肾综合征出血热患者促红细胞生成素的检测及临床意义探讨

本研究测定28例肾综合征出血热(HFRS)患者的血浆促红细胞生成素(EP)水平,17例病人同时检测BUN及Hb,发现HFRS患者病程各期EP水平有较大变化,低血压期(38.6±19.5mu/ml)和少尿期(33.8±23.5mu/ml)明显下降,与对照组及发热期、多尿期比较有明显差异,EP与BUN呈负相关。本研究提示HFRS患者中血浆EP水平与肾损害程度有平行关系,EP测定可能对该病程进展的了解有所帮助。     

呼伦贝尔市啮齿动物携带汉坦病毒的基因分型研究

为了研究内蒙古自治区呼伦贝尔市啮齿动物中汉坦病毒(HV)的型别及携带病毒情况,采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原,用RT-PCR法扩增阳性标本中HV的S(620~999nt)片段,使用clustalX(1.83)以及Phylip3.63构建系统发生树进行分型研究。结果表明,在呼伦贝尔市HFRS疫点共捕获啮齿动物185只,在7份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中6只为黑线姬鼠,1只为大林姬鼠,病毒携带率为3.78%。扩增到其中6份HV抗原阳性样品中S片段(620~999nt),分析获得的序列表明与现有的HTNV有最高的同源性,均为HTNV。其中NAa90、NAa118、NAa121和NAp137这4株病毒与分离自黑龙江黑线姬鼠的Bao14株分在同一分支,与病毒的亲缘关系最近,而NAa78、NAa100这2株病毒构成另一分支,与A9株的同源性为94.5%~95.5%,用部分M(2001~2301nt)片断的核苷酸序列构建的系统进化树与S片段的结果一致。结论:呼伦贝尔市的黑线姬鼠与大林姬鼠携带不同亚型的HT-NV,表现出HTNV在同一地区的遗传多样性。     

50例中国人IX因子基因的限制性片段长度多态性

用IX因子基因内探针F9(VⅢ)对TaqI,BamHI和EcoRI酶切的50例中国人基因组DNA进行杂交分析。结果表明,所有个体经TaqI酶切的杂交片段为4.5kb和1.8kb,BamHI和EcoRI酶切的杂交片段分别为23kb和5.0 kb。基因组DNA样本中未发现限制性片段长度多态性(RFLP),这与欧美国家的民族群体中存在着IX因子基因内TaqI和BamHI的RFLP的结论不同。造成不同种族间DNA水平差异的原因,很可能与长期在不同地理环境中的进化适应有关。     

籼稻93-11和粳稻日本晴DNA插入缺失差异片段揭示的水稻籼-粳分化

碱基的插入/缺失(InDel)引起DNA序列变化并形成了DNA片段长度多态,可以用作遗传标记.为了评价基于籼稻93-11和粳稻日本晴全基因组序列比对获得的差异片段而设计的InDel引物在鉴定籼稻和粳稻两种生态型以及研究稻属不同物种之间亲缘关系的意义,采用45对InDel引物,对来自亚洲10个国家的49份籼稻、43份粳稻品种和24份野生稻进行了检验.结果表明,其中41对InDel引物鉴定籼稻或粳稻品种的准确率高于80%.主成分分析散点图显示:籼稻与粳稻存在明显的遗传分化;含AA基因组的野生稻物种与籼稻品种存在较近的亲缘关系;非AA基因组的野生稻物种不存在明显的籼-粳分化.并且证明了基于籼稻93-11和粳稻日本晴全基因组序列比对获得的InDel差异片段设计的引物可以用于栽培稻籼稻和粳稻品种的鉴定以及籼-粳分化问题的研究,及探索稻属不同物种间的亲缘关系.     

