PC12细胞诱导的神经缺血细胞Smad7-siRNA及沉默效果的检测

目的探讨诱导PC12细胞分化的神经细胞靶向沉默Smad7基因特性,同时进行沉默效果检测.方法以Smad7基因为靶目标,设计合成3条siRNA序列,进行细胞转染,利用Real time-PCR和Western blot技术检测沉默效果,筛选出最有效的干扰序列,同时检测出最佳的转染浓度和转染时间.结果针对Smad7基因设计合成及筛选出靶向沉默Smad7基因的干扰序列(siRNA1);siRNA1的最佳转染浓度是4μg/mL;siRNA1的最佳转染时间是24 h;siRNA1对Smad7的抑制效果优于其他干扰序列.结论 siRNA1能有效沉默Smad7基因;lipofectamineTM2000可成功将siRNA1转染至神经细胞,转染效率较高;利用siRNA技术能有效抑制神经细胞.     

TGF-β/Smad7信号通路在狼疮肾炎患者肾损害中的作用研究

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种全身性自身免疫病,以多系统、多脏器损害为特征,肾脏损伤是SLE的重要脏器受损之一,影响预后,是风湿病领域的研究热点。本课题将以狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)为研究对象以期发现TGF-β/Smad信号通路在狼疮肾炎发病中的作用及Smad7对该通路的影响。各入组60例LN为实验组及原发性肾小球肾炎患者作为健康对照,(1)探讨LN病人TGF-β、Smad基因的表达。(2)通过MTT、ELISA、PT-PCR、免疫组化方法对狼疮肾炎、原发性肾小球肾炎患者血清、尿液、肾组织中TGF-β、Smad、Smad7的表达差异,以期发现TGF-β/Smad信号通路在狼疮肾炎发病中的作用及Smad7对该通路的影响。ELISA法检测两组患者血清、尿液中TGF-β的含量,观察组较对照组含量高,P0.05,有统计学意义。RT-PCR半定量分析发现TGF-β、Smad7 mRNA表达观察组与对照组比较差异有显著性(P0.05),患者肾组织TGF-β、Smad7蛋白主要表达在皮质肾小管上皮细胞内。TGF-β、Smad7蛋白表达观察组较对照组均明显增强(P0.05)。狼疮肾炎患者血清、肾组织中TGF-β、Smad、Smad7的表达较原发性肾小球肾炎血清、肾组织中高,且统计学有差异(P0.05),进一步验证了狼疮肾损害患者的炎症损伤机制,且炎症发挥作用的途径为TGF-β/Smad7信号通路。     

Expression of Smad2 and Smad4 in rhesus monkey endometrium during the menstrual cycle and early pregnancy

Expression of Smad2 and Smad4 mRNAs in the endometrium of rhesus monkey on Days 8, 20 and 28 of the normal menstrual cycle and on Days 12, 18 and 26 of early pregnancy was detected using in situ hybridization. The results showed that Smad2 and Smad4 mRNAs were mainly localized in luminal epithelium and glandular epithelium. The expression of Smad2 mRNA in glandular epithelium was sustained at moderate level on Days 8, 20 and 28 of the menstrual cycle, while the expression of Smad4 gradually increased with the menstrual cycle. Both Smad2 and Smad4 mRNAs in functionalis glandular epithelium were expressed at the highest levels on Day 12 of early pregnancy, while in basalis glandular epithelium the most abundant expression of both Smads occurred on Days 12 and 18 of pregnancy. On Day 26, both Smads mRNAs were expressed at the lowest levels either in functionalis or in basalis. The data suggest that the epithelium is the major compartment where TGF-βs/activins exert their biological effects via Smads, and that Smad4 may play a role in the maintenance of endometrial gland function during secreting period of the menstrual cycle. During lacunar stage of early pregnancy, Smad2 and Smad4 are implicated in the tissue remodeling of endometrial functionalis and basalis, and during early villous stage both Smads are functional primarily in basalis.     

