固定化E.coliBL21（pTc—gsh）细胞催化合成谷胱甘肽

分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋E.coliBL21（pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽（GSH）。从酶活收率及机械强度方面进行比较，选择卡拉胶为包埋载体，其最适PH为7.0，最适温度为40℃。相关物质对GSH的合成均有影响：半胱氨酸、甘氨酸的最达浓度为20mmol/L，谷氨酸的最适浓度为60mmol/L；Mg^2 /ATP为1-5（V/V）较合适；腺苷二磷酸（ADP）浓度为5mmol/L时对酶活的抑制为20%。优化条件下罐式反应器中GSH的产量为0.84g/L，操作稳定性较好；延迟加入甘氨酸时GSH产量可提高17.5%；与酵母生产ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应，GSH合成量达1.24g/L，收率比直接加入ATP提高24.2%。     

谷胱甘肽合成酶系基因协调表达体系的构建

通过 PCR获得 E.coli B谷胱甘肽合成酶系基因 ( gsh I,gsh II)片段 ,结合定点突变稀有起始密码子 ,设定 gsh I与 gsh II位置与距离 ,构建双顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I- gsh II,建立GSHI、GSH- II蛋白表达体系。结果表明 :以 0 .0 8mmol/L IPTG于 2 8℃诱导工程菌 E.coli BL2 1( DE3) ( p Trc99A/gsh I- gsh II) ,GSH- I、GSH- II蛋白比为 4.5∶ 1 ( m∶ m)时谷胱甘肽合成能力最高 ,达到每克湿菌体 8.5 mg。通过构建单顺反子重组表达载体 p Trc99A/gsh I、p Trc99A/gsh II测定GSH- I与 GSH- II蛋白的最适配比 ,结果表明 :在 GSH- I、GSH- II蛋白总量恒定的情况下 ,要提高谷胱甘肽产率 ,两者比例以 3∶ 1～ 6∶ 1为宜     

固定化E.coli BL21(pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽

分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋E.coli BL21 (pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽(GSH).从酶活收率及机械强度方面进行比较,选择卡拉胶为包埋载体,其最适pH为7.0,最适温度为40°C.相关物质对GSH的合成均有影响半胱氨酸、甘氨酸的最适浓度为20mmol/L,谷氨酸的最适浓度为60mmol/L;Mg2+/ATP为1～5(V/V)较合适;腺苷二磷酸(ADP)浓度为5mmol/L时对酶活的抑制为20%.优化条件下罐式反应器中GSH的产量为0.84g/L,操作稳定性较好;延迟加入甘氨酸时GSH产量可提高17.5%;与酵母生产ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应,GSH合成量达1.24g/L,收率比直接加入ATP提高24.2%.     

用化学发光法研究谷胱甘肽对羟自由基氧化鸟嘌呤的保护作用

利用鸟嘌呤-过氧化氢-钴（Ⅱ）化学发光体系，结合流动注射技术研究了生物活性物质谷胱甘肽（GSH）对羟自由基氧化鸟嘌呤的保护作用．实验结果表明，GSH明显抑制鸟嘌呤的化学发光，且抑制率与GSH浓度成量效关系，达到50％抑制率的GSH浓度为6．5mg／L．该方法为进一步研究DNA的抗氧化损伤机制提供了有效的研究手段．     

大肠杆菌半胱氨酸合成途径强化对谷胱甘肽生物合成的影响

谷胱甘肽(Glutathione,GSH)是一种细胞中广泛存在的活性巯基短肽,因其具有重要的生理活性功能而得到广泛关注。通过在Escherichia coli MG1655中过表达3-磷酸甘油酸脱氢酶(PGDH)和丝氨酸酰基转移酶(SAT),并与来源于Actinobacillus succinogenes的谷胱甘肽双功能合成酶GshF串联表达,成功构建了半胱氨酸合成途径强化的重组菌株。摇瓶发酵结果显示,在含有5g/L葡萄糖的LB培养基中,重组菌株的生长相对于原始菌降低,但其GSH的产量达到了0.97mmol/L,为原始菌的1.56倍,表明通过增加GSH合成前体半胱氨酸的供应可以显著提高GSH的生物合成水平。     

固氮鱼腥藻_AnabaenaazoticaHB686_谷氨酰胺合成酶的生化特性

固氨鱼腥藻HB686谷氨酰胺合成酶(GS)具有Mg~(2 )-依赖的生物合成活性和Mn~(2 )-依赖的γ-谷氨酰基转移酶活性.生物合成活性对ATP、谷氨酸和氯化铵有较强的亲和力,其Km值分别为0.80mM、0.48mM和0.68mM.γ-谷氨酰基转移酶对谷氨酰胺和羟氨的Km值分别为2.0mM和0.9mM.作者研究了pH和温度对谷氨酰胺合成酶活性的影响,发现蛋氨酸亚砜、尿素、铵离子、天冬氨酸和甘氨酸对谷氨酰胺合成酶均表现出不同程度的抑制作用.某些金属离子对维持谷氨酰胺合成酶的稳定有一定的作用.     

谷胱甘肽研究(开发)

谷胱甘肽(以下简称GSH)的化学名称为Y-L-谷氨酰-L 甘氨酸,1921年由Hopkins首先发现,GSH在自然界主要存在于动、植物体内,1930年GSH的化学结构得到确定,接着J.Rudinger等先后合成谷胱甘肽(1).谷胱甘肽是一种重要的生物活性三肽,具有多种生物功能,有清除自由基、解毒、延缓衰老和解除疲劳等作用.因此,谷胱甘肽的研究开发越来越被人们重视.     

GGT酶法合成γ-谷氨酰半胱氨酸

以大肠杆菌K-12基因组中克隆表达的γ-谷氨酰转肽酶作为催化剂,L-谷氨酰胺和胱氨酸为底物合成γ-谷氨酰胱氨酸,经还原生成γ-谷氨酰半胱氨酸.考察反应时间、酶浓度、补料方式等可能对酶促反应过程产生影响的因素,在L-谷氨酰胺0.1 mol/L、胱氨酸0.2 mol/L、酶浓度0.024 U/m L及p H为10.0的条件下,40℃反应12 h,γ-谷氨酰半胱氨酸的最大浓度为6.13 g/L,L-谷氨酰胺的最大转化率为24.5%.     

小鼠肝脏谷胱甘肽含量和酶活性的昼夜节律变化

<正> 昼夜节律是指的24小时变化的生物节律。已经发现动物对许多化学物质的生物学反应和敏感性都具有昼夜节律性波动,其发生机理还不十分清楚。为了了解控制室温在23℃时正常光周期(06:00时到18:00时光照)和倒置光周期(18:时到06;00时光照)对动物生物节律的影响,对CF—小鼠肝脏谷胱甘肽(GSH)含量、肝重、肝中r—谷氨酰半胱氨酸合成酶(r—GS)和r—谷氨酰转移酶(r—GT)的活性进行了测定研究。     

地锦草提取物对小鼠肝组织GSH-PX和CAT活性的影响

目的：观察地锦草提取物对小鼠肝组织GSH—PX(谷胱甘肽过氧化物酶)和CAT(过氧化氢酶)活性的影响．方法：地锦草提取物给小鼠连续灌胃28d，1次／d，1ml／次．结果：与空白对照组比较，地锦草提取物可明显提高小鼠肝组织GSH—PX和CAT活性．结论：实验表明，地锦草提取物具有较强的清除自由基及抗氧化、防衰老作用．