二去水卫矛醇对人脑肿瘤细胞体外抑制作用

【目的】探寻二去水卫矛醇(1,2:5,6-Dianhydrogalctitol,DAG)对人脑肿瘤细胞的抑制作用,为DAG抗肿瘤作用提供理论基础。【方法】通过体外实验,并采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度DAG对11株人脑肿瘤细胞的体外抑制作用,观察DAG的半数抑制浓度。【结果】DAG对IMR-32、SH-SY5Y、U87、A172、BT325、T98G、SHG-44、U373、C6、SK-N-BE、U251等11株人脑肿瘤细胞作用72h后半数抑制浓度(72h-IC50)分别为24.28μg/mL、19.24μg/mL、21.55μg/mL、25.13μg/mL、20.63μg/mL、21.03μg/mL、24.91μg/mL、23.52μg/mL、22.06μg/mL、22.92μg/mL、23.44μg/mL。【结论】DAG在体外对上述11株人脑细胞均有抑制生长作用。     

基于顺磁微粒的金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫层析试纸条的制备

采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试纸条进行测试研究。优化的顺磁微粒偶联抗体的缓冲体系为p H 9.0,5mmol/L硼酸,0.05%Tween-20;磁珠包被抗体量为125μg/2mg磁珠,封闭剂为0.25%的脱脂牛奶,磁珠保存液为5mmol/L硼酸、0.05%Tween-20+0.05%Triton X-100,0.01%Na N3,0.5%BSA,p H9.0;建立的SEB顺磁微粒免疫层析试纸条T线抗体浓度为1mg/m L,最低检测限为1ng/m L,磁信号检测显示,该试纸条在SEB浓度0.1~1 000ng/m L范围内具有很好的线性关系。SEB顺磁微粒免疫层析法具有简单快速、灵敏度高、可定量的特点,可应用于SEB的快速检测。     

阿尔茨海默病中Aβ1-42磁微粒化学发光免疫检测方法的建立和应用

目的 建立一种定量检测血清中β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)的磁微粒化学发光免疫检测方法.方法 制备活化磁性微球，并标记抗Aβ1-42抗体；制备Aβ1-42抗体-吖啶酯发光试剂，建立一步式定量检测Aβ1-42浓度的磁微粒化学发光免疫检测方法，组装成试剂盒，并评估其灵敏度、准确度、重复性、特异性、稳定性等，推测血清Aβ1-42正常参考区间.结果 该方法对血清Aβ1-42检测灵敏度评估的空白限(LoB)为0.03 pg/mL,检测限(LoD)为0.05 pg/mL,功能灵敏度(FS)为0.11 pg/mL,线性范围0.1～5 000 pg/mL,加标回收率为103.78%～106.10%;试剂盒检测的分析内精密度为1.06%～2.70%,分析间精密度为3.61%～5.21%,总不精密度为5.93%～8.60%.在试剂盒特异性方面，与血清中常见蛋白的交叉反应率低于2%;同时，样本中常见的3种干扰物在胆红素、甘油三酯、血红蛋白浓度分别低于40 U/L、2 mmol/L、3 g/L时，检测结果基本不受影响.试剂盒在37℃下可稳定保存7 d以上，说明2～8℃下产品有效期不低于12个月.且100...     

胶体金免疫试纸法快速测定雌三醇

雌三醇(E3)在临床诊断、日用化工和畜牧业等领域具有广泛应用,同时它也是一种环境污染物,对E3的检测具有科学和应用意义.本研究采用竞争性免疫层析技术,以E3单克隆抗体-纳米胶体金复合物作为金标抗体,以E3偶联抗原为检测线(T线)、以羊抗鼠抗抗体为控制线(C线),通过条件的优化,制备出检测E3的胶体金试纸条.当试纸条C线和T线同时显色时,结果为阴性;当试纸条仅C线显色时,结果为阳性.所得检测试纸条测加标水样的最低检测限为100μg/L,测加标奶样的最低检测限为100μg/L,反应时间为10min,与雌酮、雌二醇、己烷雌酚等环境雌激素无交叉反应,具有良好的选择性.     

