苜蓿花叶病毒复制酶基因全长cDNA植物表达载体的构建和对烟草的转化

将苜蓿花叶病毒中国分离株(Alfalfa mosaic virus Chinese isolate，A1MV-Ch)的复制酶P2亚基(90 kD蛋白)基因的全长cDNA构建到植物表达载体pROKⅡ中，得到重组植物表达载体pAIMV-FL．用三亲融合法导入农杆菌LBA4404，并转化烟草，经PCR检测，获得了含全长cDNA的转基因烟草植抹．     

CMV启动子克隆及其在植物体内的表达

根据细胞肥大病毒CMV启动子基因序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建具有Kan抗性和GUS intron报告基因的植物表达载体LpPCG,并将重组质粒转化到烟草叶片中.通过CMV启动子指导的GUS intron基因在烟草叶片内的瞬时性表达,比较了其植物表达特性.结果表明:CMV启动子可启动GUS在植物体内的表达,其表达活性相当于2×35S启动子的(80.4±26.6)％.     

烟草反义Mlo基因表达载体的构建

获得烟草反义Mlo基因的植物表达载体pBI 121-Mlo,为进行烟草遗传转化,获得该基因表达的缺陷型植株打下基础.从烟草叶片中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到Mlo基因的c DNA,以此为模板设计反义引物,通过PCR扩增出反义Mlo基因,将此反义Mlo基因与T载体连接,测序正确后再将此反义片段与植物表达载体pBI 121连接,构建烟草反义Mlo基因的植物表达载体pBI 121-Mlo.经Kan选择筛选出反义重组菌落,碱裂解法小量提取质粒后,用Xba I和Bam HI双酶切后再进行电泳鉴定.结果表明,目的基因已与植物表达载体pBI 121连接成功.成功构建了烟草反义Mlo基因表达载体pBI 121-Mlo.     

表达长喙田菁SrPCS4烟草的获得及Cd抗性研究

植物螯合肽(phytochelatins,PCs)在植物解除重金属的毒性方面具有重要作用,是以谷胱甘肽为底物,在植物螯肽合成酶(phytochelatin synthase,PCS)催化下合成的.作者已经克隆得到的长喙田菁(Sesba-nia rostrata)植物螯合肽合成酶SrPCS4 cDNA长为1035 bp,其ORF编码177个氨基酸,以pHANNIBAL及pART27为基础,构建了CaMV35S启动子驱动的SrPCS4基因植物表达载体pAM25,采用电击转化方法将pAM25导入根癌农杆菌EHA105,并通过改良叶盘转化方法用该菌株对烟草进行了转化,对转基因烟草进行了PCR与northern-blot检测,研究结果表明得到了表达该基因的烟草,但表达该基因的烟草不能够提高对Cd的抗性.     

猪圆环病毒2型ORF2基因及片段的原核表达

目的表达猪圆环病毒2型ORF2抗原,为研制猪圆环病毒2型血清学诊断方法以及生物制品生物安全性检验,提供技术支持。方法根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成5对引物,采用PCR方法从全序列重组质粒PCV2-LC中扩增出了ORF2基因和4个不同ORF2基因片段,分别将其克隆到原核表达载体PET-32a上,再分别将各个重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21中,用终浓度1 mmol/LIPTG诱导。结果表达产物以包涵体的形式存在,经Western-blot检测表明,表达的重组蛋白ORF2b、ORF2c、ORF2d能够被PCV2阳性血清所识别,具有良好的抗原性。表达的重组蛋白为ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

棉花曲叶病毒反式作用因子AC2对病毒链基因启动子的调控作用

以棉花曲叶病毒(CLCuV)侵染的烟草叶片组织总DNA为模板,通过聚合酶链反应扩增CLCuV反式作用因子AC2并插入克隆载体.将AC2置于CaMV35S启动子下构建了瞬时的表达载体.通过基因枪法将质粒载体导入烟草和棉花叶片细胞中进行瞬时表达.结果表明,在反式作用因子AC2的激活下,病毒链基因启动子的活性明显增强,然而激活后的病毒链基因启动子的活性仍低于互补链基因方向启动子;其表达方式与互补链基因启动子相似,即在叶肉及维管组织均有较高的活性.此外还探讨了AC2应用于植物遗传操作的可能性.     

