云南省Seo型汉坦病毒基因差异研究

为揭示云南省啮齿类动物携带的汉坦病毒的基因型及亚型，从来自云南的7个免疫荧光检测阳性的鼠肺标本中提取出病毒RNA，通过逆转录和巢式PCR获得了M片段G2区．序列分析表明，云南省内啮齿类动物携带病毒多为SEO型，且SEO型病毒间较为保守，相似性为93．7％～99．7％，且多在97％以上，系统发生树分析表明，云南省内SEO型病毒在构建的种系发生树上处于两个分支，分属于S1及S3亚型．     

云南3个不同地区水稻矮缩病毒S8片段的序列分析

用RT-PCR方法从云南昆明、玉溪和陆良3个地区的水稻样品中扩增到水稻矮缩病毒S8全长片段,核苷酸测定及序列分析表明,水稻矮缩病毒云南昆明、玉溪及陆良分离物S8片段全长均为1356 bp,含一个1266 bp的ORF,编码421个氨基酸.核苷酸和氨基酸同源性分析表明,4个中国分离物S8片段之间的核苷酸同源性为97.9%,其编码的氨基酸同源性为98.6%;4个中国分离物与日本分离物的S8片段核苷酸同源性和氨基酸相似性分别为94.7%和98.1%.昆明、陆良、玉溪和福建分离物应属同一株系,而日本分离物应属另一株系.     

呼伦贝尔市啮齿动物携带汉坦病毒的基因分型研究

为了研究内蒙古自治区呼伦贝尔市啮齿动物中汉坦病毒(HV)的型别及携带病毒情况,采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原,用RT-PCR法扩增阳性标本中HV的S(620~999nt)片段,使用clustalX(1.83)以及Phylip3.63构建系统发生树进行分型研究。结果表明,在呼伦贝尔市HFRS疫点共捕获啮齿动物185只,在7份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中6只为黑线姬鼠,1只为大林姬鼠,病毒携带率为3.78%。扩增到其中6份HV抗原阳性样品中S片段(620~999nt),分析获得的序列表明与现有的HTNV有最高的同源性,均为HTNV。其中NAa90、NAa118、NAa121和NAp137这4株病毒与分离自黑龙江黑线姬鼠的Bao14株分在同一分支,与病毒的亲缘关系最近,而NAa78、NAa100这2株病毒构成另一分支,与A9株的同源性为94.5%~95.5%,用部分M(2001~2301nt)片断的核苷酸序列构建的系统进化树与S片段的结果一致。结论:呼伦贝尔市的黑线姬鼠与大林姬鼠携带不同亚型的HT-NV,表现出HTNV在同一地区的遗传多样性。     

H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与表达

 根据已知H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因序列设计、合成克隆引物.自灭活的云南地方H5N1亚型病毒阳性临床组织样品中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(Pyobest^TMDNA Polymerase)扩增HA基因,采用Invitrogen定向表达系统(Champion^TMpET directional TOPO expression system)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组HA,分子质量约78ku.采用阳性血清经免疫印迹及ELISA分析重组HA的免疫反应性,结果表明重组HA能与H5N1亚型病毒抗血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性.     

HPV基因分型检测在宫颈疾病筛查中的意义

了解体检女性人乳头瘤病毒(HPV)感染型别分布及年龄特点,探讨HPV检测在宫颈癌及癌前病变筛查中的意义。采用凯普医用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术(Hybrimax),对1323例健康体检妇女进行宫颈21种HPV亚型感染筛查。1323例体检人群HPV总感染率为15.3%,21种亚型中有17种被检出,感染率最高的型别是HPV16,其他常见型别依次为52、58、68、53、45型,高危型感染率97.1%。1323例HPV感染率各年龄段检出率差异无统计学意义(P0.05)。甘肃地区健康体检女性人乳头瘤病毒(HPV)感染有相当比例,尤其是高危型,亚型分布且有一定区域性,对体检女性进行HPV分型检测有重要意义。     

