采用正交设计和响应曲面设计法优化芦苇随机扩增多态DNA体系

采用正交设计和响应曲面设计(RSD)优化适合于芦苇[Phragmites australis (Cav.)Trin.ex steud]增多态DNA(RAPD)的反应体系,结果确定芦苇RAPD反应体系的最佳方案为：在PCR扩增程序,冷启动,94℃变性1min,36℃复性90s,72℃延伸2min,40个循环;72℃延伸7min,4℃保存;25μl反应体系包括模板DNA 60ng、三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)7．5mmol、Taq酶1．5u、引物5pmol。     

佛手RAPD扩增系统的建立

试验了模板DNA、引物、镁离子和Taq酶的浓度对佛手RAPD分析结果的影响,从而建立了适合佛手RAPD扩增的系统.具体条件为:25μL反应体系中模板DNA 100 ng(4 ng/μL),MgCl2 3.0～5.0 mmol/L,dNTP 200μmol/L,10-mer Primet 0.2 μmol/L及1 U Taq Polyrnerase.扩增程序为:93℃120 s;之后,93℃60 s,35℃60 s,72℃120 s,进行42个扩增循环;最后72℃延伸600s.     

高粱胞质雄性不育及保持系的RAPD技术优化

以高梁细胞质雄性不育系和保持系A1T623A/B,A2V2A/B为材料，考察了Mg^2 ，Taq酶，dNTP，引物，模板等的用量、循环参数及不同的PCR仪对随机扩增多态性DNA（RAPD）反应的影响。结果发现：在25μL体系中，MgCl22．0mmol/L，Taq酶0．75U（1U＝1μmol/min），dNTP0．15mmol／L，引物16．5ng，模板30ng，明0．001％，KCl50mmol。L，Tris10mmol/L（pH8．3）为最佳反应混合物组合。对PeltierThermalCycler200而言，94℃预变性5min，94℃预变性5in，94℃变性1min，35℃退火1min，72℃延伸2min，最后72℃保温5min，共计40个循环为最佳扩增条件；对PerkinElmerCetusDNAtThermalCycler-480而言,采用94℃预变性3min后，前3个循环，94℃变性1min，35℃退火1min，72℃延伸2min，后37个循环，94℃变性30s，36℃退火45s，72℃延伸45s，72℃延伸1min，最后72℃保温5min的循环程序可获得理想扩增。并阐述了优化RAPD实验体系的设计原则。     

干用辣椒RAPD—PCR反应体系正交优化的研究

以干用辣椒幼苗为材料,研究了干用辣椒RAPD分析过程中的Taq酶、Mg^2＋,dNTPs、引物、模板DNA浓度、退火温度等影响因素,建立适合干用辣椒RAPD反应的PCR体系,即25μL反应体系中含有解体Taq酶1．5U、Mg^2＋2．5mmol／L,dNTPs0．6mmol／L、引物0．8μmol／L、模板DNA60ng．扩增程序为：94℃预变性4min;94℃变性1min,37℃退火1min,72％延伸1．5min,40个循环;最后72℃副延伸5min．     

罗汉果ISSR-PCR反应体系的建立

以罗汉果 ( Siraitia grosvenorii) DNA为材料 ,分析了模板 DNA,Mg2 + ,d NTPs,引物的浓度 ,Taq DNA聚合酶的用量以及循环次数对 ISSR-PCR扩增结果的影响 ,确立了稳定的、可重复的罗汉果 ISSR最佳反应体系和 PCR扩增参数 :在 2 5μL的 PCR反应体系中 ,含 2 0～ 5 0 ng模板 DNA,1 U Taq酶 ,1× PCR缓冲液 ,2 .0 mmol/L Mg Cl2 ,4种 d NTPs各 2 0 0 μmol/L,0 .5 μmol/L引物 ;PCR扩增程序为 94°C预变性 3 min,接着进行 40个循环 :94°C变性 1 min,5 2°C退火 5 0 s,72°C延伸 2 min,循环结束后 72°C延伸 7min.     

