鼻咽癌旁原位癌的病理学研究

作者采用组织学、显微镜光度计和免疫组织化学的方法,描述了鼻咽癌旁原位癌的组织病理学特征及其在肿瘤组织发生和演进中的作用. 作者将鼻咽癌旁原位癌分为柱状和鳞状两型,比较了它们各自的组织学和细胞学特点. 本文认为:在浸润性鼻咽癌出现之前已经发生了一系列的改变,而原位癌则是癌症的组织发生和肿瘤演进过程中关键性的一步.已呈异型性改变的储备细胞或未分化中间细胞恶变为原位癌细胞;然后在未知因素的影响下,原位癌细胞呈侵袭性而形成浸润性鼻咽癌.     

活检组织中所见的鼻咽粘膜上皮

作者根据两万多例鼻咽活检的镜下所见,简要地概述了鼻咽粘膜上皮的结构和细胞类型,作为病理工作者诊断和研究鼻咽癌的基础.绝大部分鼻咽粘膜上皮属柱状型,它由纤毛柱状细胞、粘液细胞、间介细胞和基底细胞所组成。文章中详细地描述了它们的细胞学和粘液细胞化学.大多数鼻咽粘膜腺体是浆液-粘液腺.文章阐述了它们的结构及其所分泌的粘液物质的特性。     

太平洋革囊星虫消化道粘液细胞的类型和分布

首次利用阿新兰和过碘酸雪夫氏反应(AB-PAS)染色法对星虫动物消化道粘液细胞的类型和分布进行了研究.根据AB-PAS染色结果,太平洋革囊星虫(Phascolosoma pacificum Keferstein)消化道粘液细胞可分为Ⅰ—Ⅳ型,分别呈红色、蓝色、紫红色和蓝紫色;粘液细胞主要分布于消化道上皮,除降肠下段外,消化道各段均有粘液细胞分布,但不同部位粘液细胞的类型和密度不同.咽粘液细胞丰富,四种类型均有,以Ⅳ型为主;食道粘液细胞由前向后减少,以Ⅳ型为主;降肠上段粘液细胞丰富,以Ⅱ、Ⅳ型为主;升肠下段仅有少量的散在分布的Ⅰ型粘液细胞,上段粘液细胞增多,以Ⅱ型为主;直肠粘液细胞最为丰富,整个上皮均为Ⅱ型粘液细胞.     

PCR和原杂交技术检测鼻咽癌石蜡组织中HHV-6DNA

为了解人疱疹病毒６型（ＨＨＶ－６）与鼻咽癌（ＮＰＣ）的可能关系，检测了ＮＰＣ发生不同阶段的石蜡组织中ＨＨＶ－６ＤＮＡ的存在情况。方法：采用ＰＣＲ、斑点杂交和原位杂交技术，共检测了４２例鼻咽癌石蜡组织、２１例鼻咽癌前病变石蜡组织和２７例正常鼻咽石蜡组织ＨＨＶ－６ＤＮＡ的存在情况。结果：通过ＰＣＲ扩增，在４２例ＮＰＣ组织中检出１３例存在ＨＨＶ－６ＤＮＡ，占３１％；２１例鼻咽癌前病变组织中１例阳性（４７％），而２７例正常鼻咽组织中无一例阳性。斑点杂交的结果表明ＰＣＲ扩增是ＨＨＶ－６特异的。原位杂交发现，在１３例ＰＣＲＨＨＶ－６阳性的ＮＰＣ组织中１１例ＨＨＶ－６ＤＮＡ阳性。ＨＨＶ－６ＤＮＡ主要分布于癌巢的肿瘤细胞核内，少数亦可见于癌旁的异型细胞，但在淋巴细胞及正常上皮细胞内未发现阳性信号。结论：本实验用分子生物学技术首次证明，在中国ＮＰＣ患者的鼻咽石蜡组织中存在ＨＨＶ－６。ＨＨＶ－６与ＮＰ相关，并有可能在ＮＰＣ的癌变过程中起一定的作用     

hNIS转基因介导131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG.采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况.CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况.结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS.CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8 min.131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01).结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

