为0.479%)(P=0.039).结论:ITP患者外周血中Cbl-b表达下调,可能是其T细胞免疫异常活化的原因之一.     

听力损失中表达上调的miR-196a-5p靶向抑制Neuritn的表达

目的筛选鉴定听力损失中上调且靶向调控Neuritin的miRNA。方法构建CBA小鼠药物性听力损失模型(硫酸卡那霉素+呋塞米),采用高通量测序检测听力损失中差异表达的miRNA。利用生物信息学技术,分析预测靶向Neuritin的miRNA,取测序结果中高表达miRNA与靶向Neuritin的miRNA交集得到候选miRNA。使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)明确听力损失中候选miRNA高表达,使用miRNA mimics转染293T细胞,观察目标miRNA对Neuritin表达的靶向抑制作用。结果通过高通量测序与生物信息学分析获得3个在听力损失中表达升高且可能靶向调控Neuritin的候选miRNA,即miR-196a-5p,miR-211-5p和miR-6395。RT-qPCR实验发现miR-196a-5p在小鼠听力损失12h与24h后在Corti器中的均表达升高(P0.05); miR-6395在小鼠听力损失后12h表达降低,24h后表达升高(P0.05); miR-211-5p在小鼠听力损失后12h与24h表达均降低(P0.05)。Western Blot实验发现转染miR-196a-5p后293T细胞的Neuritin表达下降(P0.05)。结论听力损失中表达上调的miR-196a-5p可靶向抑制Neuritin的表达。     

白介素13在慢性鼻窦炎伴鼻息肉组织中的表达

目的比较白介素13(IL—13)在慢性鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)和慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)患者中的差异性表达。方法选取10例CRSsNP和20例CRSwNP患者作为研究对象。根据鼻窦CT反映的病变范围评估患者病情,采用模拟视觉量表(VAS)评估慢性鼻窦炎轻重程度;术后采用PCR法分析IL-13在CRSsNP和CRSwNP组患者鼻黏膜及息肉中的差异性表达。结果 CRSwNP组鼻息肉组织IL-13 m RNA表达明显高于临近黏膜及CRSsNP黏膜组织;CRSsNP组和CRSwNP组鼻窦黏膜组织IL-13 m RNA表达差异无统计学意义。结论 IL-13m RNA表达水平在CRSsNP和CRSwNP组患者鼻黏膜或息肉中存在差异;白介素13(IL—13)在慢性鼻窦炎伴鼻息肉的病理过程中发挥有重要的作用。     

乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达检测及其临床意义的研究

目的探讨锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)在乳腺癌患者和正常人外周血中的表达差异及其临床意义.方法采用实时荧光定量PCR方法检测218例乳腺癌患者和77例正常女性外周血中MnSOD基因表达水平,并进行分析.结果乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达水平为4.38±0.74,正常女性外周血中MnSOD基因表达水平为4.16±0.64,P0.001,有统计学意义.淋巴转移患者组和临床早期患者组与正常女性组比较,P0.001.结论淋巴转移和临床早期乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达水平显著低于正常女性,提示MnSOD的低表达与肿瘤的发生和发展有关.应用荧光定量PCR方法检测外周血MnSOD基因水平对监测乳腺癌有一定意义.     