Smad3基因剔除小鼠的基因型鉴定与繁殖性能研究

以前的研究显示Smad3基因剔除 (Smad3ex8 ex8)导致小鼠发生渐进性的白细胞增多症、牙周炎、胃炎、肠炎以及粘膜表面附近脓肿形成的慢性感染。对有症状的Smad3ex8 ex8小鼠淋巴结的组织学及免疫表型分析显示T细胞有增强的增殖能力及活化的表型。进一步的研究表明Smad3ex8 ex8小鼠胸腺细胞及外周T细胞彻底失去了对TGF β的应答。此外 ,Smad3ex8 ex8突变纯合子小鼠还表现出典型的骨关节炎、骨质疏松和创伤愈合速度加快表型。因此 ,Smad3ex8 ex8突变纯合子小鼠有可能作为研究粘膜免疫缺陷和骨性关节炎等疾病发生的分子机制的模型动物 ,为了…     

MKP2和MKP3抑制TGF-beta /Smad转录活性

为了研究MKP2和MKP3是否影响TGF-beta/Smad信号通路的转录活性。在真核细胞转染Flag-MKP2和Flag-MKP3质粒,Western blot结果显示Flag-MKP2和Flag-MKP3质粒能正确表达。在HepG2细胞系、HACAT细胞系和293T细胞系中,通过双荧光报告系统测定过表达MKP2和MKP3对TGF-beta/Smad转录活性的影响。结果显示过表达MKP2和MKP3能够分别抑制TGF-beta的三种报告基因质粒的表达。MKP2和MKP3能够抑制TGF-beta/Smad的转录活性。     

转化生长因子β1及Smad2/3、4在糖尿病肾脏的动态表达及意义研究

目的观察1型糖尿病大鼠转化生长因子131（TGF-β1）及信号转导蛋白Smad2/3、Smad4蛋白在肾脏的动态表达,探讨它们在糖尿病肾病（DN）发生发展中的作用及其相互关系。方法实验动物随机分为5组,依病程长短分为①A组（2周组）,②B组（4周组）,③组（8周组）,④D组（16周组）,⑤E组（24周组）,每组分别设有正常对照组（N组）和糖尿病组（DM组）。采用尾静脉注射链脲菌素（STZ）法复制糖尿病大鼠模型;免疫组织化学方法检测肾脏TGF-131、Smad2/3、Smad4及纤连蛋白（FN）的表达;PAS染色光镜观察肾小球系膜、肾小管基底膜变化及细胞外基质沉积情况等的形态学改变;生化方法测定血糖、血肌酐及24h尿蛋白量。结果正常对照组大鼠肾脏TGF-β1极少表达,Smad2/3、Smad4有少量表达,而糖尿病大鼠三者的表达均显著高于正常对照组;随糖尿病进展,肾组织纤连蛋白表达及24h尿蛋白都增多;糖尿病16周时肾脏TGF-β1表达分别与Smad2/3、Smad4及FN、24h蛋白尿均呈正相关关系。结论STZ-1型糖尿病大鼠肾脏TGF-β1和下游信号转导蛋白Smad2/3、Smad4参与了肾病时肾脏肥大硬化的发生。     

转化生长因子β1及Smad2/3、4在糖尿病肾脏的动态表达及意义研究

目的 观察1型糖尿病大鼠转化生长因子β1(TCF-β1)及信号转导蛋白Smad2/3、Smad4蛋白在肾脏的动态表达,探讨它们在糖尿病肾病(DN)发生发展中的作用及其相互关系.方法 实验动物随机分为5组,依病程长短分为①A组(2周组),②B组(4周组),③C组(8周组),④D组(16周组),⑤E组(24周组),每组分别设有正常对照组(N组)和糖尿病组(DM组).采用尾静脉注射链脲菌素(STZ)法复制糖尿病大鼠模型;免疫组织化学方.法检测肾脏TGF-β1、Smad2/3、Smad4及纤连蛋白(FN)的表达;PAS染色光镜观察肾小球系膜、肾小管基底膜变化及细胞外基质沉积情况等的形态学改变;生化方法测定血糖、血肌酐及24h尿蛋白量.结果 正常对照组大鼠肾脏TGF-β1极少表达,Smad2/3、Smad4有少量表达.而糖尿病大鼠三者的表达均显著高于正常对照组;随糖尿病进展,肾组织纤连蛋白表达及24b尿蛋白都增多;糖尿病16周时肾脏TGF-β1表达分别与Smad2/3、Smad4及FN、24h蛋白尿均呈正相关关系.结论 STZ-1型糖尿病大鼠肾脏TGF-β1和下游信号转导蛋白Smad2/3、Smad4参与了肾病时肾脏肥大硬化的发生.     

