拟南芥Hsp40蛋白AtDjA5在大肠杆菌中的功能分析

通过分析大肠杆菌dnaJ缺失菌株在43℃下的生长表型, 发现AtDjA5及其J Domain能够功能性地替换DnaJ及其J Domain. 免疫共沉淀实验结果表明AtDjA5与DnaK存在相互作用. 由Western blot检测推测AtDjA5能够稳定大肠杆菌热激转录因子σ32并下调热激蛋白DnaK表达量. 这些发现说明AtDjA5在大肠杆菌中具有与DnaJ相似的功能.     

拟南芥 BAH1 与大肠杆菌热胁迫耐受的关系分析

拟南芥BAH1含有保守的C3H4型RING结构域,与DnaJ锌指结构类似.利用原核表达纯化的BAH1进行体外泛素化实验证明了BAH1具有E3连接酶活性.然后通过表型回复实验发现BAH1融合J-domain结构域后(JdBAH1)和DnaJ一样能明显弥补danJ突变株MF634的热敏表型,在43℃存活;而转入突变锌指结构的JdBAH1C231S,C234S,C276S,C279S(JdBAH1△Zn1/2)菌株在43℃高温条件下不能存活,说明BAH1在大肠杆菌内具有类似DnaJ锌指结构的功能.因此,BAH1在E.coli中的功能有可能与DnaJ相似,通过锌指结构参与了DnaK/DnaJ伴侣系统发挥功能.     

拟南芥AtTR1对AtCPK28和AtCPK32的体外泛素化修饰研究

为了研究E3连接酶AtTR1和非生物胁迫应答的相关蛋白AtCPK28、AtCPK32之间关系,本文构建原核表达载体pET28a-AtCPK28和pET28a-AtCPK32,并在大肠杆菌中表达了AtTR1、AtCPK28和AtCPK32重组蛋白,利用亲和层析纯化相应融合蛋白.将AtCPK28和AtCPK32蛋白分别加入含有ATP、泛素、E1、E2和AtTR1的体外泛素反应体系中,western blot检测到AtCPK28和AtCPK32有多聚泛素化条带,说明AtTR1在体外能多泛素化修饰AtCPK28和AtCPK32.结果表明AtCPK28和AtCPK32可能是AtTR1调控植物抗逆信号中的下游靶蛋白.     

热休克蛋白质DnaK的纯化及其二聚体性质研究

通过定点突变技术构建了两个DnaK蛋白质突变体,研究腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)和腺苷二磷酸(ADP)条件对热休克蛋白质DnaK二聚体性质的影响.首先诱导表达DnaK蛋白质的两个突变体DnaK-A303C和DnaK-H541C,并采用硫酸镍亲和层析和阴离子交换层析对重组蛋白质进行纯化.对等量的DnaK蛋白质进行氧化交联处理,然后采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测ATP、ADP对DnaK二聚体的影响.研究表明DnaK突变体在ADP的存在下以同二聚体的形式存在,但是在ATP条件下能够形成异二聚体.由此为深入认识热休克蛋白质两个亚基之间的协同作用提供了实验依据.     

烟草泛素化相关基因NbRGLG2和NbUBXN6负调控SRC7而影响植物抗性

泛素化修饰是一种蛋白质降解调控的重要途径,而E3泛素连接酶是泛素化系统的关键组分,结合并决定靶标蛋白。前期研究中从大豆中克隆了一个广谱抗病基因SRC7(SMV resistance cluster 7),其主要功能结构域是TN(TIR-NBS)结构域。本氏烟草(Nicotiana benthamiana)中两个编码泛素相关的蛋白NbRGLG2和NbUBXN6均与SRC7^TN具有互作。瞬时表达实验中NbRGLG2与NbUBXN6对SMV和TMV无抗性。然而,NbRGLG2与NbUBXN6与SRC7^TN共表达时,都会抑制SRC7^TN的抗病毒活性。过表达SRC7(Ox-SRC7)本氏烟草中沉默NbRGLG2基因和NbUBXN6基因时,它们可以增强SRC7^TN对SMV和TMV的抗性。这些结果显示,NbRGLG2与NbUBXN6负调控SRC7的抗病毒活性。     

桑泛素基因的克隆和表达

根据桑(Morus bombycis)泛素基因编码区的序列(DQ839402.)设计特异引物,用RT - PCR方法克隆桑泛素基因的编码区.序列分析表明,该编码区长240 bp,编码79个氨基酸,软件分析推测编码蛋白的相对分子量和等电点分别为8.74 kD和7.16.通过同源建模获得了桑泛素基因编码蛋白的理论三维结构.将桑泛素基因与pET - 32a(+)连接,构建原核表达载体pET - 32a - ub,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3) 中获得高效表达,并经western bolt 印迹证明实现了原核表达,为进一步研究其作用机理奠定基础.     

溴氰菊酯胁迫下小菜蛾泛素化蛋白的分析与鉴定

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western Blot和LC MS/MS技术,对在溴氰菊酯胁迫下的小菜蛾(Plutellaxylostella)四龄幼虫的泛素化蛋白(Ubiquitinated protein)的组分进行分析,结果表明小菜蛾溴氰菊酯敏感品系与小菜蛾溴氰菊酯抗性品系里的泛素化蛋白表达量有显著差异.本实验成功证明了在药剂胁迫下小菜蛾泛素化蛋白存在表达上的差异,该研究结果为分析昆虫细胞中泛素的功能及其对昆虫生理、生化和环境胁迫等方面的调节作用提供了参考.     