EGFR在鼻咽癌临床分期中的作用

目的探讨EGFR在鼻咽癌临床分期中的作用。方法将鼻咽未分化非角化癌60例及鼻咽良性病变(慢性鼻咽炎及腺样体组织)30例的病理组织,利用免疫组化二步法检测其中EGFR的表达情况,结果经IPP6.0进行图像分析,并将检测结果与临床病理特征进行综合分析。结果 EGFR在鼻咽癌及慢性鼻咽炎病理组织中,都存在EGFR的表达,并在鼻咽未分化非角化癌组织中高表达,其MOD(EGFR)与鼻咽良性病变组织相比,存在显著性差异(p=0.0040.01),并且MOD(EGFR)与鼻咽癌的临床分期存在正相关性,相关系数0.786,鼻咽癌组织EGFR的表达与T分期正相关,相关系数0.722,与N分期存在一定相关性,N2与N3之间MOD(EGFR)无显著性差异(p0.05),剩余组间比较均有统计学意义(p0.05),并且MOD(EGFR)随着N分期的升高,有逐渐升高的趋势,但N分期与MOD(EGFR)的相关系数仅为0.250;结论在鼻咽癌及鼻咽良性病变病理组织中,都存在EGFR的表达,但在鼻咽癌组织中高表达,EGFR表达可能与鼻咽癌肿瘤细胞增殖活跃度密切相关;鼻咽病理组织中EGFR的免疫组化测定作为一种判断鼻咽肿瘤细胞增殖情况的指标,在临床中值得推广     

PCR和原要交技术检测鼻咽癌石蜡组织中HHV—6DNA

目的：为了解人疱疹病毒６型（ＨＨＶ－６）与鼻咽癌（ＮＰＣ）的可能关系，检测了ＮＰＣ发生不同阶段的石蜡组织中ＨＨＶ－６ＤＮＡ的存在情况。方法：采用ＰＣＲ、斑点杂交和原位杂交技术，共检测了４２例鼻咽癌石蜡组织、２１例鼻咽癌前病变石蜡组织和２７例正常鼻咽石蜡组织ＨＨＶ－６ＤＮＡ的存在情况。结果：通过ＰＣＲ扩增，在４２全ＮＰＣ组织中检出１３例存在ＨＨＶ－６ＤＮＡ，占３１％；２１例鼻咽癌前病变组织中１例阳性     

萍乡肉红鲫肠道粘液细胞类型及分布研究

目的探讨萍乡肉红鲫肠道粘液细胞的类型和分布。方法利用阿利新蓝-过碘酸雪夫氏试剂法(AB/PAS)观察萍乡肉红鲫肠道粘液细胞。结果萍乡肉红鲫肠道粘液细胞分4种类型。Ⅰ型:呈红色;Ⅱ型:呈蓝色;Ⅲ型:呈紫红色;Ⅳ型:呈蓝紫色。肠道中粘液细胞的分布密度后肠最高,其次是中肠,前肠最低。结论萍乡肉红鲫各型粘液细胞在各肠段的分布密度与各肠段功能密切相关。     

Cyclin D1与p21WAF1在鼻咽癌中的表达

目的探讨鼻咽上皮癌变过程中周期蛋白CyclinD1与抑癌基因p21（wild—type p53 activated fragment 1,p21wAF1）蛋白的表达及其意义。方法应用免疫组化方法检测47例鼻咽癌组织、21例癌旁上皮组织和14例正常鼻咽粘膜中Cyclin D1与p21WAF1蛋白表达。结果从鼻咽正常粘膜、癌旁粘膜上皮组织到癌组织,Cyclin D1表达阳性率逐渐增加,并且差异有显著意义（均为P〈0．05）。p21WAF1蛋白在以上组织中阳性率较高,且各组间差异无显著性。结论Cyclin D1、p21WAF1蛋白与鼻咽部上皮细胞恶性增生密切相关,p21wA兀蛋白表达可能与细胞周期调控的反馈机制有关。     