水稻基因组DNA的RAPD扩增研究

通过对水稻RAPD反应条件比较研究,建立了对除草剂敏感致死水稻RAPD的最适反应体系和反应扩增程序,即在25μl反应体系中,含10 mM Tris-HCl(pH8.0),10 mM KCl,8 mM(NH4)2SO4,0.05%NP-40,2.0 mM MgCl2,0.1 mM(each)dTNPs,20 ng引物,20ng基因组DNA,1.5 U的Taq酶.反应扩增程序为:94℃变性2 min;扩增40个循环,每循环包括:94℃变性10 s,40℃退火30 s,72℃延伸1.5 min;最终延伸5 min.     

乌头基因组DNA提取与RAPD反应体系优化

采用改进方法提取乌头基因组DNA,建立乌头RAPD分析的PCR反应体系,成功地进行了RAPD扩增,筛选出乌头RAPD的最佳方案为:25μl反应体系中包括dNTPs 0.06 mmol·L-1,引物0.2μmol.μL-1,模板DNA40 ng,Taq酶1U,Mg2+ 4 mmol·L-1,10×buffer缓冲液2.5μl,其余部分为无菌超纯水。PCR扩增循环为95℃3 min,38 ℃1 min,72 ℃2min 1次循环;94 ℃=1 min,38℃1 min,72 ℃2 min,45次循环,最后72℃延伸10 min。     

欧洲甜樱桃RAPD反应体系的建立与优化

以欧洲甜樱桃萨米托品种为研究对象,利用改进的CTAB法提取基因组DNA,并通过单因素多水平梯度试验,筛选了模板、Mg2＋、TaqE、dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立了欧洲甜樱桃RAPD技术扩增体系．研究结果表明,在25出反应体系中,各组分最佳的浓度分别为：10×Buffer2．5μl,2．5mmol·L^-1Mg2＋2．5μl,Taq E0．06U·μl^-1,0．2mmol·L^-1dNTPs,0．2μmol·L^-1Primer,模板DNAl．2ng·μl^-1．PCR循环程序为：94℃预变性4min。94℃变性40s,36℃退火45s,72℃延伸1min,共36个循环,最后72℃延伸7min．     

新疆杏品种自交不亲和S-RNase基因PCR扩增体系的优化

以3个新疆杏品种的叶片为试材,以其叶片基因组DNA为模板,分别对PCR扩增体系中的10×Buffer(含Mg2+)、dNTP、上下游引物、TaqDNA聚合酶和退火温度5个因素设计6个梯度,研究了新疆杏品种自交不亲和S-RNase基因PCR扩增条件,建立其优化的PCR扩增体系。研究结果表明:其扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性45s,52℃退火45s,72℃延伸2min,35个循环后72℃延伸10min,25μL反应体系10×Buffer(含Mg2+)2.5μL,dNTP0.08mmol/L,上下引物0.16μmol/L,DNA80ng,DNA聚合酶1μL,此为最优的反应体系。     

水稻基因组DNA的RAPD扩增研究

通过对水稻RAPD反应条件比较研究，建立了对除草剂敏感致死水稻RAPD的最适反应体系和反应扩增程序，即在25止反应体系中，含10mmol／LTris-HCl(pH8．0)，10mmol／LKCI，8mmol／L(NH4)2804，0．05％NP-40，2．0mmol／LMgCl2，0．1mmol／L(each)dTNPs，20ng引物，20ng基因组DNA，1．5U的Taq酶。反应扩增程序为：94℃变性2min；扩增40个循环，每循环包括：94℃变性10s，40℃退火30s，72℃延伸1．5min；最终延伸5min。     