中国漠王族干标本DNA提取及部分类群发育关系

为了降低昆虫分子系统学研究中的成本,提高资源利用率,本实验利用干制标本提取基因组DNA.通过对河北大学馆藏30年的漠甲亚科不同保存期干标本与液浸标本DNA的提取和特定基因片段PCR(聚合酶链式反应)扩增,获得一致效果.通过细胞色素B(Cytb)基因片段序列信息构建系统树并与传统分类学做比较,探讨了漠王族部分种类的系统进化关系,研究结果支持Reitter(1893)建立的Platyopini和Pimeliini是2个独立族的观点,而不同意Beutle等(2005)将它们合并为1个族的观点.研究结果为利用鞘翅目昆虫干标本进行分子系统学研究提供了借鉴.     

急性脑梗死患者hs-CRP含量的变化、临床意义及相关性研究

目的探讨急性期脑梗死患者高敏C反应蛋白（hs-CRP）含量的变化和临床意义,以及其与传统脑梗死危险因素（如血压、血脂、血糖等）的关系,为脑梗死的治疗和判断预后提供实验依据.方法用全自动生化分析仪测定53例脑梗死患者发病3 d内的hs-CRP水平,部分患者第7天复查hs-CRP,同时记录患者入院时的神经功能缺失评分（CNDF）、年龄、收缩压、舒张压、血脂、血糖、纤维蛋白原.同时测定23例有脑梗死危险因素而未发生脑梗死的患者（对照A组）及30例健康人（对照B组）的hs-CRP水平.结果急性脑梗死组比对照组A、对照组B的hs-CRP明显升高（P〈0.01）,对照组A比对照组B的hs-CRP增高,差异有意义（P〈0.05）;急性脑梗死组与复查组hs-CRP值比较,差异无显著性（P〉0.05）,复查组与对照组A、对照组B比较,差异有意义（P〉0.05）;重型脑梗死的hs-CRP水平明显高于中型、轻型（P〈0.05）,中型脑梗死的hs-CRP水平高于轻型,差异有意义（P〈0.05）,作Pearson相关分析发现,hs-CRP与病情轻重呈正相关关系;hs-CRP与收缩压、纤维蛋白原、血糖、总胆固醇呈正相关关系,而与年龄、舒张压、甘油三酯、高密度脂蛋白、载脂蛋白AI、载脂蛋白B无相关性；以hs—CRP为应变量，其他指标为自变量的多元回归分析显示，脑梗死、FIB、血糖、收缩压是hs-CRP的主要影响因素，差异有显著性意义．结论hs-CRP可作为判断病情的一种手段，与脑梗死的危险因素密切相关，可以作为脑梗死发生的一种预测因子．hs—CRP与收缩压、纤维蛋白原、血糖、总胆固醇呈正相关关系，是优于其他因素的综合性的判断指标．     

88例不同孕周胎盘早剥诊治临床分析

目的探讨不同孕周胎盘早剥对妊娠结局的影响.方法回顾分析上海交通大学医学院苏州九龙医院88例不同孕周胎盘早剥患者胎盘早剥发生的类型、相关危险因素及母婴结局.结果 88例胎盘早剥在孕中期与孕晚期发生胎盘早剥的比例是15 73,孕晚期重型胎盘早剥发生率为8.95%,诱因与妊娠期并发症、胎膜早破、外伤及产程中使用宫缩剂等有关;孕中期重型胎盘早剥发生率为15.38%,诱因与外伤、胎膜早破、医源性等因素有关.结论孕中期重型胎盘早剥发生率高,病情凶险,预后相对较好;孕晚期轻型胎盘早剥发生率高,应及时诊断处理,从而降低围生儿的死亡率,改善母婴结局.     

三种罗布麻干燥叶片基因组DNA的提取方法

采用Qiagen的植物基因组DNA提取试剂盒并加以改进,首次从不同季节采收、不同干燥方法保存的三种罗布麻(罗布红麻、大叶白麻和白麻)干燥叶片中提取出基因组DNA.提取的基因组TE溶解液的OD260/OD280 值多在1.7～1.9范围内,电泳呈现单条带,核基因组的ITS片段、叶绿体基因组的trnL内含子和trnL-F非编码区片段的PCR扩增条带清晰并能进行DNA测序,这表明基因组DNA质量较好,可以满足后续分子生物学实验的要求.本研究为罗布麻等中药材的进一步分子生物学研究提供了必要的技术基础.     

