不同栽培基质配比对重楼主要生物学性状的影响研究

以具有黏性的沙壤土、草碳和细河沙按照不同比例配比作为栽培基质,采用单因素试验研究华重楼、狭叶重楼和滇重楼主要生物学性状的表现。通过SSR法方差分析,结果表明:在沙壤土、草碳和河沙比例为1∶0∶0,1∶1∶0,1∶1∶1和1∶2∶1的配比基质中,配比为1∶1∶1的基质最适宜狭叶重楼、华重楼和滇重楼生长,主要生物学性状表现优异,特别是3种重楼的地下茎长、茎粗和单株地下茎质量均最高,3种重楼在6 m~2小区的平均产量分别为13.6,18.8和15.6 kg。狭叶重楼、华重楼和滇重楼在沙壤土、草碳和河沙配比为1∶1∶1与1∶2∶1基质中地下茎产量之间差异不显著,但其地下茎产量极显著高于配比为1∶0∶0,1∶1∶0的产量,狭叶重楼、华重楼和滇重楼在1∶2∶1配比基质中的地下茎产量显著高于配比为1∶0∶0的产量。通过土壤改良,在具有一定黏性沙壤土中种植重楼具有可行性,且其产量较高,具有较好经济收益。     

贡嘎山东南坡重楼的土壤养分及栽培重楼的性状研究

通过对贡嘎山东南坡重楼资源实地考察,明确了贡嘎山东南坡野生重楼资源的土壤属冲积土壤和森林土壤,土壤中有机质含量和矿质元素丰富,保肥供肥能力强;对多叶重楼、毛重楼、滇重楼、禄劝重楼、花叶重楼、北重楼和卵叶重楼进行栽培,测定其鲜活地下块茎的径粗、径长、产量和新芽数量等指标,结果表明:多叶重楼地下块茎的径粗、产量和新芽数量最高,平均每株的径粗达5.30 cm,单株地下块茎重量达55.83 g,新芽数量达14.53个;栽培重楼时最适宜的重楼品种为多叶重楼,其次是滇重楼和毛重楼。     

滇重楼切块繁殖不定芽发生的组织学研究

 对滇重楼切块繁殖过程中不定芽发生及其组织细胞学特征进行了研究.结果表明,不定芽仅在根状茎的节上发生,切块上的不定芽,起源于薄壁组织细胞脱分化,为直接发生,不经过愈伤组织阶段.从淀粉粒的分布等情况推测,顶芽具有顶端优势,这正是自然状态下1个根茎只能产生1个芽的原因.滇重楼切块繁殖的机理是顶端优势的打破.     

滇重楼根可培养内生细菌多样性分析及促生菌筛选

为了探究滇重楼根的内生细菌的多样性以及筛选促生菌株,从云南丽江采集5年生滇重楼,并从0.1 g根中分离获得228株内生细菌. 16S rDNA序列分析结果表明,这些内生细菌归属到4个门,5个纲,7个目,11个科,13个属,其中假单胞菌属(40.35%)和芽孢杆菌属(22.37%)为优势属.之后,通过与小麦幼苗的共培养,筛选获得10株具有促进生长作用的菌株. YNR32016菌株对小麦幼苗的株高的促进作用最强,与对照相比增长了72.43%;YNR32041菌株对小麦幼苗的根长的促进作用最强,与对照相比增长了602.51%; YNR32046菌株对小麦幼苗的茎粗的促进作用最强,与对照相比增长了26.87%.结果为深入分析滇重楼不同组织内生菌的多样性以及开发促生菌资源奠定了基础.     

滇重楼光合作用与环境因子的关系

 利用LI-6400光合测定仪和人工气候箱研究了滇重楼叶片的光合补偿点、光合饱和点、羧化效率和CO₂补偿点,并进行温度、相对湿度对光合速率的单因子影响研究.滇重楼叶片的光合补偿点为5.7μmol/(m²·s),光合有效辐射增至2000μmol/(m·s)²仍未测到光合饱和点,最适光合有效辐射为750～2000μmol/(m·s)².叶片的羧化效率为0.0295,CO₂补偿点为65μmol/mol,光合速率随CO₂浓度升高而明显增加,高于大气正常值的CO₂浓度对增加滇重楼光合作用的光能利用率是有利的.光合速率在温度11～20℃范围内,随温度升高上升;20～35℃随温度升高下降,最适温度为16～28℃.相对湿度20%～85%的试验范围内,叶片光合速率随湿度增加而增大,最适相对湿度条件在75%以上.     

