融合蛋白PTD-SOD对紫外辐射引起的细胞损伤的保护作用

采用MTT法、琼脂糖电泳以及测定细胞内抗氧化指标的方法研究融合型超氧化物歧化酶PTD-SOD对UVB照射引起的L-02细胞损伤的保护和修复作用.细胞存活实验表明,辐射时间为45 min,SOD活力为1 200U·mL-1时,在PTD-SOD保护和恢复作用下的细胞存活率可达94.0%和82.5%,而野生型SOD作用下的细胞存活率仅为68.2%和54.1%,与正常对照组相近.琼脂糖电泳结果显示,PTD-SOD能有效降低辐射对L-02细胞DNA的损伤程度.酶法检测细胞内的抗氧化指标时发现,PTD-SOD能有效地提高细胞内SOD活性,同时检测到细胞内过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力的增加.相对野生型SOD,融合蛋白PTD-SOD对UVB辐射下L-02细胞的保护和恢复能力得到了显著的增强,具有作为防治UVB损伤药物的潜力.     

肌肽对顺铂所致小鼠急性肾损伤的保护作用

研究肌肽（carnosine）对顺铂（cisplatin, CDDP）所致小鼠体内急性肾损伤的保护作用,并探讨可能的机制.雌性昆明小鼠按体重分成4组,分别为正常对照组,肌肽对照组,顺铂化疗模型组和肌肽保护组.正常对照组和肌肽对照组分别连续腹腔注射生理盐水和肌肽10 d;顺铂化疗模型组于第5天单次腹腔注射顺铂;肌肽保护组连续腹腔注射肌肽10 d,并于第5天单次腹腔注射顺铂;所有动物于第10天采血处死,分别测定各组血清尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)含量,分析肾皮质匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力变化,苏木精-伊红染色观察肾组织病理学改变.结果表明：顺铂化疗模型组血清CRE,BUN和肾皮质匀浆MDA含量明显上升,GSH和SOD含量显著下降,肾组织病理学变化明显,肌肽保护组可明显改变上述现象. 由此得出结论,肌肽可以减轻顺铂引起的急性肾损伤,其作用机制可能与其抗氧化作用和清除自由基活性有密切关系.     

蓝靛果多酚提取物保肝、保肾的药效研究

研究蓝靛果多酚提取物对四氯化碳(CCl₄)、顺铂诱导的急性肝损伤、急性肾损伤小鼠的保护作用,为蓝靛果多酚提取物保肝保肾作用以及蓝靛果相关健康产品的研发与临床应用提供理论依据.选择CCl₄诱导小鼠肝损伤、顺铂诱导小鼠肾损伤动物模型,灌胃蓝靛果多酚提取物,检测各组小鼠组织形态学、脏器指数、血清中肝、肾功能指标和氧化应激指标的变化.结果表明,与模型组相比,蓝靛果多酚提取物能够降低肝、肾损伤小鼠的组织损伤程度,改善肝、肾细胞病理现象,调节肝、肾相关功能,提高抗氧化指标.因此,蓝靛果多酚提取物具有保肝、保肾的作用,对于健康产品开发和临床应用具有重要意义.     

鞣花酸对顺铂引起小鼠急性肾损伤的影响

目的:研究鞣花酸(EA)对顺铂引起小鼠急性肾损伤的减轻作用,探讨其可能的机制.方法:将32只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组、EA给药组(10,30 mg/kg),给予顺铂(25 mg/kg)建立小鼠急性肾损伤模型,观察EA给药后的改善作用.取小鼠血清并用试剂盒测定尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和肾组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)及还原型谷胱甘肽(GSH)水平.用HE和Tunel染色观察肾脏病理结构变化和细胞凋亡,用Western blotting测定肾组织中促凋亡蛋白(Bax)和抗凋亡蛋白(Bcl-2)的表达.结果:与模型组比较,EA均能不同程度地降低血清中BUN,SCr,MDA,TNF-α和IL-1β水平,增加肾组织中GSH和T-SOD的活性;下调肾组织中Bax,上调Bcl-2的蛋白表达水平;改善顺铂所致的病理变化.结论:EA对顺铂引起的肾损伤具有保护作用,这与EA的抗氧化、减少炎症反应和抑制肾小管上皮细胞凋亡有关.     