超低温冻藏牛奶中牛基因组DNA的提取方法

采用不同的解冻方法以及牛奶体细胞分离与SDS苯酚法相结合的手段,分离提取-80℃冻藏牛奶中牛基因组DNA,利用超微量核酸分析仪和琼脂糖凝胶电泳法分别对DNA浓度、纯度及分子量大小进行检测,采用PCR技术扩增牛特异性基因序列片段进行DNA质量鉴定。结果表明,"两步法"解冻提取的牛基因组DNA的质量优于"一步法"和"三步法",且该方法所提取的DNA浓度为(52.46±2.40)μg/mL,DNA纯度为1.85±0.80,条带较清晰;PCR扩增证实这些DNA可以成功扩增出729bp的牛特异性基因序列片段。本研究成功优化了牛奶中DNA的分离提取方法,筛选出了冻藏牛奶的适宜解冻方法,建立了一种新的超低温冻藏牛奶中牛基因组DNA提取方法。     

高效液相色谱法分析宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者的血浆氨基酸变化

 利用高效液相色谱（HPLC）代谢组学技术检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及健康人血浆游离氯基酸含量,探讨宫颈癌及宫颈上皮内瘤变患者血浆游离氯基酸含量的改变及其临床意义。收集新疆医科大学第一附属医院病理确诊的26 例宫颈上皮内瘤变（CIN）患者、22 例宫颈癌（CSSC）患者及35 例健康人血液标本,应用偏最小二乘判别分析法（PLS-DA）对HPLC 谱数据进行模式识别分析,将其结果与健康人血浆游离氯基酸进行比较。结果表明,与健康人相比,CIN 和宫颈癌患者血浆存在明显的氨基酸代谢异常。天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、牛磺酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸含量自健康人、宫颈上皮内瘤变到宫颈癌呈下降趋势,且以宫颈癌血浆氨基酸含量下降最为显著,差异具有统计学意义（P<0.05）;而精氨酸和苏氨酸在宫颈上皮内瘤变血浆中较健康人明显增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。由此得出,肿瘤细胞可能选择性地从血浆中摄取特定氨基酸来满足自身不同阶段的生长需求。     

血清CysC,Hcy及PTH水平对慢性肾衰竭患者的临床作用

目的探讨慢性肾衰竭(CRF)患者血清胱抑素C(Cys C)、同型半胱氨酸(Hcy)及甲状腺激素(PTH)水平变化的临床作用及意义.方法筛选CRF患者129例作为CRF组,并选取同时期健康体检者129例为对照组,CRF组患者入院后针对病情给予相应治疗,检测CRF组治疗前后血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、Cys C、Hcy及PTH水平变化,分析不同分期CRF患者各指标的水平差异,并与对照组进行对比分析,分析Scr,BUN与Cys C,Hcy及PTH的相关性.结果 CRF组患者治疗前血清中Scr,BUN,Cys C,PTH和Hcy指标与对照组比较明显偏高,差异具有统计学意义(P0.05);CRF组患者接受治疗后上述各指标均明显降低,与治疗前比较差异具有统计学意义(P0.05);接受治疗的CRF组患者血清中各项指标未能达到对照组正常水平.CRF组患者血清各指标随分期发展呈递增趋势,由低到高分别为:肾功能代偿期、肾功能不全期、肾功能衰竭期、尿毒症终末期,各期比较差异均具有统计学意义(P0.05);CRF组患者的Scr,BUN经Pearson相关性分析显示其水平分别与Cys C,Hcy,PTH的水平呈正相关.结论 Hcy,Cys C及PTH水平可以特异性的反映CRF患者肾病严重程度及病程,准确判断患者疾病发展情况,为CRF患者的临床诊断提供参考.     

