萤火虫荧光素酶分离纯化及其特性的研究

萤火虫荧光素酶只在萤火虫体内产生,一般通过养殖和用化学法提取。研究了以基因工程菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ－Ｌｕｓ－Ｊ－１为材料,从它的对数生长期发酵液中提取萤火虫荧光素酶。经检测其分子量为５×１０４,动力学性质研究表明它是非典型的Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ氏酶,对荧光素作用动力学曲线为Ｓ型,最适ｐＨ为７．５,最适温度为１５℃,且对光和盐浓度非常敏感。     

酵母菌呼吸缺陷型和野生型线粒体DNA比较

以酒精酵母，ＩＦＦＩ１３００ 材料，建立了以”蜗牛酶＋机械振荡“复俣自理破碎细胞的方法；先提取并纯化线粒体，后从线粒体中提取线粒体ＤＮＡ的方法，得到了紫外吸收Ａ２６０／２８０为１．８２３，琼脂糖电泳为一条带且分子量大λＤＮＡ的线粒体ＤＮＡ。     

金樱子果实中多糖的提取与分离纯化

目的：从金樱子果实中提取与纯化多糖。方法：用热水提取金樱子果实粗多糖，经Sevage脱蛋白，透析后经DEAE-Sepharose Fast Flow，和CM—Sepharose Fast Flow柱色谱分离纯化金樱子粗多糖；经高效液相色谱法测定其相对分子量；进行完全酸水解研究多糖的组成。结果：得到两个金樱子多糖组分RLPSⅠ、Ⅱ，其相对分子量分别为22712和16051；初步确定RLPS Ⅱ由D—半乳糖、D—甘露糖和木糖组成。结论：从中药金樱子中提取分离出了两个多糖。     

荧光素酶的分类、结构与应用

荧光素酶是生物体内催化荧光素或者脂肪醛氧化发光的一类酶的总称.荧光素酶可以从细菌、萤火虫、海星等提取出来.随着研究的不断深入,荧光素酶应用到了分子生物学、医学、微生物检测等领域.文章就荧光素酶的种类、结构及应用进行了研究.     

一种快速微量的非放射性核糖体失活蛋白活性检测方法

建立了一种非放射性的利用兔网织红细胞裂解液（Rabbit Reticulocyte Lysate）无细胞翻译系统和荧光素酶检测系统（Luciferase Assay System）的核糖体失活蛋白检测方法，快速检测了两种方法提取的麻疯树核糖体失活蛋白（RIPs）Curcin的无细胞蛋白质翻译抑制活性，测得离子交换层析法纯化Curcin的IC50＝0.045±0.009nmol/L，分子筛层析纯化Curcin的IC50＝0.217±0.026nmol/L；该方法避免了放射性同位素的使用，使检测过程简便、快速     

花生2S蛋白提取分离及部分性质研究

用低盐缓冲液提取加热处理的方法分离了花生种子２Ｓ蛋白组分，用激光质谱法测定了２Ｓ蛋白各组分的分子量；用高效液相色谱法测定了２Ｓ蛋白的氨基酸组成；用差示扫描量热法测定了２Ｓ蛋白的加工工艺性质。     

以MDR1基因启动子为靶点的药物筛选模型的建立

通过构建以MDR1启动子为启动序列的荧光素酶报告基因载体,建立基于双荧光素酶报告基因系统的多药耐药抑制剂筛选模型。从HCT-8细胞中提取DNA并克隆含有MDR1基因启动子的序列。将该序列重组到荧光素酶报告基因载体pGL-3-Basic的启动区域中,从而构建报告基因载体pGL-MDR1。将pGL-MDR1和pRL-TK载体共转染到HCT-8和HCT-8/VCR细胞中,建立用于筛选多药耐药抑制剂的方法。通过调节不同载体的比例来优化转染效率。通过MDR1基因激活剂（热诱导）和抑制剂（EGCG）来验证该方法。通过直接测序法验证了pGL-MDR1含有MDR1基因启动子序列且没有出现碱基突变。在n（pGL-MDR1）∶n（pRL-TK）=5∶5时,转染效率最高并具有最高的荧光素酶活性。通过MDR1基因激活处理后表现为时间依赖性地激活MDR1基因的表达,而MDR1基因抑制剂的作用则相反。     

