在拓扑异构酶Ⅰ缺失的大肠杆菌中拓扑异构酶Ⅲ参与高负超螺旋的消除

在拓扑异构酶Ⅰ缺失的大肠杆菌突变株中,抑制转录和翻译可以消除高度负超螺旋.为了检测起作用的拓扑异构酶,在拓扑异构酶Ⅰ缺陷的菌株中,以萘啶酮酸抑制旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ的活性,结果表明并未影响高度负超螺旋的消除.进一步作了拓扑异构酶Ⅰ,旋转酶,拓扑异构酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的体外松弛实验,结果表明,拓扑异构酶Ⅱ可以松弛高度负超螺旋到正常的超螺旋水平.可以认为拓扑异构酶Ⅱ负责松弛高度负超螺旋并受到某种信号机制的调控.     

磷酸吡哆醛对H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的影响

为建立DNA拓扑异构酶活性测定方法和探讨磷酸吡哆醛(PLP)抑制肿瘤细胞增殖的可能机制,本实验以DNA琼脂糖凝胶电泳EB荧光法测定了H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶I(TOPOI)的活性。结果表明维生素B6的活性形式PLP能有效地抑制TOPOI松弛负超螺旋的作用,且抑制效应与PLP剂量呈正相关。从而证实PLP能明显抑制TOPOI的活性并在分子水平上调节细胞周期活动和肿瘤细胞增殖活动。     

藤黄酸衍生物的合成与抗菌活性研究及其对拓扑异构酶的影响

藤黄酸分子式为C_(38)H_(44)O_9,具有较好的抗肿瘤活性,但尚无其抑制细菌生长方面活性报道.以藤黄酸为母药,合成得到藤黄酸甲酯和藤黄酸二甲基乙酰胺两种藤黄酸衍生物,考察这几种药物对革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性细菌大肠杆菌的生长的影响,并通过凝胶电泳法检测几种药物对DNA拓扑异构酶活性的影响.实验结果表明,三种药物对革兰氏阴性细菌大肠杆菌均无抑制作用,对革兰氏阳性细菌金黄酥葡萄球菌有抑制作用.藤黄酸及其衍生物可以通过抑制拓扑异构酶的活性而抑制革兰氏阳性细菌金黄酥葡萄球菌生长的作用.     

芫花及其主要有效成分芫花酯甲抗癌活性研究进展

芫花民间用于治疗乳腺炎,各种腹水和引流产。其含有瑞香烷型二萜原酸酯类化合物芫花酯甲为植物中罕见的抗癌有效成分。抗癌作用机理为DNA拓扑异构酶I抑制剂。     

赤芝、紫芝三萜类成分指纹图谱的优化与比较

对高效液相色谱的色谱条件进行优化,建立灵芝三萜类成分的指纹图谱分析方法,拟定赤芝、紫芝指纹图谱的共有模式,并将其初步应用于评价赤芝与紫芝的质量差异。优化后的流动相为乙腈-2%冰醋酸(梯度洗脱),检测波长为252 nm,流速为1mL/min,柱温为35℃,14批赤芝、7批紫芝共标示出29个共有峰.鉴别了3个成分(灵芝酸A、C2、G),发现灵芝酸A的峰最强;赤芝与紫芝的共有峰相对比值较接近,但紫芝的单位生药峰面积只有赤芝的5%~10%左右,说明含灵芝制剂的质量评价应采用指纹图谱与含量测定相结合的方法.采用优化后的方法获得的灵芝三萜指纹图谱表明,赤芝三萜类成分较其它文献报道多,紫芝中三萜类成分能明显检出,说明该方法准确可靠,重复性好.     

生物体中的乙酰羟酸还原异构酶

乙酰羟酸还原异构酶是植物、微生物中的支链氨基酸生物合成过程中的一种重要酶，该酶是由两个相同单体组成的同源二聚体，催化乙酰羟酸到α、β-二羟酶的反应，反应中需要NADPH和二价金属离子作辅助因子，酶的活性受到支链氨基酸合成途径中间产物类似物的抑制。     

五环三萜类化合物的抗肝炎病毒活性研究进展

五环三萜是一类次生植物代谢产物，由异戊二烯（2-甲基丁二烯）（C5H8）单元构成，其具有抗病毒、抗肿瘤、抗炎等多种药理活性.以五环三萜类化合物甘草酸、甘草次酸、雷公藤红素、白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸、柴胡皂苷C为例，总结五环三萜类化合物及其衍生物抗甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的活性及构效关系和作用机制.相关研究表明该类化合物主要通过抑制病毒复制和进入宿主细胞以及调节机体免疫来发挥作用，这一结果为结构新颖、作用机制独特、毒副作用低的新型抗病毒抑制剂的设计提供了重要依据.     

UPLC-Q-TOF-MS分析灵芝孢子粉中三萜类化合物

针对目前灵芝孢子粉中三萜类化合物的检测方法大多需要标准品且标准品稀少、昂贵问题,通过UPLC-Q-TOF-MS技术,对灵芝孢子粉中三萜类化合物进行定性检测和鉴别.结果表明,在灵芝孢子粉提取物中共鉴定25种灵芝三萜化合物.可为创建灵芝三萜指纹图谱库,灵芝三萜的检测、药效评价及品质测定提供参考.     

