皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)、黑足鲍(Haliotis iris)及其杂交F_1代营养成分的比较分析

利用生物化学方法,对皱纹盘鲍、黑足鲍及其杂交F1腹足部肌肉一般营养成分、氨基酸及脂肪酸组成与含量、矿物质元素及总糖和还原糖含量进行测定分析。结果表明,杂交鲍的粗蛋白含量最高(17.97%),黑足鲍的粗脂(1%)和粗糖(9.29%)含量最高;杂交鲍氨基酸总含量(58.91%)和呈味氨基酸含量(28.77%)最高,黑足鲍的必需氨基酸含量最高(21.33%),皱纹盘鲍氨基酸总含量、呈味氨基酸含量及必需氨基酸含量最低;黑足鲍与杂交鲍脂肪酸种类和不饱和脂肪酸含量高于皱纹盘鲍。实验共测定9种矿物质元素,除了黑足鲍腹足部肌肉Mn、Cu含量明显高于皱纹盘鲍和杂交鲍外,3种鲍其他7种矿物质元素含量差别不大;黑足鲍总糖和还原糖含量最高,皱纹盘鲍最低。以上实验结果表明,通过种间杂交,亲本某些遗传性状缺陷在子代中得以改良,并且获得的杂交F1代部分性状优于双亲,表现出一定的杂交优势。     

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)与黑足鲍(Haliotis iris)杂交育苗的初步研究

采用新的性腺发育控制技术和温控转换受精技术,对皱纹盘鲍与黑足鲍进行了杂交和自交育苗比较研究.结果表明,皱纹盘鲍♀×黑足鲍6的杂交受精率和孵化率分别为23.4％和32.87％,皱纹盘鲍自交受精率和孵化率分别为77.97％和76.86％,二者附着率和变态率相近;在水温20℃,盐度3.0％的条件下,杂交鲍胚胎发育速度明显比自交鲍滞后,但生长速度明显高于皱纹盘鲍,体现出较好的杂交优势.     

皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）、黑足鲍（Haliotis iris）及其杂交F1代同工酶比较分析

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对皱纹盘鲍、黑足鲍及其杂交F1代的脏器和肌肉中的7种同工酶（ MDH、POD、EST、CAT、ODH、SOD和LDH）进行了比较分析,以探究双亲同工酶基因在杂交F1代中的表达情况以及3种鲍鱼品系之间产生差异的分子基础。结果表明,两亲本中部分同工酶谱表达相似,如ODH和肌肉中的POD、EST在父母本中酶谱相同;同时两个亲本之间的同工酶谱具有差别,MDH、LDH和内脏中EST的酶谱均存在稳定的种间差异。杂交F1代的同工酶谱与母本皱纹盘鲍的相似,其中POD、EST、LDH、SOD和肌肉中的MDH酶谱均与母本相同,而与父本黑足鲍的差别较大,说明主要是母本的同工酶基因在杂交F1代中表达。     

三种鲍腹足肌胶原多肽抗氧化性研究

研究了皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)、黑足鲍(Haliotis iris)及其杂交鲍腹足胶原多肽的制备和性质,并采用总还原力、对O^-₂·和·OH自由基清除率和致衰小鼠灌胃胶原多肽后体内MDA、SOD和GSH-PX变化来评价3种鲍胶原多肽的抗氧化性。结果显示,皱纹盘鲍、黑足鲍及其杂交鲍的胶原蛋白分别占总蛋白含量的23.44%、30.78%和26.92%,皱纹盘鲍与杂交鲍胶原蛋白含有α1、α2、β和γ链,而黑足鲍胶原蛋白没有γ链;来自3种鲍的胶原多肽均呈现出较高的还原力、O^-₂·和·OH自由基清除能力,对O^-₂·清除率的IC₅₀值分别为3.03、2.40、1.15 g/L,对·OH清除率的IC₅₀值分别为4.12、3.58、3.70 g/L;灌胃3种胶原多肽后,致衰小鼠肝脏和血清的MDA含量均降低,SOD和GSH-PX活力均上升。三者比较,杂交鲍胶原多肽在降低MDA含量、提高GSH-PX活力的作用最强,黑足鲍胶原多肽在提高SOD活力的效果最显著。     

