非妊娠小鼠子宫内膜白血病抑制因子基因表达研究

白血病抑制因子（LIF）能抑制胚胎干细胞的分化和保持其增殖能力,并与胚泡着床及胚胎早期发育有着密切的关系。经实验证实,LIF基因在子宫内膜中的表达具有高度的时间限制性。采用反转录聚合酶链式反应技术（RT－RCR）对小鼠子宫内膜LIF基因表达进行了研究,结果显示：妊娠第4天小鼠的子宫内膜组织的样本在电泳图的538bp处出现清晰的电泳带,表明该组织有LIF基因的强表达;而在所检测的13只非妊娠小鼠子宫内膜的组织样本中均未发现LIF基因表达讨论了小鼠动情周期中各阶段的孕激素水平对子宫内膜LIF基因表达产生的影响,提出了一定的孕激素水平是启动LIF基因表达的必要条件     

S100A10基因在小鼠子宫中的表达及性激素对其表达的调节

S100A10是S100钙结合蛋白家族成员之一,是一种钙依赖性的信号通路的介导分子,近年来有研究表明,它在胚胎植入位点有明显的高表达.文中采用半定量RT-PCR和原位杂交方法,研究了S100A10基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和正常动情周期子宫中的表达及其受性类固醇激素的调节.观察发现:S100A10基因在小鼠多种组织中都有表达,在卵巢、子宫、睾丸及附睾等一些生殖器官中表达水平尤为高;在妊娠第4天,子宫中S100A10基因表达明显上调,且在子宫内膜植入位点处有非常显著的高表达,其mRNA分布于对系膜侧的腔上皮细胞和功能层的基质细胞,且基质细胞中的信号强于腔上皮细胞,而非植入位点呈现极其微弱的表达;从妊娠第5天直到分娩第1天子宫内都维持恒定的S100A10表达;正常动情周期中,S100A10基因在动情前期和动情期子宫中表达明显上调;卵巢切除模型显示雌激素显著上调S100A10基因的表达,孕激素下调其表达.以上结果提示S100A10可能具有抑制胚胎植入位点腔上皮细胞的过度凋亡和促进基质细胞的增殖与蜕膜化的作用以及参与子宫应激反应过程.     

S100A10基因在小鼠子宫中的表达及性激素对其表达的调节

S100A10是S100钙结合蛋白家族成员之一，是一种钙依赖性的信号通路的介导分子，近年来有研究表明，它在胚胎植入位点有明显的高表达.文中采用半定量RTPCR和原位杂交方法，研究了S100A10基因在小鼠中的组织特异性表达，在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和正常动情周期子宫中的表达及其受性类固醇激素的调节.观察发现：S100A10基因在小鼠多种组织中都有表达，在卵巢、子宫、睾丸及附睾等一些生殖器官中表达水平尤为高；在妊娠第4天，子宫中S100A10基因表达明显上调，且在子宫内膜植入位点处有非常显著的高表达，其mRNA分布于对系膜侧的腔上皮细胞和功能层的基质细胞，且基质细胞中的信号强于腔上皮细胞，而非植入位点呈现极其微弱的表达；从妊娠第5天直到分娩第1天子宫内都维持恒定的S100A10表达；正常动情周期中，S100A10基因在动情前期和动情期子宫中表达明显上调；卵巢切除模型显示雌激素显著上调S100A10基因的表达，孕激素下调其表达.以上结果提示S100A10可能具有抑制胚胎植入位点腔上皮细胞的过度凋亡和促进基质细胞的增殖与蜕膜化的作用以及参与子宫应激反应过程.     

miRNA与子宫内膜容受性

microRNAs(miRNAs)是一种内源性非编码小RNA,以完全或非完全互补的方式与其靶mRNA相结合,通过影响靶基因转录或翻译来调控细胞发育、分化、增殖、凋亡及疾病的发生发展等.在胚胎着床的子宫内膜容受性形成及蜕膜化过程中,胚胎滋养层细胞对子宫内膜的有控性侵袭是胎儿正常发育的基础.虽然,目前对miRNA与子宫内膜容受性的关系仍不十分清楚,但是已有一些研究表明,在正常妊娠胎盘、绒毛和正常子宫内膜中,一些miRNA与靶基因存在一定的的互作关系.本文简要综述了miRNA与子宫内膜容受性相关的研究进展.     