六溴环十二烷胁迫下红树蚬荧光定量PCR内参基因稳定性分析

【目的】筛选出不同浓度六溴环十二烷(HBCD)胁迫下红树蚬(Polymesoda erosa)实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的最适内参基因,用以准确校准目的基因的表达,为进一步开展分子毒理研究和开发分子生物标志物奠定基础。【方法】通过荧光定量PCR技术监测候选内参18S核糖体RNA(18S rRNA)、β-肌动蛋白(β-actin)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、α-微管蛋白(α-tubulin)等管家基因,在红树蚬各组织受不同浓度(0μg/L、0.86μg/L、8.6μg/L)六溴环十二烷(HBCD)胁迫后的表达量,利用qRT-PCR及geNorm、NormFinder、BestKeeper等分析软件对不同条件下的表达数据进行处理,从而筛选出适合荧光定量PCR的最佳内参基因。【结果】受不同浓度HBCD胁迫后,鳃及肝胰中各管家基因的表达稳定性排序整体为β-actin=α-tubulinGAPDH18S rRNA。【结论】可单独或共同使用两个内参基因(β-actin、α-tubulin)校准荧光定量结果。     

红树植物卤蕨地上部分提取物的生物活性初报

【目的】研究红树植物卤蕨(Acrostichum aureum)地上部分的乙醇提取物及其不同极性部位萃取物对我国3种高发性肿瘤细胞株(MCF-7,A549,HepG2)和3种微生物菌株(金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus Rosenbach、大肠杆菌Escherichia coli、痤疮丙酸杆菌Propionibacterium acnes)的生长抑制作用。【方法】采用MTT法测定其对所选3种人肿瘤细胞株的细胞毒活性;采用改良的刃天青显色法,测定对3种微生物菌株的体外抗菌作用的最低抑菌浓度(MIC)。【结果】卤蕨地上部分的不同极性部位提取物对所选人肿瘤细胞株和微生物菌株表现出不同程度的生长抑制作用,其中乙酸乙酯萃取部位对3种细胞株具有很好的细胞毒活性,IC50值均低于20μg/mL,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和痤疮丙酸杆菌的MIC分别为125μg/mL、125μg/mL、62.5μg/mL;正丁醇萃取部位的细胞毒活性和抑菌作用次之;石油醚萃取部位和水层对所选细胞株和菌株几乎不表现抑制作用。【结论】卤蕨地上部分乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位具有较好的细胞毒活性和抑菌作用,值得进行进一步活性追踪、分离纯化,以期获得具有药用价值的活性先导化合物。     

微波消解-石墨炉原子吸收光谱法测定亚热带水果中铅

【目的】制备密闭微波消解样品,建立石墨炉原子吸收光谱法测定亚热带水果中铅的方法。【方法】样品经硝酸消解,所得溶液蒸发浓缩后定容至25mL,取适量用石墨炉原子吸收光谱法测定,并优化微波消解条件和仪器测定条件,对各种最佳分析条件进行探讨和验证。【结果】在最佳工艺条件下,铅的校准曲线在0~8.0μg/L范围内呈线性,方法检出限为1.247μg/L,相对标准偏差为4.7%,回收率为95.0%~102.0%。用标准物质进行对照,其测定值均在给定的标准值范围内。【结论】该方法具有操作简单、灵敏度高、回收率和重复性好等特点,适合亚热带水果中铅含量的测定。     

