B甸羧端去三肽（B28—B30）与去四肽（B27—B30）胰岛素的制备及去三肽 …

双突变的胰岛素原基因在Ｅ．ｃｏｌｉ温度诱导表达体系中直接高密度发酵表达，表达产物形成的包含体经变复性处理及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０纯化后，再由胰酶及羧肽酶Ｂ联合酶切，ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ Ｑ纯化，最终得到Ｂ链羧端去三肽胰岛素（Ｂ２８－Ｂ３０）（ＤＴＲＩ）和去四肽（Ｂ２７－Ｂ３０）（ＤＴＩ）胰岛素的纯品。应用悬滴气相扩散法在含丙酮的柠檬酸钠缓冲体系中培养出可供Ｘ射线衍射用ＤＴＲＩ单晶，空间群为Ｐ２１２     

去B链羧端三肽人胰岛素原的基因构建和表达

用改进的寡苷酸诱导 突变法将人胰岛素原基因（ＢＣＡ）删除编码Ｂ链羧端三肽的碱基片段，得到去Ｂ链羧端三肽胰岛素原的基因（Ｂ＾－３ＣＡ）。为了便于表达产物的蛋白质后加工，又用ＰＣＲ的方法在Ｂ链Ｎ端起始Ｍｅｔ与Ｐｈｅ密码子之间增加了编码Ｌｙｓ的３个碱基，得到改造后基因ＬＢ＾－３ＣＡ，将ＬＢ＾－３ＣＡ克隆到表达质粒ｐＢＶ２２０上，在大肠杆菌系统中热诱导表达，表达率为１２％。表达产物经蛋白质后加工，得到的去     

一个简便、经济的转化胰岛素基因表达产物为重组胰岛素的方法及其应用

建立了直接用胰蛋白酶酶解重组胰岛素基因表达产物的方法,并用以加工猪胰岛素前体(PIP),[B16Ala]PIP和[B26Ala]PIP,分别获得保留了各自亲本全部生物活力的(去B30)胰岛素、(去B30)[B16Ala]胰岛素和(去B30)[B26Ala]胰岛素.进一步证明胰岛素的B链C末端残基不是胰岛素生物活力所必需的.该方法比转肽方法简便、产品得率高、避免了使用有机溶剂;比胰蛋白酶/羧肽酶方法,省去了羧肽酶制剂的使用.(去B30)[B16Ala]胰岛素和(去B30)[B26Ala]胰岛素还保留了其亲本的无自身聚合能力的性质,是单体胰岛素,在临床应用中可代替原单体胰岛素,[B16Ala]胰岛素和[B26Ala]胰岛素.     

人胰岛素A链与B链基因的化学合成,克隆与表达

采用大肠杆菌密码子，用化学法分别合成人胰岛素２１个氨基酸的Ａ链，３０个氨基酸的Ｂ链，并在基因的５端引入甲硫氨酸密码子，尾部加入终止密码，两端加入限制性内切酶，Ａ链为８３个核苷酸，Ｂ链为１１０个核苷酸，经纯化后的寡聚核苷酸进行酶促连接反应后，分别克隆了人胰岛素Ａ、Ｂ链基因，然后选用ＰＬ启动子，构建了以牛生长前１３４个氨基酸的大片段基因，分别与人胰岛素Ａ链、Ｂ链基因的融合基因的融合基因的表达质粒ＰＬＷ     

由猪胰岛素酶促半合成人胰岛素的研究进展

本文通过查阅化学文献,收摘了1972年以来的有关由猪胰岛素促半合成人胰岛素的大量文献,这里引用了21篇,在总结文献的基础上综述了由猪胰岛素促半合成人胰岛素方法中酶的选择,反应条件的影响,苏氨酸酯的选择,以及反应历程和反应动力学的研究,认为由猪胰岛素促半合成人胰岛素的方法操作简单,生产成本相对较低,是生产人胰岛素的一种不可缺少的方法。     

重组人胰岛素及C肽的分离纯化

对基因工程构建的含重组人胰岛素和C肽基因的毕赤酵母工程菌进行诱导表达，工程菌用甲醇诱导72 h后，离心去除菌体，上清液经中空纤维膜超滤后SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换柱层析，0~400 mmol/L NaCl梯度洗脱，得到纯度大于92％的重组人胰岛素原。经Lys-C酶和羧肽酶B酶切后，Sephadex G-25柱分离，得到了重组人胰岛素和C肽。     