化香树果序醇提物诱导人鼻咽癌CNE1/2细胞发生巨泡式死亡的机制

目的:研究化香树果序醇提物(EPS)诱导鼻咽癌细胞CNE1/2发生巨泡式死亡的机制及对荷鼻咽癌转移瘤裸鼠的抑瘤作用.方法:采用MTT实验及平板克隆形成实验检测EPS对CNE1/2细胞活性及增殖的影响.设计荧光示踪实验,设置空白组、荧光黄处理组、荧光黄+EPS处理组、荧光黄+EPS+细胞松弛剂处理组,在荧光显微镜下观察细胞的形态变化并采用流式细胞分析仪分析细胞荧光值.蛋白免疫印迹法检测c-fos、ARF6、DUSP1、p-DUSP1、ERK1/2、p-ERK1/2等蛋白表达水平.使用小分子c-fos抑制剂T-5224及DUSP1抑制剂BCI分别处理细胞并孵育24 h后观察细胞形态的变化,进一步在倒置显微镜下观察EPS处理过表达ARF6及c-fos的鼻咽癌细胞后细胞的形态变化,并在蛋白水平进行验证.最后通过荷鼻咽癌移植瘤裸鼠模型,研究EPS在体内的抑瘤作用,瘤组织免疫组化研究相关蛋白在瘤组织中的表达差异.结果:EPS能明显抑制CNE1/2细胞的活性及增殖(P0.05).荧光黄+EPS处理组与荧光黄+EPS+细胞松弛剂组相比,结果无统计学差异,使用细胞松弛剂并不减少细胞对荧光示踪剂的摄取.与对照组相比,p-ERK1/2、c-fos、p-DUSP1蛋白表达明显下降.使用c-fos及DUSP1抑制剂后,巨泡式死亡现象消失,过表达ARF6及c-fos也能逆转液泡在细胞内集聚.体内实验显示EPS能抑制荷鼻咽癌移植瘤裸鼠肿瘤的生长,实验组瘤组织中c-fos、p-DUSP1表达与对照组相比下降,与体外细胞实验结果一致.结论:EPS在体内外均有明显抗肿瘤作用,并通过抑制ARF6/ERK1/2/c-fos通路和DUSP1磷酸化诱导人鼻咽癌CNE1/2细胞发生巨泡式死亡.     

Epstein-Barr virus latent membrane protein inhibits human epithelial cell differentiation

Epstein-Barr virus (EBV), a human herpesvirus, is strongly linked with two relatively rare forms of B-cell lymphoma and with a much more prevalent epithelial malignancy, undifferentiated nasopharyngeal carcinoma (NPC). The availability of suitable culture systems has allowed detailed analysis of EBV-induced growth transformation in B lymphocytes, but little is known about the virus--epithelial cell interaction or about the possible effector role of viral proteins in the pathogenesis of NPC. Here we describe an experimental system to monitor the effects of introduced viral or cellular genes upon human epithelial cell growth and differentiation. We transfected a human epithelial cell line, which retains several features of normal keratinocyte behaviour in vitro, with the EBV gene encoding latent membrane protein (LMP), one of only two viral proteins known to be expressed in NPC cells in vivo. LMP expression was accompanied by changes in the epithelial cell surface phenotype, mimicking surface changes observed in NPC cells, and by severe impairment of the cellular response to differentiation signals. The ability of LMP to inhibit terminal differentiation indicates a mechanism whereby EBV infection of squamous epithelium could contribute to the multi-step pathogenesis of NPC.     

CDK16在食管鳞癌中的表达及其对肿瘤发生发展的影响

目的研究发现,细胞周期素依赖性激酶(cyclin dependent kinases,CDKs)家族成员与食管鳞癌的发病密切相关,但细胞周期素依赖性激酶16(CDK16)对食管鳞癌发病的影响尚不清楚.本研究旨在探讨CDK16在人食管鳞癌组织中的表达及生物学意义.方法应用组织芯片技术结合免疫组织化学技术检测45例食管鳞癌组织、45例癌旁组织中CDK16蛋白的表达情况,并使用统计分析软件研究CDK16蛋白的表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系.结果 CDK16在食管鳞癌组织中呈阳性表达,且表达强度与肿瘤分化程度呈负相关.另外,CDK16在食管鳞癌细胞中的表达位置与肿瘤的分化程度紧密相关.CDK16的表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移及TNM临床分期均具有显著的相关性(P<0.05),而与患者的年龄、性别以及肿瘤的部位、最大径、病理形态没有显著的相关性(P>0.05).结论 CDK16在食管鳞癌中的高表达与食管鳞癌的发生发展及转移密切相关.检测CDK16的表达有助于食管鳞癌的临床诊断和预后评估.     

抗爪蟾角蛋白单克隆抗体的研究

本实验以非洲爪蟾(Xenopus laevis)成体皮肤角蛋白免疫的BALB/c鼠脾细胞与小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG的作用下进行融合,经HAT选择培养、ELISA筛选、反复克隆化及冻存复苏,获得四株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。对其中一株杂交瘤细胞KD_(10)及其分泌的抗体进行了较全面的研究。     

