金钗石斛VRN1-like基因的克隆及其表达分析

用20mg/L的噻重氮苯基脲（thidiazuron,TDZ）处理金钗石斛（Dendrobium nobile）成株叶片,观测其对开花的影响;以金钗石斛类原球茎为材料,通过同源克隆分离其VRN1-like同源基因,利用半定量RT-PCR分析细胞分裂素对该基因在腋芽和类原球茎中表达的影响. 结果表明,喷施TDZ可以代替低温处理诱导金钗石斛开花;通过同源克隆得到了金钗石斛VRN1-like基因DnVRNA的全长cDNA. 该cDNA编码的蛋白与高羊茅（Festuca arundinacea）和小麦（Triticum monococcum）中VRN1蛋白的氨基酸序列一致性分别为63%和62%. 半定量RT-PCR结果表明,DnVRNA在腋芽中的表达受TDZ的促进,而在类原球茎中,其表达也受到细胞分裂素和低温的诱导,暗示该基因可能参与细胞分裂素替代低温诱导金钗石斛成花的生物学过程.     

黔产金钗石斛茎和花中浸出物测定

目的:测定黔产金钗石斛茎和花中浸出物的含量。方法:按照2015版《中国药典》四部(通则2201)浸出物测定法项下,对水溶性和醇溶性浸出物测定法中的冷浸法和热浸法进行实验,优选金钗石斛的最佳浸出物测定法,并对金钗石斛茎和花的浸出物进行测定。结果:金钗石斛的浸出物测定以醇溶性热浸法为佳,溶剂为20%乙醇。不同采收月份的金钗石斛茎中浸出物的含量以2月份平均含量最高,为35.14%,8月份平均含量最低,为16.29%;不同生长年限的金钗石斛茎中浸出物的含量:一年生三年生二年生,其中一年生者浸出物含量为27.33%。不同干燥方式的金钗石斛花中浸出物的含量:阴干60℃烘干30℃烘干晒干。结论:黔产金钗石斛浸出物测定实验结果表明,2月份采收一年生金钗石斛茎质量最佳,金钗石斛花的干燥方法以阴干最好。     

气相色谱法测定金钗石斛中石斛碱的含量

目的:测定贵州不同产地金钗石斛中石斛碱的含量。方法:采用气相色谱法,OV1701石英毛细管柱(30×0.32mm,0.25μm),以FID为检测器。结果:贵州赤水产金钗石斛的石斛碱含量最高,达0.259%,罗甸、兴义、独山产金钗石斛石斛碱含量分别为0.199%、0.09%和0.118%。结论:本实验建立的方法简便快捷,结果稳定,可作为中药金钗石斛中石斛碱含量测定的方法。     

液体悬浮培养诱导金钗石斛原球茎增殖的研究

以金钗石斛原球茎为实验材料,通过液体悬浮培养,研究金钗石斛原球茎的增殖和多糖成份积累进行了研究。结果表明:金钗石斛在B5培养基+1.0mg.L-1NAA,蔗糖浓度为3%,10%香蕉提取物上清液的液体培养基中增殖最佳,可溶性多糖成分累积相对较高。     

金钗石斛DnMSI1-like基因的克隆和表达分析

MSIL(MSI1-like)是一类在真核生物中保守的蛋白质,在动物和植物的发育过程中具有多种的功能.本研究从金钗石斛花芽中分离了一个MSIL蛋白的c DNA序列,长度为1 640 bp,含有一个长度为1 206 bp的开放阅读框;预测其编码的蛋白质在序列、结构域组织和空间结构上均与拟南芥At MSI1蛋白相似,故命名为Dn MSI1-like.Dn MSI1-like基因的表达具有明显的组织差异性,在金钗石斛的根、花和腋芽中表达较高,但在叶和假鳞茎中表达较低;低温处理时,花芽中Dn MSI1-like的表达急剧升高.研究结果为深入探索金钗石斛的生长发育如低温相关的开花调控机制提供基础.     