酶促半合成人胰岛素的副反应及纯化

研究酶促半合成人胰岛素的副反应．采用DEAE－SephadexA－25阴离子交换层析纯化合成人胰岛素中间体衍生物,去除脱八肽胰岛素以及人胰岛素类似物,精制酶促半合成人胰岛素．     

胰岛素与去五肽胰岛素可及性的比较

利用自制的计算机程序，计算了猪胰岛素和去五肽（Ｂ_（２６）－Ｂ_（３０））胰岛素的可及性，根据计算结果分析讨论并比较了这两种蛋白质的三维结构、分子表面情况及其相关的生物功能。     

胰岛素样人参多肽基因的克隆

在对胰岛素样人参多肽进行了氨基酸顺序分析的基础上，作者设计了该肽的基因并以化学法将基因分四段进行合成，合成好的片段经分离纯化后连接得小肽的完整基因，以Ｐ＾ＵＣ９作为克隆载体，用ＢａｍＨＩ和ＳａｌＩ将其双酶切后与合成的小肽基因相连接得到重组质粒，作者以此重组质粒转化ＪＭ１０１菌株并以含氨苄青霉素和Ｘｇａｌ、ＩＰＴＧ的平板进行了筛选得到了白色的重组子菌落。此后作者通过原位杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交     

毕赤酵母表达人胰岛素前体的纯化和N末端不均一性分析

利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时,在胰岛素前体的N末端引入一段由lO个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性。对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白进行分离纯化,得到的样品经过MALDI-TOF-MS和N末端测序,证实了胰岛素前体N末端不均一性的现象,并对产生不均一性的原因进行了分析。实验同时证实,利用毕赤酵母得到的胰岛素前体,经胰蛋白酶酶切后,生成了B链缺少第30位苏氨酸但N末端均一的胰岛素产物desB30,且C末端未发生降解,这为人胰岛素和地特胰岛素的制备提供了新思路。     

无水三氯化铁催化合成对叔丁基苯甲酸甲酯

以对叔丁基苯甲酸和甲醇为原料 ,无水三氯化铁作催化剂 ,采用蒸馏分水工艺 ,回流温度下合成对叔丁基苯甲酸甲酯。讨论了催化剂用量、反应时间、醇酸摩尔比等因素对反应转化率的影响。最佳反应条件为 :n(甲醇 )∶n(对叔丁基苯甲酸 ) =5∶1,催化剂用量 8.4 % (相对于对叔丁基苯甲酸 ) ,反应时间为 3小时 ,反应温度为回流温度 ,产品转化率为 92 .5 %。经沸点测定、折光率测定予以确证     

A simple, economical method of converting gene expression products of insulin into recombinant insulin and its application

A method, by which the gene expression product of recombinant single chain insulin can be converted into insulin by directly digesting with trypsin, has been established. This method has been used in process of porcine insulin precursor (PIP), [B16Ala]PIP and [B26Ala]PIP into (desB30)insulin, (desB30)[B16Ala]insulin and (desB30)[B26Ala]insulin, respectively, and all of them retain full biological activity of that of their corresponding parent, recombinant human insulin, [B16Ala]insulin and [B26Ala]insulin. The results further demonstrate that the C-terminal residue of B chain is not necessary for insulin's biological activity. Compared with the method of transpeptidation, this method is simple, with a high yield, and avoids the use of organic reagents, and in comparison with the trypsin/carboxypeptidase method, it omits the use of carboxylpeptidase. Besides, (desB30)[B16Ala]insulin and (desB30)[B26Ala]insulin still remained without self-association property as that of their parents, which demonstrate that they are monomeric insulin. So they can be used for substituting for monomeric insulin, [B16Ala]insulin and [B26Ala]insulin, in clinical applications.     

