大理吸毒人群HBV感染的调查及基因型研究

目的：调查大理吸毒人群乙型肝炎病毒（HBV）的基因型和亚型。方法：采集大理市某戒毒所吸毒人群血清共192份，采用酶联吸附免疫法（ELISA）测定HBV血清标志物（HBVM），再采用基因型特异性引物PCR和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法测定HBV感染血清基因型和亚型。结果：192份血清中，HBsAg阳性率8．85％（17／192）。17份HBsAg阳性标本中基因型分别为：B型3例，均为Ba型；C型1例，为Cs型；B＋C混合型3例（Ba＋Cs）；未扩增10例。结论：大理吸毒人群HBV感染率较高；HBV感染的基因型为B型、C型和B＋C型，基因亚型为Ba和Cs。     

呼伦贝尔市啮齿动物携带汉坦病毒的基因分型研究

为了研究内蒙古自治区呼伦贝尔市啮齿动物中汉坦病毒(HV)的型别及携带病毒情况,采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原,用RT-PCR法扩增阳性标本中HV的S(620~999nt)片段,使用clustalX(1.83)以及Phylip3.63构建系统发生树进行分型研究。结果表明,在呼伦贝尔市HFRS疫点共捕获啮齿动物185只,在7份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中6只为黑线姬鼠,1只为大林姬鼠,病毒携带率为3.78%。扩增到其中6份HV抗原阳性样品中S片段(620~999nt),分析获得的序列表明与现有的HTNV有最高的同源性,均为HTNV。其中NAa90、NAa118、NAa121和NAp137这4株病毒与分离自黑龙江黑线姬鼠的Bao14株分在同一分支,与病毒的亲缘关系最近,而NAa78、NAa100这2株病毒构成另一分支,与A9株的同源性为94.5%~95.5%,用部分M(2001~2301nt)片断的核苷酸序列构建的系统进化树与S片段的结果一致。结论:呼伦贝尔市的黑线姬鼠与大林姬鼠携带不同亚型的HT-NV,表现出HTNV在同一地区的遗传多样性。     

人乳头瘤病毒基因分型检测在宫颈癌早期筛查中的应用

目的探讨女性生殖道感染人乳头瘤病毒（HPV）基因检测与颈癌前病变的关系。方法采用HPV分型基因检测系统对妇科门诊就诊的妇女进行宫颈细胞HPV DNA检测（同时检测5种低危型和18种高危型HPV亚型）。结果827例标本中共检出HPV阳性210例（25．4％）,共检出20种HPV亚型,其中单纯低危型HPV亚型感染45例（5．4％）,单纯高危型HPV亚型感染142例（17．2％）,高危、低危亚型共同感染13例（1．6％）;检出感染单一HPV亚型187例（22．6％）,感染两种亚型以上23例（2．8％）。低危型主要为HPV11,其次为HPV43、6;高危型主要为HPV16、其次为58、31、33、18等亚型。结论女性生殖道HPV感染者较易发生颈癌前病变,提示早期发现及防治HPV感染对预防子宫颈癌的发生具有重要意义。     

黑线仓鼠MHCⅡ类DQA基因外显子2的克隆与序列分析

为了探明黑线仓鼠MHC的结构与功能并寻找分子标记,对MHCⅡ类DQA基因的外显子2进行克隆和序列分析．提取黑线仓鼠3个群体（吴村、沂南和临朐）的基因组DNA构建基因池,利用PCR技术扩增得到249bp的片段,将该目的片段连接到pMD18-T载体中,重组质粒转入大肠杆菌DH5α后利用蓝白斑法筛选阳性克隆,测序后得到该目的片段的核苷酸序列（Genbank登录号：FJ209306）并推导出氨基酸序列．结果表明：黑线仓鼠、人类、大鼠、小鼠、猪、马、牛、兔之间DQA基因外显子2的核苷酸序列同源性为68．7％-85％,氨基酸序列同源性为56．8％-83．5％,黑线仓鼠与大鼠、小鼠亲缘关系更近．测序得到的OQA基因外显子2的序列在物种间具有丰富的多态性,可以作为物种遗传分析的分子标记．     

莴苣黄化病植原体的分子鉴定

为了明确新疆莴苣黄花病植原体的分类地位,采用巢式PCR和PCR技术对表现黄化症状的莴苣植株分别利用植原体16S rRNA基因和tuf基因通用引物P1／P7、R16F2n／R16R2和fTufu／rTufu进行扩增,得到大小约1．2kb和0．8kb的特异性片段,对所得片段克隆、测序和序列分析。结果表明：它们分别和榆树黄化组（Elm yellows group）成员的16S rRNA基因、tuf基因同源性最高,分别高于98．6％和92．4％。基于16S rRNA基因和tuf基因的系统进化树分析显示,其均与植原体16Sr V组成员位于同一分支上。对16S rRNA基因的iPhyClassifier分析结果表明,其与榆树黄化组B亚组（16Sr V—B）代表株系JWB（AY197661）具有相同的酶切图谱。所有结果表明莴苣黄化病植原体（LSY）属于榆树黄化组B亚组（16Sr V-B）。     