4种鲍肠道菌群多样性比较

利用16S rRNA高通量测序技术比较皱纹盘鲍、黑足鲍、黑唇鲍和杂交鲍(皱纹盘鲍♀×黑足鲍♂)菌群结构特征、多样性.结果表明,OTU数量、Shannon指数和Chao1指数均为黑足鲍最大,黑唇鲍最小;4种鲍肠道中优势菌门为变形菌门(Proteobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteria)和软壁菌门(Tenericutes),占比达到61.93％～95.78％.其中,皱纹盘鲍、黑足鲍和杂交鲍中绝对优势菌门为变形菌门,而黑唇鲍为软壁菌门;冷泥杆属(Psychrilyobacter)、弧菌属(Vibrio)和支原体属(Mycoplasma)为4种鲍肠道的优势菌属,占比达到39.70％～53.65％;4种鲍核心菌群共有175个OTU,相对丰度超过1％的共有11个OTU;Anosim和Adonis分析均发现杂交鲍与黑唇鲍、杂交鲍与黑足鲍、皱纹盘鲍与黑唇鲍肠道菌群存在显著性差异(P<0.05);经LefSe分析鉴定出4种鲍肠道菌群具有显著性差异的Biomarker共有7个,包括黑足鲍的6个和杂交鲍的1个.     

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)、黑足鲍(Haliot isiris)及其杂交F_1代同工酶比较分析

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对皱纹盘鲍、黑足鲍及其杂交F1代的脏器和肌肉中的7种同工酶(MDH、POD、EST、CAT、ODH、SOD和LDH)进行了比较分析,以探究双亲同工酶基因在杂交F1代中的表达情况以及3种鲍鱼品系之间产生差异的分子基础。结果表明,两亲本中部分同工酶谱表达相似,如ODH和肌肉中的POD、EST在父母本中酶谱相同;同时两个亲本之间的同工酶谱具有差别,MDH、LDH和内脏中EST的酶谱均存在稳定的种间差异。杂交F1代的同工酶谱与母本皱纹盘鲍的相似,其中POD、EST、LDH、SOD和肌肉中的MDH酶谱均与母本相同,而与父本黑足鲍的差别较大,说明主要是母本的同工酶基因在杂交F1代中表达。     

温度骤变对皱纹盘鲍与西氏鲍及其杂交群体的热休克蛋白表达影响

杂交是改良种质的有效方法,杂交后代往往具有生长率、存活率、抗逆性方面的优势.为研究杂交对鲍的耐热性的影响,以皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)、西氏鲍(Haliotis gigantea)以及它们的正反交F1代为研究材料,以半定量PCR为研究手段研究了在梯度温度应激下,2种热休克蛋白(HSPs)在4个群体中的表达情况.实验结果表明,在正常温度下,西氏鲍具有最高的HSPs水平;在应激条件下,皱纹盘鲍的HSPs水平呈现先上升后下降的趋势,其他3个群体的HSPs水平均随温度上升而上升;在相对高温的30℃条件下,皱纹盘鲍的HSPs水平显著低于其他3个群体.本研究的结果说明,正反交F1代明显地继承了西氏鲍的耐高温能力,表现出杂种优势或中亲优势.     