蓝萼香茶菜提取液抑菌作用研究

分别以无水乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、蒸馏水和丙酮作为提取剂,用回流提取的方式提取蓝萼香茶菜[Isodon japonica(Burm.f.)Hara var.glaucocalyx(Maxim.)Hara]的5种提取液,分别采用滤纸片法和平板稀释法测定提取液对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、米曲菌的抑菌效力及最低抑菌浓度(MIC)。结果显示,5种提取液对实验菌均有抑菌作用,对4种致病菌的MIC的排列顺序为:无水乙醇提取液<三氯甲烷提取液<丙酮提取液<乙酸乙酯提取液<蒸馏水提取液。     

风车草的化学成分

以体积分数为85%的乙醇回流提取风车草（Clinopodium chinensis O.Kuntze var.grandiflorum (Maxim.) Hara.）茎叶, 得提取物, 再经大
孔吸附树脂吸附、 硅胶和ODS柱色谱法分离各化学成分, 并经理化性质和波谱数据分析鉴定它们的化学结构. 共分离得到10个化合物, 分别鉴定为醉鱼草苷Ⅳb(1),  醉鱼草苷Ⅳ(2), 风轮菜皂苷(Ⅺ)(3), 香峰草苷(4), 3β,16β,23,28-四羟基齐墩果烷-11,13(18)-二烯-3-［β-D-吡喃葡萄糖-(1→2)］ ［β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)］基-β-D-吡喃夫糖苷(5), 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-(1→6)-O-β-D-葡萄糖苷(6), 风轮菜皂苷Ⅴ(7), 风轮菜皂苷Ⅲ(8), 风轮菜皂苷Ⅴb(9), 风轮菜皂苷Ⅲb(10). 除化合物1,2,4,5外, 其余化合物均为首次从该植物中分离得到.     

总序香茶菜和蓝萼香茶菜挥发油成分研究

利用气相色谱-质谱联用技术对总序香茶菜(RabdosiaRacemosa(Hemsl)Hara)和蓝萼香茶菜(Rabdosiajaponica(Burm f)Haravar.galaucocalyx(Maxin)Hara)挥发油化学成分进行了研究,分别鉴定出46种和40种组分,所鉴定化合物的相对含量分别占其全油的84 77%和73 5%.用气相色谱面积归一化法测定了各成分的相对百分含量,其主要成分为酯类、烷类等.     

磺胺对苦草(Vallisneria natans(Lour.)Hara)生理生长及细胞超微结构的影响

以沉水植物苦草为试验材料,通过实验室水培试验,经过不同浓度磺胺(0.01,0.02,0.05,0.08,0.1mg·L~(-1))处理,研究不同浓度磺胺污染对苦草(Vallisneria natans)叶片生理生长及丙二醛(MDA)、可溶性糖(SS)、叶绿素含量、叶绿素a和b含量比值(c_a/c_b)等的影响.结果显示:(1)随着外源磺胺浓度增加,苦草相对生长率降低,叶片叶绿素a和叶绿素b含量呈降低趋势,叶绿素a含量下降速度大于叶绿素b;c_a/c_b先增大后减小.(2)磺胺胁迫下叶片的丙二醛含量与对照组相比变化显著,MDA和SS含量呈先上升后下降的趋势,总体呈上升趋势.(3)透射电镜观察发现,磺胺胁迫使苦草叶细胞中叶绿体被膜破裂至消失,类囊体膨胀、破损;叶细胞中类囊体呈现出分布不均、出现空腔等.当磺胺浓度为0.01m·L~(-1)时,苦草叶片外观形态结构未表现出受害症状,而叶绿体亚显微结构显示,类囊体开始出现轻微的分布不均现象;当营养液中磺胺浓度为0.02mg·L~(-1)时,叶片出现褐色斑点,叶片边缘呈现枯黄至坏死症状,叶绿体超微结构显示类囊体膨胀、变形至空洞现象,线粒体和叶绿体的距离减小至消失.研究结果表明,磺胺胁迫导致苦草叶生理代谢失衡,叶绿素含量下降,叶片亚细胞结构出现不可逆损伤,期望该结果为研究磺胺污染的作用机制及苦草在抗生素污染修复中的应用提供一定的参考.     