连翘叶茶保肝作用的实验研究

采用给小鼠腹腔注射四氯化碳制作肝脏损伤模型，通过测定小鼠血清中ALT、AST、CHE、TBIL、TP、GSH和肝脏中SOD、MDA、CHE、ALB、ALT、GSH等指标，研究连翘叶茶对四氯化碳所致小鼠急性肝脏损伤的保护作用．结果表明，连翘叶茶可抑制血清和肝脏中ALT和AST的异常增高，提高血清和肝脏中SOD和CHE的活性，增加GSH、TP和ACB含量，减少MDA形成，调节TBIL代谢．说明连翘叶茶具有明显的保护肝脏的作用。     

GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达

目的探讨GST-MIG,GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达.方法高压水动力尾静脉注射pCMV-tag2B空载质粒的12只小鼠为对照组,注射pCMV-tag2B-HBx质粒的12只小鼠为观察组.采用Elisa法检测IFN-γ表达;采用免疫组化法检测小鼠肝脏中MIG,IP-10表达;扩增MIG,IP-10基因至pET42a,构建载体后行IPTG诱导表达;采用PAGE和Western blot法鉴定蛋白表达;采用GST柱纯化表达蛋白。结果对照组小鼠肝脏中无MIG,IP-10表达,观察组小鼠肝脏中有MIG,IP-10表达;观察组小鼠肝脏中IFN-γ表达升高21.4%,对照组降低了54.1%,与小鼠肝脏中MIG,IP-10表达一致;MIG基因条带为330 bp,IP-10基因条带为246 bp,经重组质粒测序模版检测,并与Blast进行对比,测序结果与目的基因一致;未诱导组无蛋白表达,pET42a空载IPTG诱导仅有GST表达(26 kD),pET42a-mMIG,pET42a-mIP-10重组质粒IPTG诱导有mMIG,mIP-10表达;25℃下,IPTG质量浓度为0.2 mmol/L,转速为150 r/min,GST-MIG,GST-IP-10融合蛋白含量最高;上清经15%SDS-PAGE检测可提高目的蛋白纯度;采用Western blot检测融合蛋白,经GST柱纯化后可见融合蛋白条带.结论 GST-MIG,GST-IP-10融合蛋白原核载体可成功构建,具有高效表达特征,为制备抗体提供了良好条件.     

不同来源SOD蛋白的稳定性比较

纯化制备了来源于猪血的天然SOD,由大肠杆菌体系表达的PTD-SOD1以及由酵母体系表达的重组SOD和PTD-SOD2三种基因重组SOD蛋白,并从pH稳定性、温度稳定性、水浴时间稳定性和外源试剂耐受性几个方面对它们进行了比较.结果表明,重组SOD的稳定性总体上是最强的,PTD-SOD2次之,PTD-SOD1最弱,而天然SOD仅比PTD-SOD1稍强.     

AKT通过调控FASN的脂质代谢促进小鼠肝脏肿瘤的形成

使用尾静脉高压注射基因转染技术将不同质量AKT基因转染至FVB/N小鼠肝脏,探讨不同AKT表达量对AKT/Ras介导的小鼠肝癌发生发展的影响.随机将6周龄雌性FVB/N小鼠分为3组,对照组尾静脉高压注射空载体质粒,模型组A尾静脉高压注射75μg AKT、75μg Ras质粒,模型组B尾静脉高压注射150μg AKT质粒、75μg Ras质粒.并在小鼠造模后第2、4、6周处死小鼠,记录体质量并取肝脏组织称肝质量,检测血清ALT、AST水平,观察并记录肝癌生长情况.最后检测小鼠肝脏AKT、p-AKT、FASN和Ras的表达情况,并检测3组小鼠肝脏脂肪累积变化情况.结果显示,在2周时模型组A与模型组B小鼠血清中ALT和AST水平均呈不同程度的升高,提示有肝功能损伤,但两组间无显著差异.两模型组小鼠肝脏均形成肿瘤,但模型组A小鼠体质量、肝脏质量、肿瘤结节数量和大小明显低于模型组B小鼠.AKT基因可明显增加小鼠肝脏组织FASN的表达,并提高小鼠肝脏组织脂质累积量,促进小鼠肝癌的发生和发展.     