重楼种子萌发因素分析

本研究探索影响重楼（Paris polyphylla）种子萌发的因素,为重楼快速育苗提供理论基础。实验利用不同浓度植物激素和变温层积方式对重楼种子进行处理,统计种子的萌发时间及萌发率。结果显示,不同浓度赤霉素（GA₃）处理对种子萌发率无显著差异,而种子来源不同对种子萌发率有极显著的影响;3种变温层积方式下重楼种子均有萌发,变温层积对华重楼和滇重楼种子萌发时间和萌发率的影响并不显著,而种子来源对萌发时间和萌发率的影响极显著。因此,外加GA₃、不同的层积方式和变温处理均不能明显改善其萌发特性,种子的萌发时间和萌发率高低与种子来源显著相关。     

三峡大老岭地区几种野生重楼属植物驯化栽培研究

为提高重楼栽培种植的经济效益，以及更好服务广大林农脱贫致富和产业调整，开展不同种类物候观测和栽培对比试验研究，进一步筛选适宜推广品种，探索丰产栽培技术，以期指导重楼人工种植中药材产业的科学发展.在前期野外调查的基础上，选择七叶一枝花、球药隔重楼、华重楼3种野生种源为基础，设置3个地点海拔梯度因素，开展不同物种生活节律物候期对比观测，以地下茎年净增长、增粗、增重为自变量开展对比栽培试验研究.结果表明：(1)3种重楼生长期(出苗期-枯死期)长短排序为华重楼>球药隔重楼>七叶一枝花.(2)七叶一枝花地下茎年增长均值、年增重均值最大，分别达到4.584 cm、9.271 g,球药隔重楼花地下茎年增粗均值最大，达到0.518 cm,七叶一枝花栽培表现型最优，球药隔重楼次之，可作为重点栽培繁殖品种.从地点上看，千斤园(海拔1 000 m)在地下茎年增长均值、年增重均、增粗均值均优于其他两个地点，可作为重点推广区域.     

TTC-脱氢酶还原法测定滇重楼细胞活力优化条件筛选

目的:采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,TTC)-脱氢酶还原法对超低温保存后的滇重楼地下茎进行细胞活力测定,旨在探索出一套更加简单、快速和准确的细胞活力测定方法.方法:选取TTC-脱氢酶还原法测定细胞活力过程中的TTC溶液浓度、pH值、反应温度、...     

不同育苗基质及激素处理对华重楼种子出苗的影响研究

针对重楼育苗常遇到的出苗时间长、出苗率低和种子播种后腐烂严重的问题,对最佳育苗方式、育苗基质及在较短时间内获得较多的重楼种苗等方面进行研究,旨在为重楼栽培和育苗方面提供一些技术参考。研究了不同厚度稻草覆盖、土壤与草炭不同配比、不同浓度KNO₃与赤霉素（GA3）溶液浸种重楼种子对重楼种子出苗的影响。结果表明：在重楼种子播种前的土壤表面覆盖厚度为4 cm的稻草后播种重楼,再在重楼种子表面覆盖厚度为4 cm的稻草,重楼种子的出苗率最高,达90.8%,与其他覆盖厚度的差异具有高度统计学意义,出苗时间为播种后的第20月;土壤与草炭质量比为1∶3时,重楼种子的出苗率为73.0%,与其他质量比的出苗率的差异具有高度统计学意义,出苗时间为播种后的第20月;用c（KNO₃）为19 mmol/L、c（GA3）为600 mg/L的溶液浸种重楼种子,种子下胚轴长出率最高达56.67%,与排第2位溶液组合（c（KNO₃）为16 mmol/L、GA3的质量浓度为600 mg/L）下胚轴长出率的差异具有高度统计学意义,出苗时间为浸种处理后的第8月。3种育苗方式比较表明：稻草覆盖厚度为4 cm、土壤与草炭质量比为1∶3的育苗基质利于提高重楼种子的出苗率,c（KNO₃）为19 mmol/L、GA3的质量浓度为600 mg/L的溶液浸种重楼种子,可大大缩短重楼种子的育苗时间,幼苗获得率约50%。     