人工四倍体皱纹盘鲍的发生

采用化学药物进行诱导皱纹盘鲍四倍体的研究,结果表明,在受精后１０ｍｉｎ开始,用１ｍｇ／ｌ浓度的ＣＢ持续处理皱纹盘鲍受精卵３０ｍｉｎ通过阻止极体释放,可获得２１．９％的四倍体胚胎。用０．０５ｇ／Ｌ浓度的秋水仙素,在受精后４０～５０ｍｉｎ的效应时间开始处理,持续３ｍｉｎ能抑制皱纹盘鲍的第一次有丝分裂,四倍体诱导率最高为１３．０％,此外观察到,秋水仙素对染色体组加倍最为敏感的效应时间,也是胚胎对诱导处理     

麦饭石、稀土作为鲤鱼、皱纹盘鲍饲料添加剂研究

以麦饭石、麦饭石稀土作为鲤鱼、皱纹盘饱饲料中微量元素添加剂,与无机盐添加剂进行了对比喂养试验。结果表明：饲料中添加1％麦饭石能显著地促进鲤鱼和皱纹盘鲍幼鲍的生长;方差分析表明,在鲤鱼饲料中添加麦饭石的三个试验组鱼体平均增重率与无机盐对照组差异显著（P＜0．05）,与未添加微量元素添加剂的基础组差异极显著（P＜0．01）。皱纹盘鲍饲料中添加1％麦饭石的试验组鲍体平均增重率与无机盐对照组差异不显著,但与未添加微量元素的基础组差异显著（P＜0．05）。     

锌、铜离子对皱纹盘鲍（Haliotis discus）幼体毒性的初步研究

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)属腹足类软体动物。在其人工育苗中,往往环境有害因子对鲍鱼幼体有明显的毒害作用。为克服这些有害因子,以利于人工育苗工作正常进行,我们开展了锌、铜离子对皱纹盘鲍幼体毒性试验工作。浙江北部沿海与我国重要的上海经济区相邻,工业发达、人口密集,各种污水直接排放入海。因此,研究各种污染物对海洋生物的毒性影响。在水产资源环境保护上具有重要意义。各种污染物对海洋生物的毒害作用研究报导较多,但有关有害物质对皱纹盘鲍的毒性     

皱纹盘鲍组织培养研究

用ＭＥＭ培养液对皱纹盘鲍的血细胞、鳃、外套膜、肾脏和足肌进行了组织培养研究,血细胞培养１ｈ后即贴壁生长,从形态上可分为成纤维样细胞和圆形细胞,但２ｄ后即脱落,鳃细胞呈圆形,增殖迅速,容易获得传代细胞,其中两株现已分别传至２２代和３０代,肾细胞呈上皮样,生长缓慢,已传至第３代、外套膜和足肌则未获传代细胞。     

皱纹盘鲍Hdh-MMP-1基因cDNA的克隆及原核表达

利用同源克隆方法和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肌肉组织中克隆得到基质金属蛋白酶-1基因(Hdh-MMP-1)cDNA全长序列(GenBank登录号:KR537291)。结果表明,Hdh-MMP-1 cDNA全长2136 bp,其中ORF长度为1551 bp,编码区含有516个氨基酸残基,预测其分子质量为58.94 ku,理论等电点为5.99。Hdh-MMP-1具有MMPs家族典型的N-端前肽区、催化区、铰链区和C-端类血红素结合区。利用SOPMA和SWISS-MODEL软件对该基因编码蛋白质高级结构进行了预测分析。氨基酸序列相似性结果显示,Hdh-MMP-1不仅与多种生物MMP-1基因具有序列相似性,且与某些软体动物和虫类的MMP-14及MMP-19也具有序列相似性。多序列比对结果显示,Hdh-MMP-1与红螺鲍、杂色鲍、美洲牡蛎的MMP-1相似性分别为95.29%、82.35%、38.85%。随后,构建了表达载体pET28a-catMMP-1,利用大肠杆菌原核表达系统,在大肠杆菌BL21 (DE3)中成功对该蛋白质催化区进行异源表达。     

Comparative Studies on the Molecular Genetic Diversities among Haliotis discus hannai,H.discus discus and Their Hybrids

0　IntroductionAsagroupofthemostimportantmarineunivalvegastropods ,thegenusabalonehasmorethan 1 0speciescultivatedintheworldnowadays .However,themajorityofspeciesgrowslowly ,challengingtheircultivation .Manystudies ,includingtriploidizationofH .discushan nai (Zhang ,1 998) ,gynogenesisofH .discushannai(Fujino ,1 990 )andgrowthhormonegenetransformationofH .rufescens (Power,1 996 ) ,werecarriedouttowardthedevelopmentoffastgrowingvarieties .Unfortunately ,theseapproacheshavenotbroughtprofoundc…     