苯酚与甲基叔丁基醚选择性叔丁基化反应的研究

采用甲基叔丁基醚作为叔丁基化试剂,硫酸作为叔丁基化催化剂,研究了苯酚叔丁基化反应,考察了原料配比,反应温度和反应时间对叔丁基化反应的影响。在一定的反应条件下,选择地得到了２,４－二叔丁基苯酚。     

新型橡胶氯化剂的合成与表征

文中以次氯酸钠、叔丁醇和冰醋酸为原料制备次氯酸叔丁酯,考查了反应温度、反应物配比、投料方式、反应时间对产物的收率及纯度的影响;产物放置时间对其储存稳定性的影响;并用色谱-质谱对其纯度、杂质含量及产物结构进行了表征。结果表明,次氯酸叔丁酯合成最佳工艺条件为:次氯酸钠与冰醋酸摩尔比1∶1 ,次氯酸钠与叔丁醇摩尔比1.4∶1,叔丁醇和冰醋酸一次性投料,反应温度0℃,反应3min,产物收率达72.2%,纯度达92%。产物纯度随存放时间的延长下降,杂质叔丁醇含量增加。将次氯酸叔丁酯用于镍系顺丁橡胶的氯化,¹H-NMR和FTIR结果表明,此氯化反应系加成反应,得到了氯化的顺丁橡胶。     

Preliminary crystallographic studies on two insulin analogues which retain high biological activities after alterations in A chain

Using Fmoc solid phase synthesis and site-directed gene mutagenesis, two insulin analogues, [A13-14GABA,A21Ala] porcine insulin and [A3Thr] human insulin, have been prepared respectively, which retain high biological activities. The results show that non-coded y-amino butyric acid (GABA) could replace the dipeptide, Leu-Tyr, in A13-A14 of insulin and that the hydrophilic Thr could substitute Val in A3 of insulin which is highly conservative and included in the receptor binding site. The crystal culture and preliminary crystallographic studies by X-ray diffraction on these two insulin analogues are reported.     

2,6-二叔丁基苯酚与丙烯酸甲酯反应制取3,5-二叔丁基-4-羟基苯丙酸甲酯的工艺

３，５－二叔丁基－４－羟基苯丙酸甲酯是合成抗氧剂１０１０的原料．在此详细地介绍了由２，６－二叔丁基苯酚与丙烯酸甲酯制取３，５－二叔丁基－４－羟基苯丙酸甲酯反应中反应时间、催化剂纯度及加入量的影响，确定了最佳工艺，为３，５－二叔丁基－４－羟基苯丙酸甲酯工艺设计提供了可靠的依据     

高效阻聚剂DNBP合成新工艺

阐述了以邻叔丁基苯酚为原料 ,硝酸和乙酸酐为硝化剂合成DNBP(邻叔丁 4,6 二硝基苯酚 )的新工艺 ,试验确定了反应物配比、硝酸浓度、反应温度等对硝化反应的影响 ,获得了适宜的合成工艺条件。在此条件下DNBP的收率约为 80 %。利用红外光谱进行了产物结构的分析 ,并与国外进口样品进行了对比     

合成抗氧剂1010的动力学

对季戊四醇同３，５－二叔丁基－４－羟基苯丙酸甲酯合成抗氧剂四－〔３－（３，５－二叔丁基－４－羟基苯基）丙酸〕季戊四醇酯的动力学进行研究，提出二丁基氧化锡作催化剂时的反应机理。根据实验确定了反应动力学常数，建立了反应过程数学模型。实验结果表明，模拟值和实验值吻合良好。     

乙醇与叔丁醇合成乙基叔丁基醚的反应动力学研究

采用国产Ｄ－７２型强酸性阳离子交换树脂催化剂,进行了以乙醇和叔丁醇为原料,在常压液相下合成乙基叔丁基醚（ＥＴＢＥ）的醚化反应动力学研究．考虑在实验条件下,因叔丁醇分解为水和异丁烯而引起的体积减少以及水在催化剂上的吸附阻碍效应等影响因素,建立了该过程的反应动力学模型．模型与实验结果吻合得较好．     

杯芳烃的配位化学（Ⅸ）：杯芳烃萃取金属的机理

合成了六对叔丁基杯［６］芳烃，八对叔丁基杯［８］芳烃和四甲基羧基氧基四对叔丁基杯［４］芳烃，并以杯芳烃进行萃取金属离子的研究。对杯芳烃萃取金属的三种机理进行了探讨，并测出其萃取平衡常数。