十一种重楼属植物的RAPD分析

作者利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，对重楼属植物11个种的遗传多样性进行了分析．12个引物共扩增出86条带，其中有82条(95．3％)表现出多态性，说明重楼属植物有很高的遗传多样性．用UPGMA法则构建分子系统树，并把11个种划分为6组．     

三峡大老岭地区野生重楼属植物分布格局研究

野生重楼属植物资源是我国重要的药用植物.为掌握宜昌野生重楼种质资源分布和生长现状,推进野生资源的有效保护,更有效服务于宜昌林下中药材种植产业,我们采取野外实地样方调查、典型调查与室内相关资料查对相结合的方法,利用SPSS22.0软件进行统计分析.结果表明：(1)该地区主要分布野生重楼属植物有3种4变种,按照多度指标排序为七叶一枝花>球药隔重楼>华重楼>具柄重楼>小重楼>巴山重楼.(2)不同重楼分布因海拔、坡向、植被类型、土壤养分等因子而差异显著.(3)不同重楼分布格局方面,集中于800～2 000 m,七叶一枝花最宽泛;西南向、硬阔植被分布最集中;七叶一枝花、球药隔重楼、华重楼在阔叶类优势树种群落分布最为集中最为明显;根际土壤有机质、全氮、速效磷、速效钾在理化性质中的系数大.     

华重楼及其常见混伪品的多重聚合酶链式反应快速鉴定体系的建立和应用

收集华重楼常见混种栽培种的根茎,叶片及种子样品,对华重楼极其常见混伪品的r DNA-ITS片段进行对比分析。基于重楼属植物r DNA-ITS的SNP位点,针对华重楼、球药隔重楼、黑籽重楼设计3组共6条特异性引物,建立并优化多重PCR反应体系。应用已建立的多重PCR方法对华重楼、球药隔重楼、黑籽重楼及常见的其他重楼属混伪品进行鉴别,验证方法的准确性。通过观察电泳检测扩增产物条带的位置及数量实现快速检测的目的。建立的多重PCR鉴定方法能准确地对华重楼极其常见重楼属混杂栽培种进行快速鉴别。多重PCR方法特异性强,灵敏度高,高效快速,可用于多基源中药材及同属近缘种的快速鉴别,同时为中药材的种质资源鉴定提供可行的方法。     

华重楼极其常见混伪品的多重PCR快速鉴定体系的建立和应用

目的：建立快速鉴定重楼属中药材华重楼极其常见混伪品的多重PCR方法。方法：收集华重楼,其常见混种栽培种的根茎,叶片及种子样品,对华重楼极其常见混伪品的rDNA-ITS片段进行对比分析;基于重楼属植物rDNA-ITS的SNP位点,针对华重楼,球药隔重楼,黑籽重楼设计3组共6条特异性引物,建立并优化多重PCR反应体系;应用已建立的多重PCR方法对华重楼,球药隔重楼,黑籽重楼及常见的其他重楼属混伪品进行鉴别,验证方法的准确性。通过观察电泳检测扩增产物条带的位置及数量实现快速检测的目的。结果：建立的多重PCR鉴定方法能准确地对华重楼极其常见重楼属混杂栽培种进行快速鉴别。结论：多重PCR方法特异性强,灵敏度高,高效快速,可用于多基源中药材及同属近缘种的快速鉴别,同时为中药材的种质资源鉴定提供可行的方法。     

表观遗传调控滇重楼内生真菌活性物质的合成

提出化学表观筛选——分子遗传平台策略,利用表观遗传理论调控滇重楼内生真菌抗菌活性物质的合成。化学表观遗传筛选是对真菌进行高通量化学表观抑制剂的筛选,旨在经济快捷地获得抗菌活性物质合成受到表观调控的菌株;建立分子遗传平台是根据同源基因克隆真菌的相关表观遗传酶类基因,靶向改变表观遗传酶类的表达,旨在获得遗传稳定性高的改良菌株。     

重楼属植物AFLP实验体系的建立

通过对影响重楼AFLP-银染技术体系的关键因素作对比研究,建立了一套优化的重楼AFLP分子标记体系.优化的关键因素为:1)DNA采用CTAB法提取更适于重楼的AFLP分析,且从幼叶中提取的DNA纯度和质量最高;2)酶切时间为9h时效果最佳;3)选择性扩增时退火温度为56℃;4)从15对引物中筛选出4对进行选择性扩增,得到扩增条带276条,其中多态性带201条(占72.83%).     