SWAP-70在小鼠正常动情周期和围植入期子宫中的表达及其调节

SWAP-70是鸟苷酸交换因子家族成员之一，是PI3K介导的酪氨酸磷酸化受体下游通路的信号分子之一. 以往的研究及我们的前期工作初步表明它在小鼠子宫和恒河猴胚胎植入位点有高表达，提示此分子可能参与了胚胎植入的调节. 为此，本研究在小鼠模型中，采用原位杂交、免疫组化和半定量RT-PCR方法，系统地研究了SWAP-70在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和动情周期子宫中的表达及其受雌、孕激素的调节. 结果表明SWAP-70在植入位点有非常显著的高表达，其mRNA和蛋白分布于胚泡以及对系膜侧的腔上皮细胞和临近胚泡的子宫基质细胞，而在非植入位点表达强度很弱；在妊娠第7天和第9天的母胎界面上，滋养层巨细胞、迷走滋养层和海绵滋养层都维持较强的SWAP-70表达；正常动情周期中，SWAP-70在动情期子宫中表达明显上调；卵巢切除模型显示雌激素显著上调SWAP-70的表达，孕激素能够阻断雌激素的作用. 以上结果提示，SWAP-70可能参与胚胎植入过程中多种细胞行为的调节，如胚泡黏附、基质细胞的增殖与蜕膜化以及滋养层细胞的浸润和分化过程，同时在动情周期子宫内膜细胞功能调控中发挥一定作用.     

小鼠子宫内膜LIF基因表达与孕激素的关系研究

白血病抑制因子（LIF）是一种多功能活性的糖蛋白，LIF基因在大多数妊娠第4天的小鼠子宫内膜进行着强烈的表达，然而LIF基因表达调控的机理目前尚不清楚，本实验对130只妊娠4－5d的小鼠LIF基因表达和血清中孕激素水平分别进行了检测，发现12只小鼠（占总数的9．23％）无LIF基因表达，无该基因表达小鼠血清中孕激素水平显著低于其它表达的小鼠。实验结果表明：孕激素可能是LIF基因表达的复杂的调控体系中的一个重要的调控因素。     

TIMP-4 mRNA在小鼠子宫中的表达和激素调节

为研究TIMP-4 mRNA在子宫中的变化规律,采用半定量RT-PCR方法,观察了TIMP-4 mRNA在出生后小鼠子宫不同发育期、动情周期、妊娠早期以及假孕早期子宫中的表达和激素调节。结果发现,TIMP-4 mRNA在出生后不同发育期的小鼠子宫中、动情周期的任何时期、妊娠第1天以及假孕第1天的子宫中都不表达,但在妊娠和假孕第2天、第3天、第4天的子宫中都表达。以上结果提示,TIMP-4 mRNA在妊娠小鼠子宫中的表达可能不依赖存活胚胎的激活,而可能受母体妊娠分泌物的上调。     

早孕小鼠子宫内膜组织中IASPP表达对胚胎着床的作用

目的:探讨早孕小鼠子宫内膜组织中P53凋亡刺激蛋白抑制因子(IASPP)的表达对胚胎着床的作用.方法:对NIH雌鼠进行阴道涂片以确定其动情周期,采用实时荧光定量PCR、Western blot以及免疫组化等分别在分子和蛋白水平上检测雌鼠子宫内膜上IASPP的表达情况;对实验组小鼠左侧子宫角注射IASPP抑制剂,最后测量...     

上皮型钙粘附蛋白在人子宫内膜和早期胚胎的表达和变化

目的 :探讨上皮型钙粘附蛋白 (E -cadherin)在人子宫内膜和早期胚胎的表达和变化。方法 :采用免疫组织化学、间接免疫荧光和激光共聚焦显微镜等方法 ,检测人子宫内膜和人早期胚胎E -cadherin的表达。结果 :月经周期各阶段子宫内膜腺上皮均见E -cadherin表达 ,分泌中期达高峰 (P <0 .0 5 ) ,间质细胞未见表达。卵母细胞和早期胚胎表面均见E -cad herin表达 ,囊胚组的表达显著高于 2 - 7细胞期胚胎组 (P <0 .0 5 )。结论 :E -cadherin在子宫内膜及胚胎的表达增多变化有同步性 ,可能有利于着床。     