大肠杆菌系列融合表达载体的构建

许多异源蛋白在大肠杆菌内的表达是以不可溶、无生物学活性的包涵体形式存在,这为蛋白质的功能研究带来困难.融合表达是提高蛋白可溶性的有效方案之一.为构建通用型融合表达载体,本研究将5种常见的融合标签即突变型麦芽糖结合蛋白(mMBP)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、翻译起始因子(IF2-I)、氮源利用物质A(NusA)和谷胱甘肽转移酶(GST)以及3种伴侣蛋白(GroEL、DnaK和TF)分别克隆至pET30a(+),构建了系列融合表达载体.这些载体含有相同的克隆位点以及位于融合标签羧基端的烟草蚀刻病毒蛋白酶(TEV)的酶切位点.N-乙酰-D-葡萄糖胺2-异构酶基因hRnBP克隆到mMBP融合表达载体后,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测表明融合蛋白均得到了高效表达且几乎完全可溶,TEV酶切获得了预期的带型.全细胞偶联生成N-乙酰-D-神经氨酸实验发现mMBP-hRnBP的摩尔转化率较无mMBP标签的体系提高了近60%,证明了融合表达载体中融合标签的适用性.新型的原核融合表达载体为蛋白的融合表达、分离纯化及功能研究提供了更多的选择.     

小麦TaUBC基因泛素结合酶活性分析

已报道的RNA水平研究表明TaUBC可能是小麦产量相关基因,生物信息学分析显示该基因属于泛素结合酶家族.荧光定量PCR显示TaUBC在小麦根茎叶中均有表达.为了验证TaUBC蛋白是否具有泛素结合酶活性,本文利用原核系统表达野生型TaUBC及三种点突变TaUBC~(C21S)、TaUBC~(C85S)、TaUBC~(C107S)蛋白,并对这些蛋白进行体外泛素化活性分析.结果证实TaUBC是一个有活性的泛素结合酶.另外,点突变C85S使得TaUBC丧失E2活性,C21S和C107S则对活性没有影响,证明其UBC结构域中第85位Cys是结合泛素的关键作用位点.     

卡明斯诗歌的变异

所谓变异,就是不符合语言的常规。诗人为了各种目的经常可以不受习惯用法的约束,大胆创新,这就导致他们突破语言的常规,形成各种各样的变异。美国现代诗人卡明斯(e.e.cummings)大量应用变异的手法,写了很多独具一格、他自称为“画诗”(poempicture)的奇特的诗,因此要读懂就必须理解其中的变异手法。本文从书写和版面、语法、词汇这3个方面的变异来分析和欣赏他的诗歌。     

卡明斯的魔幻语言变异——卡明斯诗歌文体分析

本文从文学文体学的视角,对美国现代主义诗人伊.伊.卡明斯诗歌语篇中语义、词汇、语法、书写等语言变异技巧进行分析,从而探索卡明斯诗歌的语言特征、创作风格及文学意义。卡明斯既继承了传统诗歌的表达理念,又打破了传统中那些陈腐和平庸的清规戒律和表达模式。他创造了让人耳目一新的魔幻式的语言变异的技巧,展露了诗歌语言的独一无二的实验和革新。     

浅谈英汉互译中的文化障碍

翻译是一种跨语言、跨文化的交际活动。在翻译过程中,不仅原语与目标语语言上的差异会给译者带来困难,而且原语文化同目标语文化的差异也会给译者造成障碍。分析了英汉互译过程中英汉文化的差异给译者在词汇、表达、语篇层面上带来的障碍。     

电子目录在电子商务中的设计应用及实现实例

在分析了国内外现有的电子目录的基础上,阐述了狭义电子目录和广义电子目录的概念,对现有电子目录的类别、功能特性进行了介绍,总结了电子目录设计所涉及的技术,并以上海第一家大型网上购物商店——亿祥购物的电子目录开发为实例,介绍了建立基于OODB——JASMINE上的电子目录的方法.     

关于B(E→E1)的一个性质

证明了如下结论:当B(E→E1)可分时,那么赋范线性空间E与E1均是可分的．     

Dn,E6,E7,E8型完备例外序列的个数

利用垂直范畴和倾斜理论，给出了Ｄｎ、Ｅ６、Ｅ７、Ｅ８型完备例外序列的个数的计算公式．     

Cesp(E1,E2)的k一致凸性

文章讨论了Banach空间的k一致凸性在cesp(E1，E2)中的提升问题。     

关于cesp(E1,E2)的k一致凸性

讨论了Banach空间的k一致凸性在cesp(E1,E2)中的提升问题.提出对于若干个Banach空间的cesp乘积,当每个空间具有某种性质时,诸空间的某种性质并不能提升到其乘积空间上去.并举例指出,对k≥2,两个k一致凸区间的cesp乘积并不是k一致凸的.证明了,若Banach空间E1是k1一致凸的,E2是k2一致凸的,则其cesp乘积是(k1+k2-1)一致凸的.