云南重楼的化学成分

采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20和ODS等色谱技术,对云南重楼的大孔树脂30%乙醇(体积分数)洗脱部位进行分离,得到13个化合物,通过理化常数和波谱手段鉴定其结构.化合物分别鉴定为calonysterone(1),glycoside St-J(2),methyl ester of glycoside St-J(3),cussonoside B(4),methyl 3,4-dihydroxybenzoate(5),α-ecdysone(6),20-hydroxyecdysone(7),pinnatasterone(8),重楼皂苷H(9),重楼皂苷Ⅶ(10),parisaponin I(11),parisyunnanoside B(12)和重楼皂苷Ⅱ(13).其中化合物1-5首次从该属植物中分离得到,1-6首次从该植物中分离得到.     

HPLC法测定重楼块根中4种重楼皂苷含量研究

建立HPLC测定重楼块根中4种重楼皂苷含量的方法。结果表明:重楼皂苷Ⅰ质量浓度在0.054~0.540 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.999 6 (n=5),回收率为99.12%,RSD为1.95%;重楼皂苷Ⅱ质量浓度在0.043 4~0.434 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.990 8 (n=5),回收率为99.10%,RSD为1.89%;重楼皂苷Ⅵ质量浓度在0.012 6~0.126 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.993 3 (n=5),回收率为99.46%,RSD为2.01%;重楼皂苷Ⅶ质量浓度在0.010 3~0.103 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.999 1 (n=5),回收率为96.52%,RSD为2.25%。HPLC法能够准确检测出重楼块根的主要皂苷成分及其含量,且操作简便,可为重楼中4种主要皂苷含量的检测提供科学方法。     

云南重楼属植物资源现状与保护对策

重楼是一种珍稀药用植物,我国共有重楼19种,云南是主要分布地之一,且品种丰富,但由于工业生产对重楼需求量的不断增加,使得野生重楼越来越少,资源日渐枯竭.主要从介绍云南重楼资源的分布情况及分布特点入手,深入分析了重楼资源日渐稀缺濒危的原因,并提出确实可行的保护对策.     

重楼愈伤组织的抑菌作用研究

目的:探究重楼根茎诱导获得愈伤组织的抑菌作用,为中药资源的有效开发利用提供一条重要途径.方法:以宋内氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌为受试菌,头孢噻肟钠为对照药,采用试管稀释法和琼脂平板扩散法对重楼根茎愈伤组织提取物的抑菌作用进行研究,并比较它们的最小抑菌浓度.结果:重楼根茎愈伤组织提取物对宋内氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度分别为15.63 mg/m L、31.25 mg/m L、31.25 mg/m L.结论:重楼根茎愈伤组织提取物具有一定的抑菌作用,为其临床应用提供了实验依据.     

黑籽重楼种内AFLP遗传多样性及遗传分化研究

以四川瓦屋山、峨眉山和彭州3个地区的黑籽重楼原变种居群及峨眉山、彭州2个地区的无瓣黑籽居群为供试材料,用筛选出的4对引物,对5个群体共计74个个体进行AFLP分析,每对AFLP引物扩增出61～78条多态带,共得到235条多态带.黑籽重楼遗传多样性较高,物种水平的多态带百分率PPB为81.88%,Nei'S基因多样性指数H为0.2490.Shannon多样性指数I为0.3867,居群间基因流为1.6870;在变种水平上,黑籽重楼原变种PPB为78.40%,Nei's基因多样性指数H为0.2849,Shannon多样性指数I为0.4237;无瓣黑籽的PPB为63.07%,Shannon多样性指数I为0.3603,Nei'S基因多样性指数H为0.2439.黑籽重楼种下的两个变种间的遗传分化系数Gst为0.0726,遗传分化指数PHIst为13.33%.聚类结果无瓣黑籽重楼和黑籽重楼原变种分别分成两支.总而言之,黑籽重楼物种水平上有丰富的遗传多样性,居群内遗传分化大于居群问,居群间的相似性系数很大,但种下的两个变种间有一定的遗传分化.