汉滩病毒M,S基因不同拼接方式原核表达效果比较研究

为了比较汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白(NP)主要抗原位点片段不同拼接方式的原核表达效果，将汉滩病毒76—118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5’端约O．7kb的片段连接，克隆入pGEX一4T2，构建嵌合基因原核表达栽体pGEX-4T2-G1S0．7，pGEX-4T2-S0．7G1，在大肠杆菌XLl一Blue中诱导表达GST—G1S0．7或GST—S0．7G1融合蛋白。经IPTG诱导后，ELISA活性测定结果表明，两种融合蛋白均可与抗汉坦病毒NP的mAb特异性结合，融合蛋白GST—G1S0．7还可与抗汉滩病毒糖蛋白的mAb特异性结合。Western blot结果显示，诱导出G1S0．7或S0．7G1与GST的融合蛋白，其中G1S0．7嵌合基因的表达产物降解较少。研究证明：两种拼接方式的嵌合基因均可在大肠杆菌中表达出有生物学活性的融合蛋白，但表达效果不同，为汉滩病毒基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

云南省Seo型汉坦病毒基因差异研究

为揭示云南省啮齿类动物携带的汉坦病毒的基因型及亚型，从来自云南的7个免疫荧光检测阳性的鼠肺标本中提取出病毒RNA，通过逆转录和巢式PCR获得了M片段G2区．序列分析表明，云南省内啮齿类动物携带病毒多为SEO型，且SEO型病毒间较为保守，相似性为93．7％～99．7％，且多在97％以上，系统发生树分析表明，云南省内SEO型病毒在构建的种系发生树上处于两个分支，分属于S1及S3亚型．     

中国明对虾与5种虾类线粒体16S rRNA和COI基因片段的序列比较及其系统学初步研究

采用PCR扩增和序列测定等技术,对中国明对虾（Fennerpenaeus chinem如）线粒体DNA16S rRNA和细胞色素氧化酶I（COI）基因片段进行了初步研究,分别得到16S rRNA和COI 2个基因片段的碱基序列,其中16S rRNA基因片段的大小为515bp,碱基A＋T,G＋C的组成分别为66．47％和33．53％;COI基因片段的大小为472bp,碱基A＋T,G＋C的组成分别为62．50％和37．29％．在2种基因片段中,AT的组成明显高于GC的组成,这与果蝇、虾类、蟹类等无脊椎动物的16S rRNA和COI基因片段的研究结果相似．通过对中国明对虾16S rRNA和COI 2个基因片段遗传特征的研究,16S rRNA只有8处核苷酸的碱基在4个群体间表现出差异,COI基因片段中共检测出24个多态性核苷酸位点,其种内变异较低。另外,将本研究所得序列与GenBank中对虾科5个种的16S rRNA基因片段序列进行比较后,发现其聚类关系与传统分类相一致．     

烧伤病人细菌学调查

目的：为了及时动态掌握烧伤病人感染菌生态学及药敏情况。方法：收集我科1994年～1997年烧伤创面分泌物，各种导管插管，血液标本226份进行细菌学调查。结果：细菌培养阳性138份（58．8％），其中创面分泌物送检160份，阳性120份（75％），导管插管标本40份，阳性10份（25％），血液标本26份，阳性8份（30．8％）；共检出细菌14种153株，耐甲氧西林金葡菌高居第一位，占23．5％，绿脓杆菌次之，占17．6％。药敏结果提示：耐甲氧西林金葡菌对去甲万古霉素最敏感（100％），其次为环丙沙星（87．7％），其它均耐药；革兰氏阴性杆菌对舒普深、复达欣耐药率最低。结论：耐甲氧西林金葡菌已取代绿脓杆菌上升为第一位优势菌，且只对去甲万古霉素，环丙沙星敏感。     

PCR扩增检测献血者中TT病毒DNA及部分TTV基因序列分析

目的：了解江苏地区献血者中新型肝炎相关病毒－－TT病毒的感染状况，探讨TTV感染与ALT异常的相关性，方法：设计通用引物，采用半套式聚合酶链反应（hemi-nested PCR)方法检测195份献血者血清标本，结果，在血清丙氨酸转氨酶（ALT）异常，HBsAg及抗HCV阴性的99份献血者血清标本中，检出TTV DNA阳性标本36份，TTV DNA的阳性检出率为36．3％，而在96份正常献血者血清标本中，检出TTV DNA阳性标本16份，TTV DNA阳性检出率为16．6％，明显低于ALT常献血者人群，对2株阳性株序列分析结果显示，一株与TX011（G1b日本代表株）的同源性为98．6％，属于G1b亚型，另一株虽可归属于G1，但与G1a ，Blb差异较大，可能为G1的新亚型，结论：江苏地区献血者人群中存在TTV感染，国内首次报告检出TTV G1b亚型及新的亚型，献血者ALT异常与TTV感染密切相关，输血可能成为传播TTV感染的途径之一。