金钗石斛营养成分分析研究

采用国家标准分析法测定了贵州省赤水市龙泉原生态石斛产业实业有限公司所种植金钗石斛的营养成分。结果显示水分含量为84.45%、粗纤维含量为9.10%、蛋白质含量为0.94%、还原糖含量为1.13%、粗脂肪含量为0.12%,此外共测出12种氨基酸和8种无机元素。可以看出贵州省赤水市龙泉原生态石斛产业实业有限公司所种植金钗石斛含有丰富的蛋白质和氨基酸,并含有丰富的Ca、Mg、P等无机元素,具有较高的营养价值。     

合江金钗石斛发展分析和研究

正石斛又名吊兰花。合江石斛以其茎黄,酷似金钗,故名其为金钗石斛。据史料记载,合江县早在明代就已广泛栽培石斛,是石斛生产的传统产区,也是县道地中药材。自2013年始,县委县政府将金钗石斛列入县三大特色产业之     

3种药用石斛多糖的抗氧化活性比较研究

比较了铁皮石斛、大苞鞘石斛和金钗石斛3种石斛茎段粗多糖、精多糖（除蛋白多糖）和多糖组分（过层析柱多糖分离组分）对DPPH、OH和O-2 3种自由基的离体抗氧化活性. 结果表明:随着多糖纯度增强和质量浓度的提高，抗氧化效果均显著增强，在12 g/L时，处理效果最佳，铁皮石斛多糖组分（DOPP-I）、大苞鞘石斛多糖组分（DWPP-I）和金钗石斛多糖组分（DNPP-I）对DPPH自由基的清除率均在75%以上，对OH自由基的清除率在 84%以上，且显著优于Vc (Vitamin c)，但3种多糖组分间差异不显著；3种石斛多糖对O-2自由基的清除能力显著低于Vc，但DWPP-I的清除能力显著高于DOPP-I和DNPP-I. 总之，大苞鞘石斛多糖组分DWPP-I的抗氧化能力略优于铁皮石斛和金钗石斛.     

黔产道地金钗石斛不同部位多糖含量的测定

目的:通过正交实验对金钗石斛多糖提取条件与显色条件进行优化,确定最佳测定方法。方法:水提醇沉法作为提取方法;采用苯酚-硫酸法进行多糖测定。通过正交试验对提取条件、显色条件进行考察优选。结果:金钗石斛多糖回流提取最优条件为:加入石油醚10 mL回流提取1 h,过滤后挥干溶媒;再加入10 mL 80%乙醇回流1 h,过滤水浴挥干。加入150 mL蒸馏水沸腾后回流2 h。最佳显色条件为:加入苯酚1 mL、浓硫酸4 mL,于90℃水浴锅中加热15 min,取出试管后冰浴冷却5 min,在波长488 nm下进行检测。测得金钗石斛茎、花、叶中多糖含量平均值表现为茎叶花。结论:建立的方法操作简便合理、稳定性及精确度高,可适用于金钗石斛多糖含量的测定。金钗石斛茎、花、叶多糖含量测定结果,可为金钗石斛的开发利用提供参考依据。     

不同取代的2'-羟基查尔酮类化合物的抑菌活性测定与分析

为确定查尔酮类化合物的抑菌活性,合成了5种2'-羟基查尔酮类化合物,分别为N,N-二甲氨基-2'-羟基查尔酮,4-甲氧基-2'-羟基查尔酮,3-羟基-2'-羟基查尔酮,4-氯-2'-羟基查尔酮和2-氯-2'-羟基查尔酮。采用滤纸片扩散法测定分析了这些查尔酮类化合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果,同时考察了培养基和药液不同配比条件下的抑菌活性。结果表明,N,N-二甲氨基-2'-羟基查尔酮和4-甲氧基-2'-羟基查尔酮对大肠杆菌均有较好的抑菌性能,当药液浓度分别为12.50 mg·L-1和6.25 mg·L-1时抑菌环直径分别为21.26 mm和18.24 mm,分别比对照2'-羟基查尔酮的抑菌环直径提高了48.1%和61.4%;而3-羟基-2'-羟基查尔酮的抑菌性能次之,4-氯-2'-羟基查尔酮和2-氯-2'-羟基查尔酮的抑菌性能较差。而对金黄色葡萄球菌的抑菌效果以N,N-二甲氨基-2'-羟基查尔酮为最好,当药液浓度为25.00 mg·L-1时抑菌环直径为29.40mm,比对照2'-羟基查尔酮的抑菌环直径提高了57.9%,其它4种查尔酮抑菌效果较差。查尔酮A环不同位置连有不同基团时抑菌活性有着明显的差异,4-N,N-二甲氨基-2'-羟基查尔酮对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌性能均最强。