双曲孢菌(Nakataea sigmoidea Hara)生物学特性初步研究

为了研究双曲孢菌(Nakataea sigmoidea Hara)在不同环境及营养条件下的产孢特性，分别在黑暗条件和光照条件下，通过改变环境因子(pH值、温度、固体培养、液体培养)和营养因子(碳源、氮源、天然、合成)来进行产孢培养试验。结果表明，双曲孢菌在黑暗条件下，不同环境因子和不同营养因子下均不能产生分生孢子；在自然光条件下，1．5％水琼脂、Czapek培养基上，菌核和菌丝均能产孢。碳氮比对菌核萌发产生分生孢子有显著影响(P＜0．01)，以碳氮比为10：1时，产孢牢最高，达54．23％。紫外灯照射10min可刺激双曲孢菌产孢。     

兰香草的显微鉴定

目的对马鞭草科莸属植物兰香草的显微特征进行研究。方法采用石蜡切片、表皮制片、解离组织片对药材的茎、叶横切面组织结构进行研究,粉末制片对全草粉末进行显微鉴定。结果茎横切面可见表皮被有多数非腺毛及腺毛,木质部及髓部宽广。叶横切面中主脉维管束1~3个,上表皮下厚角组织不明显,韧皮部细胞较小排列紧密。粉末中可见叶上下表皮细胞垂周壁弯曲,气孔不定式,同时可见黏液细胞、非腺毛、腺毛、导管等。结论上述显微特征可作为兰香草的显微鉴定依据。     

中平树根部脂溶性成分的GC-MS分析

【目的】研究中平树根部的脂溶性化学成分,为其药用资源的进一步开发利用提供科学依据。【方法】采用硅胶柱层析法对脂溶性成分进行分离,甲酯化后再通过气相色谱-质谱-计算机联用技术对其进行分析和鉴定。【结果】分离出30个组分,确认了其中的21个成分。【结论】分离得到的脂溶性成分主要为脂肪酸类化合物,所有成分均为首次在该植物中分离鉴定出。     

杉寄生的脂溶性成分分析

为了研究杉寄生的化学成分,采用硅胶柱层析、甲酯化和气相色谱-质谱-计算机联用技术对其脂溶性成分进行分析和鉴定,结果分离出27个组分,确认了其中的25个成分。这些成分主要为萜类化合物,均为国内首次在该植物中鉴定出。     

银边红雀珊瑚(Pedilanthus tithymaloides(L) Poir.var.cuculatus Hort.)快速繁殖研究

顶芽或腋芽在添加６－苄基氨基嘌呤（６－ＢＡ）３ｐｐｍ和萘乙酸（ＮＡＡ）０．５ｐｐｍ的ＭＳ培养基培养３０ｄ，长４－６ｃｍ，腋芽３－７个。此时，将它们分切成单芽切段，围到添加６－ＢＡ２ｐｐｍ的ＭＳ培养基，继代培养周期２１ｄ，繁殖系数５－８。芽长２－３ｃｍ时用添加吲哚丁酸（ＩＢＡ）１ｐｐｍ的ＭＳ培养基进行生根培养，培养２１ｄ，生根率８７％，移载成活率９３％。     

蕨游动精子光镜和扫描电镜的观察

在光镜和扫描电镜下观察，蕨（Ｐｔｅｒｉｄｉｕｍ ａｑｕｉｌｉｎｕｍ （Ｌ）ｖａｒ，ｌａｔｉｕｓｃｕｌｕｍ（Ｄｅｓｖ．）Ｕｎｄｅｒｗ．）的游动精子为长带状，呈螺旋状弯曲。刚从精子器释放出来的每个游动精子的外面均有一极薄的透明膜包裹，游动精子的鞭毛有４０￣５０余条，仅生于游动精子细胞前段约３／５的长度上，精子后部无鞭毛，而所有的鞭毛均生于游动精子螺旋的外侧面，内侧面均不产生鞭毛，扫描电镜下观察，鞭毛表