山丹黄参多糖对四氯化碳损伤小鼠肝形态结构和TNF-α表达的影响

研究山丹黄参多糖对四氯化碳(CCl4)致小鼠肝损伤的影响.对40只小鼠先灌胃山丹黄参多糖(12.5,25,37.5g·L-1)和等量的生理盐水,然后腹腔注射0.2%的CCl4橄榄油溶液,称量小鼠体重、肝重变化,解剖观察小鼠肝脏的形态变化,显微镜观察肝组织结构的变化,免疫组织化学法检测TNF-α在肝组织表达的变化.研究显示,CCl4组小鼠体重明显减轻(P0.01),肝重明显增大(P0.01),肝脏明显肿胀,肝表面粗糙,有大量脂滴附着,肝脏周围亦有脂状物堆积;肝组织结构不清,细胞炎性坏死,TNF-α蛋白阳性表达明显增强(P0.01);山丹黄参多糖各组与CCl4组相比体重显著或极显著增加(P0.05或P0.01),肝重明显减小(P0.05),肝脏肿胀明显减轻,肝形态正常,肝脏表面脂滴减少,肝组织结构清晰,TNF-α蛋白阳性表达明显减少(P0.01).结果表明,四氯化碳对肝组织有明显的损伤效应,山丹黄参多糖具有减少脂质沉着、抑制肝脏肿胀、促进肝脏机能稳定、抑制细胞过度凋亡等作用,能有效减轻四氯化碳对肝组织的损伤.     

Caveolin-1 在肝纤维化中作用的研究

摘要:目的 通过 10%四氯化碳( CCl₄ )橄榄油溶液,分别诱导野生型小鼠和小窝蛋白-1( Caveolin-1) 敲除小鼠建立肝纤维化模型,比较分析敲除 Caveolin-1 对肝损伤和胶原沉积的影响,揭示其在肝纤维化中的作用。 方法 按剂量 1 μL / g,腹腔注射野生型小鼠和 Caveolin-1 敲除小鼠 10% CCl₄ 橄榄油溶液,2 次 / 周。 注射后,1、3、7、14 和 28 d,分 别处死 5 只小鼠,取血清和肝脏,通过苏木素-伊红( HE) 染色、血清谷丙转氨酶( ALT) 和谷草转氨酶( AST) 水平检测,分析肝脏损伤程度;利用天狼猩红染色、Real-time PCR 及 Western blot 方法,观察肝脏胶原沉积及肝纤维化标志物 α 平滑肌肌动蛋白( α-SMA) 、Ⅰ 型胶原蛋白( collagen-Ⅰ )和Ⅲ 型胶原蛋白( collagen-Ⅲ ) mRNA 及蛋白表达水平, 分析肝纤维化程度。 结果 与野生型小鼠相比,造模后 3 d,敲除小鼠的血清 ALT 和 AST 含量显著升高( P<0. 01) ;3、7 和 14 d,敲除小鼠肝脏坏死面积显著增大( P<0. 01 或 P<0. 05) ;7、14 及 28 d 时,敲除小鼠胶原染色面积明显增多( P<0. 01 或 P<0. 05) ;肝星状细胞活化标志物 α-SMA mRNA 水平在 3 d 和 14 d 时显著升高(P<0. 05),collagen-Ⅰ和collagen-Ⅲ mRNA 在 14 d 时显著上调(P<0. 01);14 d 时,敲除小鼠肝脏 α-SMA、collagen-Ⅰ及 collagen-Ⅲ 蛋白表达水平均显著升高( P<0. 01 或 P<0. 05) 。 结论 Caveolin-1 抑制 CCl₄ 诱导的小鼠肝脏炎性损伤及纤维化。     

红菇多糖对小鼠肝脏衰老的抑制效果

研究红菇多糖对衰老昆明小鼠肝功能衰退的抑制作用。使用D-半乳糖建立衰老模型,并在此期间给予75mg/L与150mg/L红菇多糖饮水。8周后断颈处死,检测肝指数、血清和肝组织的谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量,同时对肝组织Ca²⁺-ATPase活性及形态学进行分析。结果表明,8周内给予红菇多糖150mg/L饮水时,小鼠肝指数、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性得到显著提高,丙二醛含量显著下降,小鼠肝功能衰退得到了显著抑制(p＜0.05),肝脏的衰老及损伤也得到了有效抵制。     