小麦白粉病对小麦CO2同化量的影响

本文用差动式CO_2红外分析仪在田间直接测量了小麦白粉病(Erysiphe graminisD.C.f.sp.tritici)对不同生育期小麦单叶CO_2同化量的影响,结果表明:当白粉病严重度较小时,小麦单叶的最大净光合速率随严重度的增加呈指数下降;严重度较大时,随严重度的增加,最大净光合速率变化很小。结果还表明:白粉病对小麦CO_2同化量影响最大的生育期是扬花期,对蜡熟期的影响最小,而且健株健叶与病株健叶的最大净光合速率经统计检验无显著差异。     

DNA typing from single hairs

The characterization of genetic variation at the DNA level has generated significant advances in gene and disease mapping, and in the forensic identification of individuals. The most common method of DNA analysis, that of restriction fragment length polymorphism (RFLP), requires microgram amounts of relatively undegraded DNA for multi-locus typing, and hundreds of nanograms for single-locus comparisons. Such DNA frequently cannot be obtained from forensic samples such as single hairs and blood stains, or from anthropological, genetic or zoological samples collected in the field. To detect polymorphic DNA sequences from single human hairs, we have used the polymerase chain reaction (PCR), in which specific short regions of a gene can be greatly amplified in vitro from as little as a single molecule of DNA. We have detected genetically variable mitochondrial and nuclear DNA sequences from the root region of shed, as well as freshly-plucked, single hairs; mitochondrial DNA (mtDNA) sequences have been detected in a sample from a single hair shaft. We have used three different means of DNA typing on these samples: the determination of amplified DNA fragment length differences, hybridization with allele-specific oligonucleotide probes, and direct DNA sequencing.     

慢性肝病患者血浆内皮素含量与肝损害的关系研究

探讨血浆内皮素（ET）在慢性肝病患者中的变化规律以及与肝损害的关系。用放射免疫法测定110例慢性肝病患者及30例正常人血浆ET含量。结果表明，各种类型的慢性肝病患者血浆ET水平均显著高于正常组，且与临床类型有关。ET水平与谷丙转氨酶（ALT）及血清胆红素（SB）呈正相关，与白／球比例（A／G）和凝原酶原时间（PT）呈负相关，与甲胎球蛋白（AFP）无显著相关性。提示ET与肝病的慢性化程度及肝损害程度有关，可作为病情及预后判断的一项指标。     

月季插穗不定根起始的转录组分析和关键基因筛选

为研究月季插穗在不定根发生过程中的关键基因调控机理,利用Illumina平台测序技术对切花月季品种‘卡罗拉’插穗的3个发育阶段(不定根未启动期、愈伤组织形成期和不定根伸长期)插穗基部1 cm皮层进行转录组测序分析,结果表明:月季插穗不定根发生的3个阶段中,在不定根未启动期与愈伤组织形成期之间共筛选出差异表达基因5 033个,其中2 313个基因上调,2 720个基因下调;在愈伤组织形成期与不定根伸长期之间共筛选出差异表达基因1 865个,其中1 332个基因上调,533个基因下调;GO功能分析表明,差异表达基因主要参与生物过程、分子功能和细胞组分3大功能;KEGG富集分析结果表明,差异表达基因主要参与植物激素信号转导、次生代谢产物的合成以及碳水化合物的合成等代谢通路;将月季插穗生根过程中差异性最为显著的8个基因通过实时荧光定量PCR检测其转录水平变化,结果表明: 实时荧光定量PCR的验证结果与转录组测序结果基本一致.     

Production of transgenic blastocyst of sheep by somatic cell cloning

Five samples from primary cultures of five sheep ovarian granulosa cells were transfected by pEGFP- N1 DNA. Five transgenic positive cell lines, each from one of the five samples above, were used as donor nuclei for somatic nucleus transfer. A total of 352 in vitro matured and enucleated sheep oocytes were fused electrically with transgenic granulosa cells and 329 reconstructed embryos were obtained after activation by Ionomycin/6-DMAP, and these embryos were cultured in SOFaaBSA medium for 7 d. The result shows that 312 embryos (94.8%) had gone through cleavage and among them 63 (19.1%) had developed to the blastocyst stage. Expression of GFP gene was detected in various stages of early embryonic development by sampling randomly. Blastocyst rates given by the four cells treated with 0.5% FCS starvation was 19.6% (55/280) and it had not shown difference significantly (P＞0.05) with the result obtained with another cell line that had not gone through serum starvation (16.3%, 8/49). This experiment indicates that sheep transgenic embryos up to the blastocyst stage can be produced effectively by the combination of gene transfection in somatic cells in culture and somatic cell cloning.     