卵巢成熟性囊性畸胎瘤伴中-低分化鳞癌1例并文献复习

目的：探讨卵巢成熟性囊性畸胎瘤伴鳞状细胞癌的病理学诊断及鉴别诊断。方法：分析1例卵巢成熟性囊性畸胎瘤伴鳞状细胞癌临床资料、影像学特征及病理学特征并进行文献分析。结果：巨检见灰白灰褐色囊状肿物,18cm×llcm×7cm,囊内含脂质与毛发,可剥离,囊壁较光滑,未见液体及黏液成分。囊内一侧见4cm×3cm灰白色实性区域,切面灰白色、质脆。镜下肿瘤囊壁内衬鳞状上皮,囊壁内见皮脂腺及毛囊;可见散在的核大深染的呈弥漫排列的细胞,核仁不明显,部分细胞呈梭型,多次取材发现小片状分化的鳞状细胞癌癌区,其中可见细胞内角化、细胞间桥及角化珠。免疫组化染色结果：CK5／6及PCK：恶性肿瘤细胞阳性表达。病理诊断：卵巢成熟性囊性畸胎瘤伴中一低分化鳞状细胞癌。结论：卵巢成熟性囊性畸胎瘤伴鳞状细胞癌是一种少见的高度恶性肿瘤,患者年龄及绝经年龄、肿瘤的大小、规范的病理学检查及特征性的免疫组化标记有助于其病理学诊断及鉴别诊断。     

94例肺癌CT征象分析

目的：探讨肺鳞癌、肺腺癌的ＣＴ鉴别要点。方法：对５１例肺鳞癌及４３例肺腺癌的ＣＴ表现进行回顾性分析。结果：鳞癌７０．６％为中央型,２９．４％为周围型;腺癌４．７％为中央型,９５．３％为周围型。１５例周围型肺鳞癌均表现为肿块,而４１例周围型肺腺癌中,５例为局灶性实变,３例为两肺弥漫性实变与结节。在周围型肺癌中,肺腺癌肿块的毛刺征、胸膜凹陷征、小泡征及早期远处转移多见,三级支气管受累少见;而鳞癌的三级     

口腔鳞状细胞癌组织特征长链非编码RNA(lncRNA)中CCAT2的表达及作用分析

目的 分析口腔鳞癌组织特征长链非编码RNA(lncRNA)表达谱,探讨结肠癌相关转录子2(CCAT2)的表达及作用.方法 使用高通量lncRNA芯片检测5例口腔鳞癌患者的癌组织及癌旁正常口腔黏膜组织lncRNA表达水平,分析特征性lncRNA表达谱;应用RT-qPCR检测74例口腔鳞癌组织及癌旁组织中CCAT2表达水平,分析其与临床病理特征的关系;CCK8法检测CCAT2干预细胞增殖的能力,检测CCAT2-siRNA感染序列靶向转染人舌鳞状细胞癌cal27细胞株.结果 5例癌组织和对应的癌旁组织的差异表达谱共检出1 572个差异具有统计学意义的lncRNA,其中882个lncRNA表达上调,690个表达下调;19个lncRNA差异表达倍数≥10,其中11个表达上调,8个表达下调;CCAT2上调最明显.进一步对74例口腔鳞状细胞癌组织行RT-qPCR检测,癌组织中CCAT2的相对表达量高于正常组织,差异具有显著统计学意义(P<0.01).Ⅲ+Ⅳ期患者CCAT2相对表达量高于Ⅰ+Ⅱ期患者,肿瘤低分化组CCAT2相对表达量高于中高分化组,差异均具有统计学意义(P<0.05).cal27细胞转染CCAT2 siRNA1,siRNA2,siRNA3后,CCAT2的相对表达量均低于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).其中以siRNA2下降幅度最明显,因此,选用CCAT2-siRNA2进行细胞增殖实验.CCK8检测显示:转染48h后细胞增殖水平低于阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 lncRNA在口腔鳞状细胞癌组织中存在异常表达,其中CCAT2表达上调与口腔鳞状细胞癌的发生、发展有关.     

食管鳞癌淋巴结转移的蛋白质组分析

分析食管鳞癌转移淋巴结中鳞癌细胞与食管鳞癌组织中鳞癌细胞的蛋白质的表达差异,获取鉴别两者的分子标志物。用激光捕获显微切割技术分离出食管鳞癌转移淋巴结和食管鳞癌组织中较纯的鳞癌细胞,运用双向电泳和质谱的方法检测两者表达的差异蛋白,并用免疫印迹技术对差异候选蛋白进行分析、验证。发现29个差异蛋白点,通过质谱鉴定出6种有意义的蛋白,转移淋巴结中的鳞癌细胞中如peroxiredoxin 1等5种蛋白表达明显增高,1种蛋白MTCBP-1表达下调。因此激光捕获显微切割可以有效地解决组织异质性的问题;食管鳞癌组织中的鳞癌细胞与转移淋巴结中的鳞癌细胞的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示食管鳞癌的淋巴结转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果,从而造成肿瘤细胞迁移性和侵袭性的进一步增强。