TGF-β1与Smad4在乳腺导管癌组织中的表达及意义

目的 探讨TGF-β1和Smad4在乳腺导管癌组织中的表达，分析其与乳腺导管癌发生发展的关系及意义.方法 选取50例乳腺导管癌组织标本，应用免疫组织化学SP法检测TGF-β1和Smad4在乳腺导管癌组织中的表达水平，并评估二者的表达与各种临床病理参数间的关系、TGF-β1与Smad4的表达是否具有一致性.结果 TGF-β1和Smad4蛋白表达均与乳腺导管癌TNM分期呈负相关关系(r=-0.402,P=0.004;r=-0.331,P=0.019);而与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤组织学级别、是否淋巴结转移、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)以及人表皮生长因子受体-2(HER2)的表达无关(P>0.05).此外，Kappa分析表明，TGF-β1与Smad4的表达具有一致性(κ=0.419,P=0.003).结论 评估乳腺导管癌组织中TGF-β1和Smad4的表达可能有助于预测乳腺导管癌的进展.     

不同日龄Smad3基因剔除小鼠的脏器重量及脏器指数

实验选用不同年龄雌雄小鼠各 2 0只 ,剖检Smad3基因剔除小鼠 ,观察其大体解剖特征 ,测定其体重、脏器重量、脏器指数 ,统计比较结果。其结果是 35日龄Smad3基因剔除纯合型小鼠的体重及各脏器重量均低于其它两种表型 ,而心、肝、脾、胸腺的脏器指数高 ;70日龄Smad3基因剔除纯合型小鼠的体重、肝脏、脾脏、肾脏、卵巢、睾丸和附睾均低于其它两种基因型 ,而脏器指数是肝脏低 ,脾脏和胸腺高 ;Smad3基因剔除纯合型小鼠与野生型小鼠比较 ,具有其独特的特性 ,为该小鼠的应用提供一定的参考。     

Smad7修饰的骨髓间充质干细胞通过肝星状细胞Smads信号与MMP-1/TIMP-1平衡的抗肝纤维化机制

目的:探究Smad7修饰的骨髓间充质干细胞(Smad7-BMSCs)在体外抑制肝纤维化的潜在机制.方法:实验将大鼠肝星状细胞HSC-T6分为A组、B组,分别与Smad7-BMSCs和PBS共同培养.通过ELISA法检测各组细胞培养液中Col1和HA的含量; MTT法检测各组细胞增殖情况;培养72 h,收集细胞并提取总RNA和总蛋白,采用RT-PCR法检测细胞中Smad7、Smad3、MMP-1、TIMP-1、Col1 m RNA的表达; Western blot检测细胞中Smad7、Smad3、p-Smad3、MMP-1、TIMP-1、Col1蛋白的表达.结果:(1)A组细胞培养液中Col1和HA的含量显著下降(P 0. 05);(2)A组细胞增殖显著降低(P 0. 01);(3)Western和PCR结果显示,A组细胞中Smad7、MMP-1的蛋白和m RNA表达水平较B组显著升高(P 0. 01),而p-Smad3、TIMP-1及Col1蛋白和m RNA表达水平显著降低(P 0. 01).结论:Smad7修饰的骨髓间充质干细胞BMSCs可能通过降低肝星状细胞Smad3蛋白的磷酸化,从而影响MMP-1/TIMP-1平衡,促进星状细胞外基质ECM的降解而实现抗肝纤维化的作用.     

Smad3基因剔除小鼠的血液生理生化指标检测——70日龄Smad3小鼠

对成年 70日龄的Smad3基因剔除小鼠血液生理生化指标进行检测 ,结果只有少数指标雌雄之间差异显著 ,纯合型 (- - )小鼠的白细胞 (WBC)和血小板高于杂合型 (+ - )和野生型 (+ +)小鼠。各项生化指标三种表型之间方差分析CER、CK、UA、GOT、TP、ALP、LDH L、MG、CA差异显著 ;纯合型 (- - )的CK、UA、TG、ALP、LDH L指标高于野生型的小鼠 ;GLU、P、MG、CA指标低。     

