围着床期小鼠胚胎表达肿瘤易感基因101(TSG101)

揭示肿瘤易感基因101(TSG101)在围着床期胚胎中的时空表达型。方法:收集囊胚、培养获得着床前、着床后以及长开的小鼠胚胎。利用全胚原位杂交以及全胚免疫染色方法检测围着床期小鼠胚胎中TSG101的时空表达型。结果:TSG101表达于围着床期胚胎的內细胞块和滋养层细胞中,其中内细胞块细胞中的表达更强。结论:围着床期胚胎表达TSG101,暗示TSG101在胚胎着床过程中发挥作用。     

昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定

目的：从昆明系小鼠的早期胚胎分离和培养胚胎干细胞(ES细胞)．方法：收集小鼠3．5d胚龄的囊胚，将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，5—6d后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶染色、原位杂交、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定．结果：KS细胞集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性．结论：昆明系小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞，并能进行传代培养．     

利用体细胞核移植技术生产黄牛和水牛同种、异种转基因克隆囊胚

以含neo和GFP基因双标记的水牛、黄牛胎儿成纤维细胞进行牛转基因体细胞核移植,结果发现：阿菲迪霉素可有效将胎儿成纤维细胞同步于G0／G1期;以GFP阳性细胞进行核移植,其卵裂率、囊胚率与对照组间无显著差异（P〉0．05）,所构建的重组胚,2-细胞阶段观察不到GFP的表达,4-细胞以后GFP的表达逐渐增强,在囊胚的内细胞团和滋养层细胞均可检测到GFP的表达,将黄牛同种转基因克隆囊胚进行移植,获得1例妊娠;黄牛卵母细胞-水牛供核细胞构建异种重组胚囊胚率显著高于黄牛供核细胞-水牛卵母细胞构建的异种重组胚（P〈0．05）,并且异种核移植重组胚中可检测到GFP表达,GFP可作为异种核移植胚胎来源的一种新标记．     

水稻整体原位杂交实验技术方法的改进

以检测水稻SUPERWOMAN1(SPW1)/OsMADS16基因的表达模式为例,通过对杂交探针的制备、材料的固定及解离通透、显色等方面进行优化,获得背景值低、特异性高的SPW1/OsMADS16基因特异性表达结果.建立一套针对水稻的整体原位杂交技术,方法简单,费用低廉,可在离心管中多种材料同时进行.主要实验步骤包括探...     

小鼠胚胎干细胞R1表面特异结合多肽的筛选

胚胎干细胞是从哺乳动物胚胎发育早期的囊胚的内细胞团内分离出来的一类细胞,具有自我更新和全能性的基本特征.作者利用M13噬菌体展示技术筛选与未分化的小鼠胚胎干细胞R1表面特异结合的多肽.实验利用未分化的小鼠胚胎干细胞为筛选靶细胞,分化的小鼠胚胎干细胞为吸附细胞,进行3轮的消减筛选,经细胞ELISA鉴定,噬菌体DNA测序和多肽序列分析,得到13条能与小鼠胚胎干细胞特异结合的多肽.通过BLASTP比对发现有11个体内的同源蛋白,为进一步研究小鼠胚胎干细胞表面分子提供研究基础.     

胰岛素样生长因子及其受体在绵羊早期胚胎的表达

旨在研究IGFs及其受体（IGFR）在绵羊卵母细胞和早期胚胎中的表达．对绵羊进行超数排卵处理，手术法采卵得到卵母细胞和着床前早期胚胎，结合荧光免疫染色方法和激光共聚焦成像系统，研究了绵羊未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞和着床前各期胚胎中IGF—Ⅰ、IGF-Ⅱ、IGF—ⅠR、IGF—ⅡR的表达情况．结果表明，IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞中均有表达;受精后，直到囊胚的整个早期发育阶段也检测到了这两个因子的表达，且胚胎免疫染色在各卵裂球之间呈现不均匀的分布．IGF—ⅠR和IGF—ⅡR在未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞和早期胚胎均有表达，在胚胎期主要分布于卵裂球细胞的顶端（apical surface），而在囊胚阶段主要在滋胚层细胞中表达，内细胞团没有表达．     

斑马鱼crip2基因的克隆、亚细胞定位及在胚胎发育早期的表达分析

斑马鱼广泛用于脊椎动物遗传和发育生物学的研究．为揭示包含具有LIM结构域的crip基因的功能,本文以斑马鱼为实验对象,克隆了斑马鱼的crip2基因,分别构建了crip2-Teasy 和crip2-egfp载体,从含有crip2基因的crip2-Teasy质粒上转录crip2 RNA 探针,并用全胚胎原位杂交法检测crip2在斑马鱼胚胎中的表达,用crip2-egfp对crip2进行亚细胞定位研究,发现crip2基因在斑马鱼胚胎早期没有表达,五体节开始在脊索特异表达;后期,主要局限于在血管、心脏和体节间肌肉,表明crip2的表达并不局限于内皮系统．在细胞内,crip2基因在细胞核和胞浆中均有表达．这些工作为进一步研究crip2基因的功能奠定了基础．     