香菇多糖的提取及结构分析

目的：找到一种操作简单、结果准确的香菇多糖提取及分子量测定的方法。方法：用水煮醇沉法提取香菇多糖,用蒽酮-硫酸法在621nm波长下,测定吸光度值计算糖含量,通过Sephadex-LH20柱,分离得到分子量范围不同的三段组分,GPC测定分子量范围。结果：蒽酮-硫酸法测定得到香菇多糖的糖含量为52.3%,经GPC测定三段组分分子量范围分别为27w、1w、300D。结论：结果表明,水煮醇沉法提取香菇多糖操作简单,柱分离纯化后,GPC测定分子量结果准确。     

香菇多糖的提取及结构分析

目的:找到一种操作简单、结果准确的香菇多糖提取及分子量测定的方法。方法:用水煮醇沉法提取香菇多糖,用蒽酮-硫酸法在621nm波长下,测定吸光度值计算糖含量,通过Sephadex-LH20柱,分离得到分子量范围不同的三段组分,GPC测定分子量范围。结果:蒽酮-硫酸法测定得到香菇多糖的糖含量为52.3%,经GPC测定三段组分分子量范围分别为27w、1w、300D。结论:结果表明,水煮醇沉法提取香菇多糖操作简单,柱分离纯化后,GPC测定分子量结果准确。     

壳聚糖的提取及其脱乙酰化研究

从对虾壳中提取甲壳素，并探讨其脱乙酰化过程中碱处理方式及温度对脱乙酰度和分子量的影响．结果表明：加入乙醇、升高温度能够提高甲壳素的脱乙酰度；乙醇存在下的脱乙酰反应是一级反应；采用间歇碱处理的方式能够在提高脱乙酰度的同时，保持较高的分子量．     

生物荧光素酶的活性与固相化

目的：探讨荧光酶的活性和稳定性，方法：酶亚单位重聚酶固相化，结果：获得稳定，高活性的荧光酶，结论：亚单位重聚和酶固相化是酶稳定性和活性的保证。     

酶法提取方格星虫多糖的条件及优化

【目的】确定胰蛋白酶酶解法提取方格星虫(Sipunculus nudus)体壁中水溶性多糖的最优条件。【方法】分别从料液比、浸提温度、浸提时间、浸提pH值、酶底比等5个方面进行了初步研究。研究分为两部分进行,先确认提取方法中各单因素的最优条件,再根据单因素试验结果选取4个主要因素(料液比、浸提温度、浸提pH值、酶底比),进行四因素三水平的正交试验,得到方格星虫水溶性多糖水提法的最佳组合。【结果】正交试验结果表明:对方格星虫多糖提取率影响最大的为浸提温度,其次是pH值和料液比,影响最小的为酶底比。最佳浸提条件为:温度60℃、pH值8.0、料液比1∶12g·mL-1、酶底比为2.0%、时间3h。【结论】在最优浸提条件下,方格星虫水溶性多糖酶提法所得的最佳提取率为1.59%。此方法高效稳定可行,能有效提高方格星虫的多糖提取率。     

纤维素酶提取漳州血柚皮总黄酮的工艺研究

以漳州血柚皮为原料,利用纤维素酶对血柚皮总黄酮进行提取,并以硝酸铝显色法测定总黄酮提取率.分别对酶用量、pH值、酶解温度、酶解时间进行单因素实验和正交试验,并通过极差、方差分析对提取过程显著影响提取率的因素进行统计分析.结果表明,纤维素酶提取血柚皮中的总黄酮的优选工艺条件为:酶用量5.5%,pH 5.2,酶解温度52℃,酶解时间为50 min,该工艺条件下血柚皮总黄酮的提取率可达1.52%.     