皱纹盘鲍消化系统的组织学研究

利用光学显微镜研究了皱纹盘鲍的消化系统的组织学结构。结果表明：鲍的消化系统是由消化道（口区、食道、嗉囊、胃盲囊、胃、肠、直肠、肛门）、消化腺（肝胰腺）组成。鲍的唇上皮由单层柱状细胞构成,细胞内充满着色素颗粒,唇内有纵横交错的肌纤维,其间有许多神经纤维分布。其齿舌比较发达,齿舌囊的腹面正中线及其两侧分别有极发达的横纹肌肉块。两侧的肌肉与包围齿舌软骨的肌肉群相汇合,其中绝大部分为纵肌,亦有少量环肌或斜     

肉茴复合散对肉仔鸭肌肉营养成分的影响

采用肉桂、小茴香、良姜、花椒、六曲等中草药组成肉茴复合散,对肉仔鸭进行饲喂试验.结果表明：肉仔鸭肌肉中水分和脂肪含量无显著性差异（P〉0.05）;肌肉中的蛋白质和肌苷酸的含量,试Ⅱ组、试Ⅲ组、试Ⅳ组极显著高于对照组和试Ⅰ组（P〈0.01）;肌肉中胆固醇的含量显著降低（P〈0.05）;并提高了不饱和脂肪酸的含量和降低了饱和脂肪酸的含量（P〈0.05）;同时,除个别氨基酸外,能显著提高肉仔鸭的肌肉中氨基酸尤其是必需氨基酸和鲜味氨基酸的含量（P〈0.05）或（P〈0.01）.有效地改善了肉仔鸭的肌肉品质.肉茴复合散在肉仔鸭日粮中的添加量宜以1%为最佳.     

三角褐指藻和小球藻营养成分的对比分析

通过检测三角褐指藻和小球藻的蛋白质、糖、色素、游离氨基酸及不饱和脂肪酸的含量,比较了三角褐指藻和小球藻的营养价值.结果发现:在单个细胞中,三角褐指藻的蛋白质、糖、叶绿素a、类胡萝卜素、游离氨基酸的含量高于小球藻;在1个生长周期(12,d)中,三角褐指藻累积的蛋白质、糖、游离氨基酸、棕榈油酸、二十碳五烯酸(EPA)也高于同龄的小球藻,但叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素、油酸、亚油酸、亚麻酸及二十碳烯酸的累积量却低于小球藻.综合分析,三角褐指藻的营养价值不比小球藻低,具有潜在的开发前景.     

幼龄皱纹盘鲍消化系统的组织学研究

以组织学方法研究了45日龄皱纹盘鲍的消化系统,消化道粘膜上皮呈扁平状、立方状或柱状,食道可区分为3段,食道侧囊有3种细胞成分,嗦囊比胃小,肠有5种细胞成分,唾液腺由粘液细胞和纤毛细胞组成,消化腺由消化细胞和嗜碱性细胞组成。     

皱纹盘鲍循环系统和排泄系统的组织学研究

对皱纹盘鲍的循环系统和排泄系统进行了组织学研究，并对二者组织学上的关系进行了探讨．结果表明：鲍循环系统由心脏、血管和许多血窦组成．属于开管式循环．血液由血浆和3种不同形态的血淋巴细胞构成．鲍的排泄系统主要由左右2个肾脏组成．肾脏呈囊状．由肾脏壁和肾实质构成．而肾脏壁由围心腔壁延伸而成．与围心腔壁具有几乎相同的结构．肾小管是肾实质的主耍功能结构，由一层腺上皮细胞构成．肾小管之间充满血窦．循环系统与排泄系统组织结构上的紧密联系有利于代谢产物的排泄．