以重组人DNA拓扑异构酶Ⅰ为靶位从天然产物及其衍生物中筛选抗肿瘤化合物

为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ(hTopoⅠ)为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选,首次使用毕赤酵母表达了hTopoⅠ。在微量反应体系中,测定了化合物抑制hTopoⅠ松驰活性的能力,并用MTT实验验证筛选到的hTopoⅠ抑制剂的抗肿瘤活性。从74个结构新颖的天然产物及人工合成的黄酮类衍生物中筛到6个hTopoⅠ抑制剂,有4个化合物抑制肿瘤细胞生长的能力较强。     

以重组人DNA拓扑异构酶I为靶位从天然产物及其衍生物中筛选抗肿瘤化合物

为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ(hTopoI)为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选,首次使用毕赤酵母表达了hTopoⅠ.在微量反应体系中,测定了化合物抑制hTopoⅠ松驰活性的能力,并用MTT实验验证筛选到的hTopoⅠ抑制剂的抗肿瘤活性.从74个结构新颖的天然产物及人工合成的黄酮类衍生物中筛到6个hTopoⅠ抑制剂,有4个化合物抑制肿瘤细胞生长的能力较强.     

灵芝真菌发酵生产灵芝多糖和灵芝酸

提出了灵芝真菌同时高效生产灵芝多糖和灵芝酸的发酵过程。在摇瓶中考察了氮源、接种量、起始葡萄糖浓度和装液量对灵芝细胞生长及灵芝多糖和灵芝酸生产的影响。结果表明 ,酵母膏和蛋白胨复配作为氮源有利于细胞生长。接种量对细胞量有一定影响 ,但是对产物积累量影响更大。在 50 g/ L起始糖浓度下 ,细胞干重达到 1 6.7g/ L,胞内多糖、胞外多糖和灵芝酸分别达 1 .1 9g/ L,0 .854g/ L和 2 1 2 .3mg/ L。考察装液量发现 ,小装液量有利于提高细胞生长速率和产物的生产速率     

Preferential relaxation of supercoiled DNA containing a hexadecameric recognition sequence for topoisomerase I

In prokaryotes, the degree of supercoiling of DNA can profoundly influence the use of specific promoters. In eukaryotes, a variety of indirect observations suggest that DNA topology has a similar importance in proper gene expression. Much attention has therefore been focused on the cellular proteins that control DNA supercoiling, among which are the enzymes topoisomerase I and II. A hexadecameric sequence functions as a strong attraction site for topoisomerase I. Here we report that the interaction of topoisomerase I with this sequence motif is highly specific, because a single base-pair substitution prevents strand cleavage and thereby catalytic activity at the sequence. Thus, supercoiled DNA containing the recognition sequence is relaxed preferentially by topoisomerase I compared to a control, but no difference in the relaxation rate is observed for supercoiled DNA carrying the mutated sequence. The preference for the recognition sequence seems to be an intrinsic property of all eukaryotic type I topoisomerases, suggesting that the interaction might be important in a fundamental biological process.     

T4 DNA topoisomerase: a new ATP-dependent enzyme essential for initiation of T4 bacteriophage DNA replication.

A novel ATP-dependent DNA topoisomerase which makes reversible double-strand breaks in the DNA double helix has been purified to near homogeneity from T4 bacteriophage-infected Escherichia coli cells. Genetic data suggest that this activity is essential for initiating T4 DNA replication forks in vivo.     

Need for DNA topoisomerase activity as a swivel for DNA replication for transcription of ribosomal RNA

Yeast strains with mutations in the genes for DNA topoisomerases I and II have been identified previously in both Saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomyces pombe. The topoisomerase II mutants (top2) are conditional-lethal temperature-sensitive (ts) mutants. They are defective in the termination of DNA replication and the segregation of daughter chromosomes, but otherwise appear to replicate and transcribe DNA normally. Topoisomerase I mutants (top1), including strains with null mutations are viable and exhibit no obvious growth defects, demonstrating that DNA topoisomerase I is not essential for viability in yeast. In contrast to the single mutants, top1 top2 ts double mutants from both Schizosaccharomyces pombe and Saccharomyces cerevisiae grow poorly at the permissive temperature and stop growth rapidly at the non-permissive temperature. Here we report that DNA and ribosomal RNA synthesis are drastically inhibited in an S. cerevisiae top1 top2 ts double mutant at the restrictive temperature, but that the rate of poly(A)+ RNA synthesis is reduced only about threefold and transfer DNA synthesis remains relatively normal. The results suggest that DNA replication and at least ribosomal RNA synthesis require an active topoisomerase, presumably to act as a swivel to relieve torsional stress, and that either topoisomerase can perform the required function (except in termination of DNA replication where topoisomerase II is required).     

中国鲎鲎素T-1抗人早幼粒白血病HL-60细胞活性研究

利用从中国鲎血细胞中提取的鲎素Ｔ－１作抗肿瘤活性实验．结果表明,鲎素Ｔ－１在体外对人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞的增殖有明显抑制作用．急性毒理实验显示,鲎素Ｔ－１对正常活体毒性较小,可用于活体实验．荷瘤裸鼠实验统计,鲎素Ｔ－１对肿瘤抑制率达４２．３％．     

喜树碱衍生物的研究进展

喜树碱是一种重要的抗癌药物,它通过选择性作用拓扑异构酶I(Top I)而发挥抗癌作用。由于喜树碱存在毒性大、溶解性能差以及体内稳定性差等不足,限制了它的临床应用。文章主要综述喜树碱7,9,10,20-位衍生物的研究进展,目标在于降低它的毒性,提高体内环境下的稳定性和溶解性,使其应用更广泛。