基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立

目的 构建基于Cre- LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究。方法 首先构建hRas打靶载体,电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负法筛选阳性ES细胞,通过PCR、 Southern鉴定后,将正确重组hRas基因的ES细胞导入C57BL/6 J小鼠囊胚,移入同步发育的受体鼠子宫,妊娠足月出生的嵌合体小鼠与C57BL/6 J小鼠交配获得杂合子hRasfl/+小鼠。再将杂合子hRasfl/+小鼠间交配获得纯合子小鼠hRasfl/fi,然后与全身组织细胞表达Cre重组酶的Tg (EIIa-cre)小鼠进行交配,获得全身细胞表达hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,并通过荧光定量PCR方法检测不同日龄胚胎期仔鼠的hRas基因表达水平。结果 成功构建了基于Cre- LoxP系统的人源hRas基因条件性定点敲入小鼠模型的载体,筛选得到的一个正确克隆,电转ES细胞后进行Southern blot鉴定,经过初筛和复筛,共获得12个阳性克隆,挑选A11号克隆ES细胞进行囊胚注射,移植了48枚胚胎,出生9只小鼠,其中6只为嵌合鼠,将嵌合率>50%的雄鼠与野生型C57BL /6 J雌鼠进行交配,出生21只后代,其中鉴定有4只hRasfl/+小鼠;hRasfl/+小鼠间交配出生29只小鼠,其中有14只纯合子hRasfl/fi小鼠;hRasfl/fl小鼠与Tg (EIIa-cre)工具鼠交配6次,未有仔鼠出生;跟踪不同发育时期胚胎中hRas基因的表达发现,E10.5～15.5 d胚胎中检测到hRas基因表达。结论 成功建立运用Cre- LoxP系统建立了带有hRas基因敲入的纯合子小鼠hRasfl/fl,未能得到全身细胞高效表达人源hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,但为进一步利用hRasfl/fl小鼠模型建立其他组织特异性的条件性基因敲入小鼠模型做好技术储备。     

Blastocyst implantation depends on maternal expression of leukaemia inhibitory factor.

A critical point during mammalian pregnancy is the implantation of the blastocyst when the embryo attaches to the wall of the uterus. The autonomously developing preimplantation embryo then becomes dependent on the maternal environment for its continued development. Little is known about the regulation of implantation, except that a complex interaction between peptide and steroid hormones synchronizes the preparation of the uterus for implantation with the development of the embryo. Whether the implantation event is under maternal or embryonic control is also unclear (reviewed in refs 1, 2). We have previously shown that a cytokine, leukaemia inhibitory factor (LIF), is expressed in the uterine endometrial glands specifically on the fourth day of pregnancy. This burst of expression is under maternal control and always precedes implantation of the blastocyst. Here we report that transient expression of LIF in mice is essential for implantation. Females lacking a functional LIF gene are fertile, but their blastocysts fail to implant and do not develop. The blastocysts, however, are viable and, when transferred to wild-type pseudopregnant recipients, they can implant and develop to term.     

Expression of LIF,VEGF, CD57 and CD68 after the transfer of rat embryos to mouse uteri

The high failure rate of interspecific preganacy is a major obstacle to the successful interspectific cloning of mammals,To in vestigate the reasons for the failure of inter-specfic pregnancy between rats and mice,we transferred rat blastocysts into mouse uteri on the third day of pseudopreg -nancy (D3),oure previous study showed that intact rat embryos could still be observed in mouse uteri on D9.In the present study ,we found that expression of CD57 and CD68 increased significantly at the maternal -fetal interface fol-lowing the transfer of rat embryos,Similarly ,Leukaemia inhibitory factor(LIF) expression increased ,but vascular endothelial growth factor(VEGF) expession decreased,In a co-culture system ,the percentage of rat ectoplacental cones (EPCs) with adhesion and outgrowth and outgrowth area on mouse uterine decidual cells were less than that of mouse EPCs,These results indicate that an increase in the immunological rejection response and a decrease in the in vasiveness of rat embryos may be important reasons for the failure of interspecific pregnancy between rat and mouse.     