TBSV病毒瞬时表达载体构建及其表达

为了深入理解植物RNA病毒载体表达系统,初步建立了利用TBSV病毒表达载体在寄主植物烟草中表达外源蛋白的技术体系.以番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus,TBSV)为材料,构建了含报告基因sGFP的WY1,WY2等2个重组病毒表达载体,并将载体导入农杆菌GV3101用于侵染烟草植株叶片;利用农...     

蜡梅CpPR-4基因的克隆及植物表达

在现有的蜡梅cDNA文库的基础上克隆了蜡梅病程相关蛋白4基因,并将其克隆至植物表达载体pCAM-BIA2301g上,构建了该基因的融合表达载体pCAMBIA2301g/CpPR-4,转入至大肠杆菌LBA4404后利用叶盘法转化至烟草并进行相关功能分析,通过抗病性实验及低温胁迫实验分析,转基因烟草对病毒无明显抗性,对低温不利环境有一定抗性.     

麻疯树JcCBF3基因的克隆及其抗寒功能初探

从麻疯树中克隆到一个CBF3基因,命名为JcCBF3,ORF全长678bp,编码225个氨基酸;氨基酸序列同源性比对结果显示JcCBF3与其他物种CBF序列具有较高的同源性,与木薯和橡胶树的相似度最高,达到79%和74%.RT-qPCR结果表明低温胁迫12h后JcCBF3基因的表达量达到峰值,为对照的62倍.将JcCBF3构建到植物过表达载体pBI121上并成功转化烟草.低温处理下转基因烟草幼苗的游离脯氨酸含量和超氧化物歧化酶活性的增幅均大于野生型烟草,并且JcCBF3基因的过表达增强了含有CRT/DRE元件的下游抗性基因的表达.     

H5N1型禽流感病毒HA基因在烟草中的表达

禽流感病毒H5N1是可以直接感染人类的甲型流感病毒，发展植物源口服疫苗是疫苗研究的方向之一．本研究通过农杆菌介导的方法将禽流感病毒H5N1的HA基因转化烟草．共获得38株潮霉素抗性植株，经PCR和Southern-blotting检测，目的基因已整合到转基因植株的基因组中．Western-dotting检测结果表明，目的基因在转基因烟草中得到表达，具有免疫原性，获得了能够表达HA基因的植物口服疫苗候选植株．     

计算机病毒的防治

通过长期实践总结了病毒发生的一些征兆，并对目前流行的病毒和反病毒机制进行了分析，指出只有将反病毒与防病毒技术结合使用才能最大限度预防病毒的发生并避免其灾害，并提出了具体的病毒防范措施。     

石河子地区大葱病毒病毒源的鉴定

石河子地区大葱病毒病主要表现为黄化、矮缩、条纹症。1986年我们从本院表现黄化、条纹症的大葱病株上分离到一个病毒分离物—86—1。经寄主范围测定,其奇主范围很窄,只感染百合科的大葱、洋葱和韭菜等。通过汁液摩擦和蚜虫传染,光学显微镜下检查可以看到不定型内含体。病毒致死温度为70—75℃,稀释限点为1000—10000,体外保毒期为4—8天,电镜下观察病毒粒体线状,大小为750—850nm,超薄切片观察,可见风轮状内含体。说明为马铃薯y—组病毒的成员。根据上术特性和有关资料分析,石河子地区大葱病毒病的毒源应是洋葱黄矮病毒。近年来,石河子地区大葱病毒病发生日趋严重,一般发病率为5—10％,重者达25％以上,病株平均减产达27.3％。田间症状主要表现为黄化、矮缩和条纹。病叶有时扭曲,留种株严重矮化、花序减少,有时畸形、结实率降低,减产可达50％,严重影响大葱的生产,为此于1986—1987年对该病毒源进行了初步鉴定。     

网络型病毒与计算机网络安全

传统的计算机病毒分类法常以寄生对象为标准将病毒分为文件型、引导型和混合型，但根据当前病毒发展的趋势，应增加一类网络型病毒。网络型病毒的寄生对象广泛、传播速度快、危害广，它利用Internet的开放性和软件系统的缺陷，破坏网络中的各种资源以及网络通讯，某些种类的网络病毒还是黑客工具。因此结合多个具体实例，分析了网络型病毒对网络安全的危害，提出网络型病毒的防治应首先从管理措施上着手，并综合防火墙技术、病毒防治软件、软件更新、数据备份等多种技术措施。     