儿茶素、槲皮素和葡萄籽原花青素的协同抗辐射作用

通过建立体外AHH-1淋巴细胞辐射损伤模型,研究儿茶素、槲皮素和葡萄籽原花青素之间的协同抗辐射作用.结果表明:当儿茶素质量浓度为10μg/mL和槲皮素质量浓度为5μg/mL时,儿茶素质量浓度为10μg/mL和原花青素质量浓度为15、25、30μg/mL时,槲皮素质量浓度为5μg/mL和原花青素质量浓度为25μg/mL时,槲皮素质量浓度为10μg/mL和原花青素质量浓度为20、25μg/mL时,两物质间皆具有协同抗辐射作用.当儿茶素质量浓度为10μg/mL时,槲皮素质量浓度为15、20μg/mL以及原花青素质量浓度为10、20μg/mL时,儿茶素分别与槲皮素、原花青素存在拮抗作用.当槲皮素质量浓度为5μg/mL和原花青素质量浓度为20μg/mL时,当槲皮素质量浓度为10μg/mL和原花青素质量浓度为15μg/mL时,当槲皮素质量浓度为15μg/mL和原花青素质量浓度为15、20、25μg/mL时,原花青素与槲皮素皆存在拮抗作用.因此,在适量浓度范围内儿茶素、槲皮素和原花青素之间具有协同、拮抗抗辐射作用,这一研究发现对开发抗辐射功能食品具有指导意义.     

甲醇中胆固醇溶液标准物质的研制

【目的】研究甲醇中胆固醇溶液标准物质的制备方法。【方法】运用重量-容量法采用胆固醇纯度标准物质和甲醇制备甲醇中胆固醇溶液标准物质,采用配制值作为标准值,运用液相色谱法对研制的标准物质进行均匀性、稳定性检验和量值核验。【结果】研制的甲醇中胆固醇溶液标准物质具备很好的均匀性,分别贮存于4℃和60℃条件下7d内短期稳定性合格,在16个月内长期稳定性良好。【结论】研制的甲醇中胆固醇溶液标准物质符合国家二级标准物质的要求,标准值为200μg/mL(Urel=2%,k=2),可用于测量仪器的校准、测量过程质量控制及分析方法确认和评价。     

胆酸钠多克隆抗体的制备及其快速检测方法研究

目的:探索用胶体金免疫层析法快速检测胆酸钠含量。方法:用碳二亚胺法合成的免疫抗原胆酸钠-BSA,免疫新西兰白兔,制备抗胆酸钠多克隆抗体。用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定特异性抗体效价。制备胆酸钠—OVA抗原—胶体金复合物,组装检测试纸。结果:胆酸钠抗体的效价为1∶80 000,建立的胶体金快速测定法对胆酸钠的检测限为12μg/mL。结论:试纸条法是快速检测胆汁酸含量的有效方式,在临床检测方面具有广阔的运用前景。     

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E0蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)能够引起牛羊的持续感染,临床上很难对其根除,建立该病有效检测方法对净化畜群具有重要意义。本研究构建BVDV E0蛋白基因重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达,用重组的E0蛋白为包被抗原,确定抗原最佳包被浓度为5μg/mL,最佳血清稀释比为1∶10,最佳封闭液为5%脱脂奶粉,最佳封闭条件为37℃封闭2 h,酶标二抗稀释度为1∶5000,作用时间为30 min,样品临界值X+2S为0.278。该方法与IDEXX的BVDV间接ELISA试剂盒比较总符合率为86%,与口蹄疫病毒、牛支原体、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副结核、牛布鲁氏菌病阳性血清无交叉反应。该检测方法能够用于BVDV抗体水平的临床检测,可为感染病畜的合理淘汰提供实验依据。     

牛奶中三聚氰胺残留胶体金免疫层析快速检测方法研究

为建立牛奶中三聚氰胺免疫层析快速检测方法,采用胶体金偶联特异性三聚氰胺抗体,优化试纸条T线抗原包被量、金标抗体用量、二抗稀释倍数等条件,构建三聚氰胺免疫层析试纸条.结果表明,T线抗原包被量为0. 25μg/mL,金标抗体用量为9. 0μL/条,二抗稀释倍数为1:100时效果最佳;最优条件下该试纸条的最低检出限为0. 25μg/mL,结果可在5 min内进行判读,且牛奶样品不需任何处理可直接进行测定.本研究建立的免疫检测方法适用于牛奶中三聚氰胺的检测.     