小鼠胎肺Ⅲ型上皮细胞的分离纯化及原代培养

用免疫黏附和差速离心法分离和纯化小鼠胎肺Ⅱ型细胞,所得细胞纯度达(90±2)%,产量为每5只小鼠胎肺收获(23.6±7)×106个细胞.原代培养的小鼠胎肺Ⅱ型细胞在12～24 h 开始贴壁,在36～48 h呈指数生长,72 h后生长减缓,4～5 d左右细胞开始变形分化.免疫荧光鉴定胎肺Ⅱ型细胞表面活性蛋白C(SP-C)染色阳性,透射电镜观察到细胞内板层小体,细胞中proSP-C蛋白在培养48 h后表达较高.体外病毒转染成功,可见强烈荧光表达.成功建立了小鼠胎肺Ⅱ型上皮细胞的培养模型.     

1～4岁脑瘫患儿血清GH,IGF-1水平与身心发育的相关性分析

目的探讨1~4岁脑瘫患儿血清生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平与身心发育的相关性.方法选取1~4岁脑瘫患儿142例,按体格发育情况分为脑瘫伴发育迟缓组(Cp-R)100例、脑瘫发育正常组(Cp-N)42例;按粗大运动功能分类系统分为运动功能轻度障碍Ⅰ~Ⅱ级组(Cp-GⅠ~Ⅱ)40例、中重度障碍Ⅲ~Ⅴ级组(Cp-GⅢ~Ⅴ)102例;根据美国婴幼儿发展评估量表-Ⅲ中的智力发育评估指数分为脑瘫伴智力低下组112例、脑瘫不伴智力低下组30例,选取同期健康体检的同年龄段儿童30例为对照组.检测各组儿童GH、IGF-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-3水平.结果 Cp-R组GH峰值和IGF-1均明显低于Cp-N组,差异具有统计学意义(P0.05);Cp-N组和Cp-R组GH峰值、IGF-1均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).GH基础值和胰岛素样生长因子结合蛋白-3在各组间差异无统计学意义(P0.05).Cp-GⅢ~Ⅴ组GH峰值、IGF-1值均明显低于Cp-GⅠ~Ⅱ组,差异具有统计学意义(P0.05);Cp-GⅢ~Ⅴ组和Cp-GⅢ~Ⅴ组GH峰值、IGF-1值均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).脑瘫伴智力低下组IGF-1值明显低于脑瘫不伴智力低下组和对照组,差异具有统计学意义(P0.05);脑瘫伴智力低下组和脑瘫不伴智力低下组GH峰值明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).结论 GH,IGF-1水平低下会导致脑瘫患儿运动伴认知功能发育迟缓,GH/IGF-1轴受损是其可能机制.     

发酵棉粕对黄羽肉鸡生产性能和屠宰性能的影响

为了研究添加不同比例发酵棉粕对黄羽肉鸡生产性能及其屠宰性能的影响,选用14日龄健康黄羽肉鸡320只,随机分成4组,每组4个重复,每个重复20只鸡,Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别添加3%、6%和9%发酵棉粕,研究不同添加量对肉仔鸡生长前期(14-28日龄)、中期(29-45日龄)、后期(46-65日龄)各阶段生产性能和屠宰性能的影响。结果表明:①较Ⅰ组而言,肉仔鸡生长前期平均日增重Ⅱ组提高2.50%(P>0.05),Ⅲ组极显著提高7.22%(P<0.01),Ⅳ组则极显著下降15.03%(P<0.01);生长前期采食量Ⅱ、Ⅲ组显著提高1.47%和1.73%,Ⅳ组则极显著下降7.66%(P<0.01);前期料重比Ⅱ组下降0.97%(P>0.05),Ⅲ组极显著下降5.34%(P<0.01),Ⅳ组则极显著提高8.74%(P<0.01);肉仔鸡生长中、后期以及全期平均日增重、采食量、料重比Ⅱ、Ⅲ组有所提高,Ⅳ组则下降,但均差异不显著(P>0.05)。②较Ⅰ组而言,半净膛率Ⅱ、Ⅲ组极显著提高2.73%、3.60%(P<0.01);胸肌率Ⅱ、Ⅲ组极显著提高14.83%、16.68%(P<0.01);腿肌率Ⅲ组提高最为明显,为14.17%(P<0.01);屠宰率、全净膛率各试验组均差异不显著(P>0.05)。由此可见添加6%发酵棉粕组在日增重、采食量、料重比、屠宰率、胸肌率和腿肌率都优于3%、9%发酵棉粕组,以添加6%发酵棉粕为宜。