可跨膜SOD对肝癌及正常肝细胞增殖的作用

可跨膜融合蛋白PTD-SOD与肝癌细胞和正常肝细胞共培养,使细胞内SOD活力分别增加了52%和23%,提高胞内总抗氧化能力(T-AOC)水平达100%,同时降低ROS水平.实验结果显示,肝癌细胞增殖受到显著抑制,最高抑制率达91.91%,对正常肝细胞抑制率较小,为45.50%.     

中药材玫瑰花抗氧化及作用机制的研究

采用测定红细胞溶血抑制率、肝组织匀浆脂质过氧化产物，超氧化物歧化酶(SOD)活性测定方法和现代分子生物学技术RT-PCR基因扩增法检测中药材玫瑰花(F21)对小鼠(SAM-P／8)体内抗氧化作用，并探讨抗氧化作用机制．经过体内实验，F21对不同月龄小鼠的抗氧化效果不同，对8月龄以上的小鼠抗氧化作用效果显，同时明显提高了SOD基因的表达量．结果表明F21对衰老的鼠不仅在组织水平上和细胞水平上有显的抗氧化作用，而且在分子水平上能提高基因表达量．F21含有高效抗氧化成分，是一种良好的天然抗氧化剂，具有进一步研究价值．     

二乙基亚硝胺诱导小鼠肝纤维化动态模型的建立及病理机制初探

摘要:目的 为 探 究 肝 纤 维 化 的 发 生 发 展 机 制 及 病 理 病 因 的 特 点, 本 研 究 通 过 建 立 二 乙 基 亚 硝 胺( diethylnitrosamine,DEN)诱导的肝纤维化动态小鼠模型,动态监测上述小鼠模型的血清生化指标,推断肝纤维化阶段。 方法 雄性 C57BL / 6 小鼠按梯度剂量每周 2 次腹腔注射 DEN,连续 8 周。 分别在第 2、4、6 和 8 周收集小鼠的血清和肝组织,通过检测相应血清生化指标、肝组织羟脯氨酸含量以及组织病理学检查监测和评估小鼠肝纤维化的发病进程。 采用 Western blot 检测 TGF-β1、α-SMA 和 TLR4 / MyD88 / NF-κB 信号通路相关蛋白以探究肝纤维化的发病机制。 结果 从第 4 周开始,与 对 照 组 相 比, DEN 诱 导 小 鼠 的 肝 功 能 相 关 血 清 生 化 指 标 ( AST、 ALT、 ALP、T-BIL、A / G 等)出现显著变化,且体质量出现明显下降。 肝脏指数出现明显下降,组织中羟脯氨酸含量均显著升高(P<0. 01) ,组织病理学结果显示 DEN 诱导组小鼠肝组织开始出现轻微胶原沉积。 Western blot 结果表明模型组小鼠肝组织中TGF-β1 和 α-SMA 表达显著上调,TLR4、MyD88、TRAF6 及细胞核 NF-κB p65 蛋白表达水平显著升高,细胞质 p65 NF-κB 表达显著下调。 结论 研究结果表明,肝纤维化的发生机制与肝损伤后激活 TLR4 / MyD88 / NF-κB 信号通路相关,而 TLR4 炎症通路的激活又进一步促进分泌 TGF-β1 并激活肝星状细胞从而导致大量细胞外基质沉积。 本研究表明,通过 DEN 诱导的小鼠肝纤维化发病机制可能与炎症相关,且可通过结合多个血清生化指标初步判断肝纤维化阶段。     