中国大陆H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传分析及抗原相关性研究

为研究我国大陆H9N2亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的分子进化及抗原相关性, 本研究对来自15个省、市、自治区的34株H9N2亚型禽流感病毒的HA基因进行了测序及系统发育分析, 并采用交叉血凝抑制试验及交叉攻毒保护试验对不同遗传分支下毒株间抗原相关性进行了分析. 结果表明, 所有34个毒株HA基因均符合低致病性禽流感病毒的特征, 但毒株间变异程度增加. 系统发育分析表明, 我国大陆H9N2亚型禽流感病毒主要分为三个系列, 各系列内毒株没有明显的地区及时间特征. 抗原相关性研究表明, 不同遗传系列下的毒株其抗原相关性明显低于同一系列内部毒株间的抗原相关性, 说明我国H9N2亚型禽流感病毒抗原性差异较大. 此外, 本研究同时筛选得到了用于制备多价苗的代表毒株.     

云南柠檬生产区衰退病检测与分析

用柑橘衰退病毒DAS-ELISA试剂盒对采自德宏的柠檬样品进行测定.以阳性样品的总RNA为模本,用RT-PCR扩增柑橘衰退病毒外壳蛋白基因的部分序列并克隆测序.检测结果表明云南瑞丽柠檬受到柑橘衰退病毒的感染.16个柑橘衰退病毒柠檬分离物与其它柑橘衰退病毒分离物进行了CP基因部分序列组群分析,分析表明为害德宏柠檬的柑橘衰退病有3种类型,即速衰型、茎陷点型和苗黄型.     

中国西南主要苹果产区潜隐性病毒分子鉴定

为了深入了解苹果受潜隐性病毒的影响情况,本研究针对云南、贵州、四川三省的387份苹果叶片样本,利用RT-PCR及多重RT-PCR技术,分析鉴定了三种苹果潜隐性病毒——苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果茎沟病毒(ASGV)和苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)在苹果上的发生现状.结果显示,苹果样本中ASPV阳性率为89.4%,ASGV阳性率为100%,ACLSV阳性率为81.6%,且它们多为混合感染,共计304份样本同时感染了三种病毒,混合感染率为78.5%.与云南、贵州相比,采自四川的苹果样本受潜隐性病毒感染最为严重.本研究报道了我国西南苹果主产区潜隐性病毒感染现状,建立了一套快速有效的苹果潜隐性病毒分子生物学鉴定方法.     

云南部分地区黑山羊的芽囊原虫分子检测及基因分型

目的芽囊原虫(Blastocystis)是一种重要的人和动物消化道寄生虫。主要引起腹泻、腹痛及消瘦等疾病。其流行呈世界性分布,且发展中国家有更高的感染率。至今已确定的17种芽囊原虫基因亚型(ST1-17),其中ST1-9属于人兽共患型,ST10-17截至目前只在动物体内所检测到。方法本研究就在云南5个地区采集到的907份样品,基于SSU rRNA序列通过分子生物学方法检测,芽囊原虫总体检出率为41. 3%(375/907)。结果共鉴定出3个已知基因亚型(ST5,ST10,ST14)和4个新亚型(ST-novel 1,ST-novel 2,ST-novel 3,ST-novel 4),其中ST5作为该地区的芽囊原虫优势基因亚型。本试验还通过统计学方法分析其在年龄、性别和地区间均存在显著性差异。结论本研究不仅为云南地区黑山羊芽囊原虫防控提供了数据支撑,也进一步评估当地的公共卫生安全风险,具有重要公共卫生意义。     

桂林市HIV-1流行毒株的基因序列测定和亚型分析

为了解桂林市HIV-1感染者中HIV-1流行毒株亚型的分子流行病学特征,采集桂林市HIV-1感染者的抗凝全血样品42份,分离PBMC并提取DNA,用巢氏PCR方法扩增病毒env基因,并进行序列测定和亚型分析。系统进化分析表明,桂林市HIV-1感染者样品分别属于4亚型:重组型CRF01-AE亚型4份、重组型CRF08-BC亚型15份、重组型CRF07-BC亚型8份和01C亚型3份。可见,桂林市HIV-1感染者中流行毒株主要为CRF-BC,应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测,及时制定新的防治策略。