CTAB包被的不同形态纳米金的制备及其抗菌性能研究

本文以CTAB为包被试剂合成了球形、棒状和三角形三种不同形态的纳米金颗粒,研究了它们对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)和大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli)杀菌性能的差异.通过平板计数法和浊度法;确定了它们对两种菌的最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentrations,MBC)和最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentrations,MIC).棒状纳米金、三角形纳米金、球形纳米金对大肠杆菌的MIC分别为0.65μg/mL、3.71μg/mL、21.21μg/mL,MBC分别为1.30μg/mL、11.09μg/mL、21.21μg/mL;对金黄色葡萄球菌的MIC分别为0.26μg/mL、0.56μg/mL、2.65μg/mL,MBC分别为0.52μg/mL、1.11μg/mL、2.65μg/mL.结果表明无论是对大肠杆菌还是金黄色葡萄球菌,棒状纳米金的杀菌效果均高于其它两种形态,并且三种不同形态的纳米金对金黄色葡萄球菌的杀菌效果均优于大肠杆菌.     

表皮生长因子间接竞争酶联免疫吸附测定法的建立

目的：建立一种可应用于临床的快速定量测定表皮生长因子含量的酶联免疫吸附测定法(ELISA)。方法：以重组人表皮生长因子(ECF)为包被抗原和竞争抗原，两与一定量的ECF。抗血清反应，建立检测EGF的间接竞争ELISA方法。结果：理想的包被抗原质量浓度为1μg/mL，ECF抗血清的工作浓度为1：10000，酶标二抗工作浓度为1：3000，可测最适范围为0．5～16ng／mL，最小检测量为0．5ng/mL，批内和批间变异系数分别为6．21％和7．42％。得到回归方程y=-13．65ln(x) 81．554，相关系数R^2=0．997。结论：建立了快速定量检测ECF的间接竞争ELISA方法。     

小月柳珊瑚中生物碱类化学成分及其抗骨肉瘤细胞增殖活性研究

【目的】研究小月柳珊瑚(Menella kanisa)中生物碱类化学成分及其抗骨肉瘤细胞增殖活性。【方法】采用多种分离方法和波谱分析方法,对小月柳珊瑚中生物碱类化学成分进行分离和结构鉴定。采用MTT法测试部分生物碱类化合物抗骨肉瘤细胞U2OS增殖活性。【结果】从小月柳珊瑚中分离出7个化合物,分别鉴定为6-(1′-purine-6′,8′-dionyl)suberosanone(1)、1-(3′-carbonylbutyl)purine-6,8-dione(2)、腺嘌呤脱氧核苷(3)、次黄嘌呤(4)、7-甲基腺嘌呤(5)、胸腺嘧啶脱氧核苷(6)、尿嘧啶脱氧核苷(7)。化合物1和2对骨肉瘤细胞U2OS增殖显示出抑制活性,IC50值分别为13.3μg/mL和55.0μg/mL。【结论】化合物1~7均首次从小月柳珊瑚中分离得到,其中化合物1和2的抗骨肉瘤细胞活性也为首次报道。     

八角莲不同部位鬼臼毒素和4'-去甲鬼臼毒素含量的测定

利用反相高效液相色谱法建立了同时分离和测定4'-去甲鬼臼毒素和鬼臼毒素的方法.所选用的色谱柱为Waters Spherisorb ODS2(5μm,4.6 mm i.d×250 mm),流动相组成为甲醇-水(体积比为65∶35),检测波长为207 nm.在该色谱条件下,4'-去甲鬼臼毒素质量浓度在0.222 4⁵56μg/mL、鬼臼毒素质量浓度在0.596 8556μg/mL、鬼臼毒素质量浓度在0.596 8¹ 492μg/mL范围内线性关系良好,相关系数分别为0.999 8和0.999 9.该方法应用于中药八角莲的叶、茎、须和根中这2个组分的含量分析.     