联苯双酯和齐墩果酸对 ANIT 致小鼠、大鼠 肝损伤的作用研究

摘要: 目的 观察联苯双酯和齐墩果酸对异硫氰酸-1-萘酯(α-naphthyl isothiocyanate,ANIT)橄榄油溶液致肝损伤小 鼠、大鼠的保 护 作 用。方 法 先 给 予 小 鼠、大鼠联苯双酯和齐墩果酸,然 后 对 小 鼠、大鼠分别灌胃给以 100 mg·kg － 1 、80 mg·kg － 1 ANIT 造成肝损伤,48 h 后测其空腹血清中的 ALT、AST、TBIL、DBIL、GGT、ALP,并剖取肝、 脾,称湿重,计算其脏器指数。结果 齐墩果酸具有降低小鼠 ALT、AST 和 TB 值,联苯双酯反而增加小鼠 ALT、AST 和 TB 值。联苯双酯具有降低大鼠 ALT、AST 和 ALP 值,齐墩果酸则不降低大鼠 ALT 和 AST 值。结论 齐墩果酸 对 ANIT 致肝损伤小鼠具有保肝作用,联苯双酯对 ANIT 致肝损伤大鼠具有保肝作用。     

SMND-309对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

为探索SMND-309对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能的保护机制,将昆明小鼠50只随机分为5组,连续7d分别腹腔注射不同剂量的SMND-309,然后腹腔注射CCl4造成急性肝损伤,24h后采血并处死动物,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性、总胆红素(TBIL)含量,肝组织匀浆液中丙二醛(MDA)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和抗氧化酶活性;同时进行肝组织病理学观察.结果发现,与模型组相比,SMND-309给药组血清中ALT、AST、ALP活性和TBIL含量显著降低,肝组织匀浆MDA含量显著减少,GSH含量不同程度的升高;抗氧化酶包括超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GPx),谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性显著升高.病理切片表明SMND-309给药组肝损伤不同程度的减轻.这些结果表明SMND-309对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有很好的保护作用,其作用机理可能与SMND-309的抗氧化活性有关.     

小鼠四氯化碳急性肝损伤模型稳定性初探

目的:探讨CCL4小鼠肝损伤模型的稳定性.方法:采用一次性的腹腔注射不同剂量的CCL4花生油,在注射后所致肝损伤.不同时间检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量.结果:以10mL/kg的剂量按体重腹腔注射CCL4花生油(0.12%)13h后,检测的指标值离散度较小;血清中ALT、AST及肝组织的MDA含量有所升高,而肝组织的SOD降低.结论:以10mL/kg的剂量按体重腹腔注射CCL4(0.12%)在13h后检测的模型组较稳定.     

温胆汤对高脂血症大鼠及小鼠体内脂质代谢调节机理研究

目的 :探求温胆汤对实验动物体内脂质代谢调节作用的机理。方法 :采用腹腔注射蛋黄乳剂的方法建立急性高脂血症小鼠模型 ,观察温胆汤对急性高脂血症成年小鼠粪便脂质含量、血清总胆固醇 (TC)、血清总甘油三酯 (TG)、低密度胆固醇 (LDL c)含量、血清丙二醛 (MDA)含量、血清超氧化物歧化酶 (SOD)活性、肝脏总脂解酶(LA)活性、脂蛋白脂肪酶 (LPL)活性和肝脂酶 (HL)活性的影响 ;建立大鼠高脂血症模型 ,观察温胆汤对大鼠血脂(TC、TG)水平、总脂解酶 (LA)、脂蛋白脂酶 (LPL)和肝脂酶 (HL)活性 ,以及肝脏低密度脂蛋白受体 (LDLR)基因表达的影响。结果 :温胆汤可降低小鼠粪便脂质含量 ,显著降低急性高脂血症小鼠血清TC、TG、LDL c含量 (P <0 .0 5 ) ,温胆汤还可提高血清SOD活性 ,降低MDA含量 ,达到降低体内脂质过氧化程度的目的。同时 ,温胆汤可提高肝脏脂蛋白脂肪酶 (LPL)活性和肝脏总脂解酶 (LA) ,但对肝脂酶 (HL)活性无明显影响。在针对高脂血症大鼠的实验研究中发现 ,温胆汤能够显著抑制大鼠血清总胆固醇 (TC)、血清总甘油三酯 (TG)浓度 ,提高脂蛋白脂酶(LPL)和总脂解酶 (LA)活性 ,但对肝脂酶 (HL)活性无明显影响 ;逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)实验显示高脂饲料能显著降低大鼠肝脏LDLRmRNA水平 ,温胆汤能显?