Smad2基因敲除小鼠冷冻胚胎库的建立

目的 建立Smad2基因敲除小鼠胚胎库。方法 利用OPS法对Smad2基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻保存,并比较不同杂交组合小鼠的超数排卵数、解冻胚胎的复苏率及发育率。结果 两组不同杂交组合（Smad2^＋/－♂×Smad2^＋/－♀和Smad2^＋／－×Smad2^＋／－♀）小鼠平均超排卵数分别为14．13枚和24．60枚;复苏率分别为90．16％和91．67％;囊胚发育率分别为73．08％和77．05％。这些结果表明Smad2基因敲除杂合子母鼠的超排数量明显低于野生型母鼠的超排数量,而二者胚胎解冻后的复苏率和囊胚发育率没有显著差异。因此我们主要通过对野生型小鼠超数排卵,然后与Smad2基因敲除杂合子雄鼠交配的方法获取胚胎,进行玻璃化冷冻保存,现已冻存胚胎1256枚。结论 成功建立了Smad2基因敲除小鼠胚胎库。     

Smad3基因剔除小鼠的血液生理生化指标检测——35日龄Smad3基因剔除小鼠

对 35日龄的血液生理生化指标进行了检测 ,反映出日常生长繁殖中Smad3基因剔除小鼠性成熟时血液生理生化指标的变化。纯合型 (- - )小鼠的白细胞和血小板明显高于杂合型 (+ - )和野生型 (+ +)小鼠。各项生化指标三种表型之间方差分析CER、GPT、CL、CA、MC差异显著 ,其它指标均差异不显著。纯合型 (- - )的GLU、CK、UA、TG、GPT、GOT、BUN、LDH L指标高于野生型的小鼠 ;CRE、CA、MG的指标低于野生型的     

茵陈蒿汤对肝纤维化大鼠Caspase-12通路以及TIMP-1、Smad2的影响

目的探究茵陈蒿汤对肝纤维化（LF）大鼠Caspase-12通路以及TIMP-1、Smad2的影响。方法雄性SD大鼠45只,随机分为3组,即对照组,模型组和茵陈蒿汤组。使用腹腔注射CCl 4 建立LF模型,茵陈蒿汤组在建模时使用茵陈蒿汤灌胃,持续8周。比较8周后各组大鼠的一般情况,分别使用HE染色和Masson染色观察肝组织形态和纤维化情况。分别使用Western blot和RT-qPCR检测蛋白和mRNA的水平。结果模型组大鼠出现明显的肝损伤和纤维化,茵陈蒿汤组大鼠肝损伤情况和纤维化情况显著减轻。血生化结果显示,模型组ALT和AST水平显著高于对照组（P <0. 05）,菌陈蒿汤干预后ALT和AST水平显著低于模型组,差异具有统计学意义（P <0. 05）。建模后8周模型组大鼠肝组织中GRP78、eIF2α和Caspase-12显著升高（P <0. 01）,茵陈蒿汤组的GRP78、eIF2α和Caspase-12显著低于模型组（P <0. 01）。模型组的Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、Smad2 mRNA和蛋白水平显著高于对照组（P <0. 01）,茵陈蒿汤组Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1、Smad2 mRNA和蛋白水平显著低于模型组（P <0. 01）。结论茵陈蒿汤可显著缓解大鼠肝组织的纤维化,这可能由于茵陈蒿汤具有抑制Caspase-12通路以及Smad2基因的表达发挥抗纤维化和抗凋亡的作用有关。     

Smad3基因剔除小鼠6月龄的生物学特性研究

选用 6月龄Smad3基因剔除小鼠 ,称重、采血、解剖 ,检测其生理生化、体重、脏器重量及剖检的特性 ,其结果 :纯合型的MCH、CK、Tibil、GOT和LDH L ,及其肾上腺脏器指数差异显著 ;+ -的肾脏重量差异显著。不同基因型之间比较 :WBC、HCT、MCHC、GLU、CHO、ALP、BUN、LDH L和CA ,及其体重、心脏、肝脏、肾脏、胸腺的脏器指数差异显著 ,并且纯合型的WBC、HCT、CK、CRE、GPT、GOT、ALP、BUN、LDH L较野生型和杂合型小鼠高 ,MCHC、GLU、CHO、MG、CA较野生型和杂合型小鼠低 ;杂合型的GOT、野生型的CK、ALP差异显著。 6月龄Smad3基因剔除小鼠的生理生化指标及脏器重量和指数具有一定的特性     

PKB negatively modulates TGF-β responsiveness in prostate carcinoma PC-3 cells through its interaction with Smad3

Transforming growth factor-β (TGF-β) is a multi- functional growth regulator belonging to the TGF-β superfamily consisting of TGF-β, activin, bone mor- phological proteins and other factors. It regulates many aspects of cellular behavior, including mi…