IGF-Ⅰ及其受体在牛体外受精早期胚胎中的表达

采用成分明确的体外培养系统产生牛体外受精胚胎,结合荧光免疫定位的方法,利用激光共聚焦成像系统研究了在牛卵母细胞及不同发育阶段早期胚胎中IGF-Ⅰ及其受体的表达.结果表明,IGF-Ⅰ及其受体从未成熟的卵母细胞、成熟的卵母细胞到早期胚胎发育的各个阶段均有表达,在COC的颗粒细胞中也有表达.IGF-I在成熟卵母细胞中主要定位于细胞膜附近,在未成熟卵母细胞、2细胞期胚胎中分布于细胞膜及膜下区域,在8细胞期胚胎和桑椹胚中分布于整个细胞质中,在囊胚阶段主要位于滋胚层,内细胞团细胞有少量的表达.IGF-IR在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及2细胞、8细胞期胚胎中集中分布于卵裂球远离胚胎中心的细胞膜上,在桑椹胚期时遍布于整个胚胎细胞的细胞质中,在囊胚期时主要分布在滋胚层,内细胞团细胞有少量表达.     

昆明小鼠胚胎移植技术的研究

目的研究不同时期胚胎对胚胎移植成功率的影响,以提高胚胎移植率。方法采用经超数排卵的KM雌鼠与正常615雄鼠交配,取受精卵,分别将1-细胞胚、2-细胞胚和桑椹胚、囊胚分别移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管和子宫中,妊娠产仔。结果移入1-细胞胚、2-细胞胚、桑椹胚和囊胚的假孕母鼠妊娠率分别为36.36%、42.86%、10%、27.27%,产仔率分别为46.58%、38.46%、58.33%、60%。结论2-细胞胚的移植可提高小鼠的胚胎移植成功率,子宫移植可提高小鼠的产仔率。     

用小鼠单个MⅡ卵和2-细胞期胚胎构建cDNA文库

阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种分离和克隆早期胚胎特异表达基因的有效方法.本研究利用小鼠单个MⅡ卵母细胞及发育至2-细胞的胚胎分别构建了cDNA文库.滴度分别为:6.5×106、7.2×107,基因片段平均长度为250-1500bp并用β-actin验证了文库的可靠性.这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法,不仅解决了胚胎研究材料受限制的问题,而且在材料的发育时间上更加精确,更能反映胚胎发育的规律,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎发育相关基因的一种有效手段.     

Nuclear transplantation in sheep embryos

Nuclear transplantation and cell fusion techniques have proved valuable for embryological studies in several non-mammalian animal species. More recently these procedures have been used successfully in small laboratory mammals, notably the mouse, to investigate the ability of nuclei and cytoplasm from various sources to produce viable embryos when combined. The use of a similar approach to study the developmental biology of large domestic animals presents a number of technical and practical difficulties, and so far there has been no report of attempts to perform nuclear transplantation in sheep embryos. Here I describe such a procedure and its use to investigate the development of embryos in which whole blastomeres from 8- and 16-cell embryos were combined with enucleated or nucleated halves of unfertilized eggs. The procedure involves bisection of single-cell eggs in a medium containing cytochalasin; fusion of egg halves with single blastomeres, induced using Sendai virus or an electrofusion apparatus; and embedding in agar, followed by culture of the reconstituted embryos in the ligated oviducts of ewes in dioestrus. I show that fully viable embryos may be obtained by this procedure.     

Control of segment number in vertebrate embryos

The vertebrate body axis is subdivided into repeated segments, best exemplified by the vertebrae that derive from embryonic somites. The number of somites is precisely defined for any given species but varies widely from one species to another. To determine the mechanism controlling somite number, we have compared somitogenesis in zebrafish, chicken, mouse and corn snake embryos. Here we present evidence that in all of these species a similar 'clock-and-wavefront' mechanism operates to control somitogenesis; in all of them, somitogenesis is brought to an end through a process in which the presomitic mesoderm, having first increased in size, gradually shrinks until it is exhausted, terminating somite formation. In snake embryos, however, the segmentation clock rate is much faster relative to developmental rate than in other amniotes, leading to a greatly increased number of smaller-sized somites.