病毒在生物进化中的重要意义

最早的原始 RNA 是地球上的第一批生命。逆转录 RNA 所产生的 DNA 是球上第一批以DNA 为遗传信息载体的生命祖先。当今的一切生物都重现着原始 RNA 的进化方式,即以基因的重排与重组作为产生物种多样化的手段。这些都可由当代病毒学的新发现中获得证据。     

一种新型计算机病毒的分析

分析了一种新型计算机病毒——“别碰我”病毒。它是一种恶性病毒,附着在·COM文件上,当运行该文件时,传染其它·COM文件,一旦条件满足,能够删除命令文件。文中介绍了病毒的分析过程及病毒流程,同时提供诊断和解毒的方法。     

应用二温式多重PCR技术鉴别鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒

为了简化聚链反应（PCR）程序和加快检测速度,将二温式PCR与多重PCR结合起来,建立一种同是检测鸡传染性支气管炎病毒（IBV）和鸡传染性喉气炎病毒（ILTV）的二温式重PCR技术,试验根据IBV和ILTV的基因文库,设计2对分别与IBV和ILTV某段基因序列互补的引物。用这2对引物同一样品中的IBV、ILTV核酸模板进行二温式多重PCR扩增,结果均同时得到2条特异性大小与实验设计相符的1720bp(IBV)和647bp(ILTV）的扩增带,而对其他6种禽病病原的扩增结果均为阴性,敏感性测定结果表明明,该二温式多重PCR技术检出10pg的IBV RNA模板和10pg的ILTV DNA模板。     

浅析计算机病毒与防治

计算机病毒严重地干扰了人类正常的社会生活,给计算机系统带来了巨大的潜在威胁和破坏。目前,病毒已成为困扰计算机系统安全和计算机应用的重大问题。为了确保信息的安全与畅通,从计算机病毒的概念出发,分析计算机病毒的内涵和类型,并对计算机病毒来源进行分析,最后介绍计算机病毒的一些主要防护措施。     

浅析计算机病毒及其防范措施

简要分析了计算机病毒的内涵、类型及特点，针对网络病毒的防治从系统防毒、终端用户防毒和服务器防毒等方面进行了探讨，并概述了网络防病毒产品的发展趋势。     

计算机病毒及其防治

本文阐述了计算机病毒的特征、危害以及判断计算机病毒的方法,并积多年工作经验,对计算机病毒查杀和预防做出系统的总结.     

罗汉果花叶病病原病毒鉴定

从典型病株上分离到1种大小为12nm*(600-800)nm的线状病毒,该病毒可通过汁液摩擦和棉蚜（Aphis gossypii)传播,人工接种可侵染罗汉果（Siraitia grosvenorii),西葫芦（Cucurbita pepo),南瓜（C.Moschata),黄瓜（Cucumis sativus),西瓜（Cirullus vulgaris),毛节瓜（Citrullus vulgaria)和瓠瓜（Lagenaria siceraria)等葫科植物引起花叶症状,侵染苋色藜（Chenopodium amaranticolor)引起局部褪绿斑点,接种番木瓜（Carica Papaya),普通烟草（Nicotiana tabacum),心叶烟（N,glutimosa),曼陀罗（Datura stramonium),洋酸浆（Physalis floridana),番杏（Tetragonia tetragonioides),豇豆（Vigna sinensis),未见有任何症状：病毒的致死温度为55度－60度,稀释终点为10^-3,10^-4,存在17度－25度下放置10d还有侵染活力;ELISA测定结果表明该病毒与西瓜花叶病毒－2（WMV－2）有密切的血清学关系,上述结果表明,引起广西罗汉果花叶病的病原病毒是WMV－2的一个株系,本研究还表明,罗汉果花叶病毒与番木瓜环斑病毒（PRSV）,马铃薯Y病毒＊PVY）,烟草蚀纹病毒（TEV）,大豆花叶病毒（SMV）及莴苣花叶病毒（LMV）均有较密切的血清学关系。