膜性肾病差异性表达microRNA的靶基因功能分析

目的:探讨膜性肾病(MN)差异性表达microRNA的靶基因主要参与的Gene Ontology(GO)富集与Kyoto Encyclopedia Genes And Genomes(KEGG)通路.方法:100例MN患者与100例健康对照者(NC)作为实验对象.100例NC随机分成10组(NC1~10),每组10人.同样100例MN随机分成10组,每组10人(MN1~10).分别从实验参与者静脉采取全血10 mL,来源于静脉血的单个核细胞用于提取RNA.总RNA以组为单位等量混合用于高通量技术测序(high-throughput sequencing),对RNA测序结果进行长度分布,基因比对,RNA分类注释,RNA特有序列及其公共序列分析后,获得小核糖核酸(microRNA)进行MN与NC差异性表达分析来寻找显著表达microRNA.应用相关的软件对差异性表达的microRNA进行靶基因预测,靶基因借助功能注释软件对其参与的生物过程进行GO富集及KEGG通路分析.结果:靶基因在GO富集分析中主要集中在细胞器官组成,细胞膜组成,离子结合,生物代谢过程,生物调节过程等.靶基因在KEGG通路分析中主要参与嘌呤代谢通路,代谢产物生物合成,癌症通路,蛋白激酶信号通路等.结论:MN与NC之间存在着显著差异性表达microRNA.差异性表达的microRNA的靶基因参与的GO富集与KEGG通路可能与MN的发病机制与临床症状有着密切的联系.     

烟叶表面微生物类群两种检测方法的比较研究

为研究克隆文库法和高通量测序两种方法对烟叶表面微生物类群的检测效果,确定检测烟叶表面微生物多样性的最优方法,检测了基于细菌16S rDNA和真菌ITS区域的烤烟表面微生物类群的多样性.结果显示,高通量测序得到的序列数量比克隆文库法多,两种方法检测到细菌的OTU数目相近,但高通量检测的真菌OTU数目较多;稀疏曲线显示高通量测序的数据饱和度更高;预计的群落多样性(Chao1指数和Ace指数)克隆文库法均高于高通量测序法,实际的群落多样性(Simpson指数和Shannon指数)表明克隆文库法检测的细菌多样性略高,而高通量测序检测的真菌多样性略高;在检测到的细菌和真菌种类上,高通量测序略多于克隆文库法,两种方法检测的细菌优势类群基本一致,为假单胞菌属、不动杆菌属和鞘氨醇单胞菌属,但真菌类群相差较大,且高通量测序检测到大量新的真菌序列.总体上,高通量测序方法具有通量大、产出数据多的优势,可更全面、更准确地反映烟叶表面微生物群落结构.     

直接免疫荧光法分析白血病及骨髓增生异常综合征患者免疫表型

目的 :检测急性白血病 (AL)及骨髓增生异常综合征 (MDS)免疫表型及其临床意义。方法 :用流式细胞仪CD4 5设门直接免疫三标记法 ,检测 4 9例AL及MDS患者免疫表型。结果 :ALL双克隆型 9例 ,其中髓系伴T -ALL 3例 ,髓系伴B -ALL 4例 ,1例为髓系伴T、B标记 (CD13 +CD7+CD19+ ) ,1例同时CD7+CD19+ ;ALL同时表达CD3 4 及HLA -DR最高 (6 0 .0 1%) ,明显高于AML、MDS(P <0 .0 0 5 )。AML双克隆型 2 0例 ,7例为髓系伴CD7+ ,2例髓系伴CD19+ ,11例为同时表达CD3 4 +HLA -DR +。MDS患者骨髓细胞表达髓系成熟抗原CD13 +及CD3 3 +增高 ,未发现淋系抗原的表达。MDS -RAEB、RAEBT及转为白血病病例均高表达CD3 4 及HLA -DR抗原。结论 :用三标记法简便易行 ,提高诊断准确性 ;单抗组合应兼顾髓、淋系同时表达 ;应加胞浆抗原检测。     

女性系统性红斑狼疮患者外周血Tim-1表达水平及其与疾病活动的相关性

目的:检测T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1在女性系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血的表达情况,并探讨与SLE疾病活动的相关性.方法:采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测SLE治疗前后和健康对照组外周血中T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1的表达量,SLE活动性以系统性红斑狼疮病变活动指数(SLEDAI)表示,并进行相关性分析以明确T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1与系统性红斑狼疮患者疾病活动性的关系.结果:治疗前SLE患者外周血中T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1的表达水平明显高于对照组和治疗后SLE患者外周血中的表达水平,有统计学差异(P0.05),且其表达水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.639,P0.01).结论:T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1的表达水平与SLE的发病有关,且可反映SLE患者的疾病活动状态.