响应曲面法优化超声协同复合酶法提取广金钱草多糖工艺

采取超声波协同复合酶法探究广金钱草多糖的最佳提取工艺.采用加权评分法,以广金钱草多糖的得糖率和含糖量的综合得分为评价指标,考察液料比、超声时间、超声温度、酶解pH、酶解温度和酶解时间因素对广金钱草多糖综合得分的影响,在单因素试验基础上,筛选对广金钱草多糖综合得分影响较大的因素,根据Box-Behnken试验设计原理,优化广金钱草多糖的最佳提取工艺.实验研究表明,在复合酶提取(质量比木瓜蛋白酶:纤维素酶:果胶酶=1:1:1),酶添加量固定为1％的条件下,超声协同复合酶法提取广金钱草多糖的最佳提取工艺为:液料比为50:1(g/mL),超声时间为86 min,超声温度为50℃,酶解时间为60 min,酶解温度为60℃,酶解pH为5.5.在此条件下,得到多糖的综合得分达92.02,与响应面模型的预测值相符合.此方法可以很大程度提升广金钱草多糖的提取量,表明利用响应面法优化广金钱草多糖的提取工艺是可行的,可为其工艺提取提供参考.     

硫酸软骨素提取方法研究

系统介绍了采用降解法提取硫酸软骨素的方法——中性盐法、碱提取法、酶提取法、超声波法和乙酸抽提法的工艺路线及其优缺点.     

仙人掌中类黄酮化合物提取方法研究

目的探索仙人掌中类黄酮化合物的提取方法,为类黄酮化合物的开发利用提供依据.方法采用酶工程技术方法和醇水提取方法进行试验,测得仙人掌中类黄酮化合物含量.结果经两种方法提取的黄酮类化合物含量不同.以加入果胶酶组的含量偏高,总类黄酮化合物含量为347.8 mg/100 g干粉;未加入果胶酶组总类黄酮化合物含量为235.6 mg/100 g干粉.前者方法操作简便,提取时间短,提取率高,但经济成本高;后者方法虽然成本低,但提取率低,需经多次过滤,耗费时间长.结论酶工程技术方法提取仙人掌中类黄酮化合物具有操作简便,提取时间短,提取率高等优点.     

超临界CO2流体萃取——气相色谱法测定土壤中的类二癋英类多氯联苯

利用超临界CO2流体萃取(SFE CO2)及气相色谱技术，建立了土壤中12种类二癋英类多氯联苯（PCBs）的分析测定方法. 对SFE CO2的萃取条件进行了优化，其最佳萃取条件为：压力25?MPa，温度100?℃，静态萃取时间20?min，动态萃取时间45?min，收集溶剂丙酮，CO2流量2.5?mL/min，改性剂10%（质量分数）二氯甲烷. 12种PCBs的加标回收率为73.0%～129.0%，相对标准偏差（RSD）为1.0%～10.5%. 测定麦田土壤样品中12种类二癋英类多氯联苯，共检出8种PCBs，质量比为77～667?pg/g，其他4种未检出.     

一种快速提取质粒DNA鉴别重组克隆的方法

依据快检缓冲液筛选重组子克隆的方法,结合碱裂解法提取质粒DNA的原理,经过试验摸索,应用了快检缓冲液直接裂解菌液,电泳后筛选重组质粒的方法,避免了提取质粒鉴定等繁琐步骤,其结果与菌液PCR、质粒酶切鉴定结果一致,可快速筛选出重组克隆.     

能量转移荧光法测定血清中淀粉酶的活性

将5(4,6-二氯三吖嗪)氨基荧光素(DTAF)和普施安红MX-8B活性染料同时标记在淀粉的适当位置,制得了测定淀粉酶活性的荧光新底物。在此底物中,染料将从荧光剂上获得能量转移并使荧光熄灭。淀粉酶催化淀粉的水解,导致能量转移效应降低,荧光强度增大。用此新方法测定了血清中淀粉酶活性,与标准方法比较,相关系数为0.994。     

平菇多糖提取方法的比较

以平菇为原料, 分别采用破碎、 超声波和超声辅助复合酶3种提取方法提取平菇水溶性多糖. 正交优化结果表明： 提取温度90 ℃, 剪切速率11 350 r/min, 提取时间20 min, 提取3次, 破碎法提取多糖得率为11.20%; 提取温度60 ℃,  超声功率450 W, 提取时间60 min, 提取3次, 超声法提取多糖得率为9.75%; 提取温度30 ℃, 超声功率350 W, 提取时间60 min, 溶液pH=5, 超声辅助复合酶法提取多糖得率为12.05%. 综合考虑提取得率、 节能环保、 操作方法等因素, 选用破碎法提取平菇多糖较理想.