高效液相色谱法检测鸡蛋中的三聚氰胺

建立了高效液相色谱法检测鸡蛋中三聚氰胺的方法。样品用1%三氯乙酸和2.2%乙酸铅超声提取。色谱柱为HypersilODS100×4.6mm,5μm;流动相为乙腈:辛烷磺酸钠离子对试剂(pH=3)=15:85(V/V);流速为1mL/min;检测波长为210nm;柱温为40℃。三聚氰胺在0.2μg/mL～10μg/mL范围内,有良好的线性关系。在空白样品中添加0.2μg/mL、0.4μg/mL、1.0μg/mL三个质量浓度的标准工作液,回收率在82.0%～104.0%,相对标准偏差为6.81%(n=9)。     

QCM对牙釉基质蛋白在牙釉质表面的吸附行为

目的:通过石英晶体微天平技术在牙釉质表面吸附牙釉基质蛋白,进而研究牙釉质表面对不同质量浓度蛋白吸附性能的影响。方法:在石英晶片上制备牙釉质膜,将其分别浸入10、20、40μg/mL质量浓度的牙釉基质蛋白溶液;通过共振频率、耗散因子、吸附量随质量浓度的变化关系,得出牙釉基质蛋白吸附的规律。结果:共振频率随质量浓度的提高而降低;吸附量随质量浓度的提高稳定的增长;结论:在20μg/mL的蛋白溶液中,牙釉质表面吸附蛋白的成膜刚性较好。石英晶体微天平技术对牙釉基质蛋白吸附机理的研究显得更直观,是研究蛋白吸附行为的有效工具。     

时间分辨荧光微球免疫层析法定量检测克伦特罗

建立了一种定量检测克伦特罗的时间分辨荧光微球免疫层析法。对抗体标记量、微孔中克伦特罗抗体-时间分辨荧光微球探针的体积以及检测线上抗原浓度进行了优化。通过时间分辨荧光微球试纸条检测仪读取试纸条上检测线和质控线的信号强度,以克伦特罗标准品的浓度为横坐标,以检测线和质控线信号强度的比值为纵坐标建立标准曲线。结果表明:该方法定量检测范围为0.01~0.81μg/L,检测限为0.004μg/L,半抑制率为0.06μg/L。本检测方法具有简便、灵敏度高、快速和可定量等特点,适合于大批量样品的现场筛查。     

多粘类芽孢杆菌同步糖化发酵玉米粉生产(R,R)-2,3-丁二醇

【目的】对多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa的玉米粉同步糖化发酵工艺进行优化,以获得低成本、高效的(R,R)-2,3-丁二醇生产技术。【方法】研究玉米粉浓度、氮源种类和氮源浓度对菌体生长、耗糖能力以及(R,R)-2,3-丁二醇产量、产率、得率和转化率的影响,并在此基础上进一步考察培养基中其它成分对(R,R)-2,3-丁二醇发酵的影响。【结果】优化后的培养基组分为玉米干粉140g/L,酵母粉30g/L,Na_2HPO_4 3g/L,KH_2PO_43g/L,(NH_4)2SO_42g/L,MgSO_40.8g/L,微量元素溶液2mL/L。使用优化后的培养基进行同步糖化发酵,发酵50h后(R,R)-2,3-丁二醇产量达到56.28g/L(光学纯度为98.3%),对葡萄糖的得率为0.44g/g,产率为1.13g/(L·h)。【结论】(R,R)-2,3-丁二醇生产技术低价高效,可为其工业化生产提供参考。