吸烟的重金属危害与DNA损伤

目的 探讨习惯性吸烟对血浆内重金属含量变化以及DNA损伤的影响.方法 湘南学院94名健康大学三年级男生,20名不吸烟者（对照组,C组）;74名吸烟者,按照吸烟数量分为E1组（≤20支/周）,E2组（＞20支/周）;测定每个大学生血浆内汞、镉、铅及8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的含量,并比较了组间有无差异.结果 C组,E1组,E2组血浆中：①汞含量分别为0.022±0.016、0.036±0.018、0.058±0.013 μmol/L;镉含量分别为0.012±0.008、0.020±0.010、0.031±0.013 μmol/L;铅含量分别为0.209±0.028、0.251±0.018、0.272±0.032 μmol/L,三组之间差异均有统计学意义（P 〈 0.01）;②8-OHdG分别为204.23±28.48、354.84±36.13、517.15±19.74 μg/L,三组之间差异有统计学意义（P 〈 0.01）;③吸烟者吸烟指数与血浆中镉、铅及8-OHdG的含量均呈正相关（r分别为0.646、0.520、0.743,P 〈 0.05）.结论 习惯性吸烟能够导致机体重金属的集聚性中毒,并且伴有机体DNA的损伤.随着吸烟量与吸烟时间的累积,这种有害效应的危险性也将显著增大.     

实验动物雪貂阿留申病病毒核酸检测方法的建立

目的 建立阿留申病病毒PCR检测方法,以用于实验动物雪貂阿留申病病毒的检测。方法 参考Genebank中阿留申病病毒核酸VP2基因序列设计一对引物,建立PCR检测方法,进行特异性、敏感性测试,并对实验雪貂粪便样品进行筛查。结果 测序结果显示,使用设计的引物可特异性地扩增获得阿留申病病毒的VP2中531 bp基因片段;在常见实验动物DNA病毒,小鼠多瘤病毒、小鼠细小病毒、犬细小病毒、疱疹病毒、鼠痘病毒、仙台病毒、小鼠腺病毒中均未扩增出目的条带;以目的片段核酸为模板测试该方法敏感性,检测下限达到90. 6 copy/μL。应用该方法对39份雪貂粪便样品进行检测,未检测出阿留申病病毒核酸阳性。结论 本研究建立的方法具备一定的特异性和敏感性,可作为实验动物雪貂中阿留申病病毒感染病原筛查的方法。     

溃疡病猕猴桃和健康猕猴桃根际土壤细菌群落结构

从湘西永顺县猕猴桃基地分别采集萌芽期(3月)、生长期(6月)和成熟期(9月)溃疡病猕猴桃和健康猕猴桃根际土壤样品,采用宏基因组测序技术探究了土壤样品中细菌群落结构和种群丰度.结果发现：虽然3个时期健康猕猴桃和病患猕猴桃根际土壤的细菌群落结构和种群丰度存在一定差异,但优势属主要包括Acidobacteria类群、芽单胞菌属、Gaiella等.其中假单胞菌属细菌的种群丰度随生长期延长呈现出先上升后下降的规律,与猕猴桃溃疡病发生进程吻合,提示假单胞菌属细菌可能是猕猴桃溃疡病发生的传染源.此外,黄杆菌科和丛毛单胞菌科细菌在病患猕猴桃土壤样品中丰度高于健康样品,推测其与猕猴桃溃疡病的发生存在正相关关系;红螺菌科、高温单孢菌科,芽孢杆菌属和链霉菌属细菌在健康猕猴桃土壤样品中丰度高于病患样品,推测其在猕猴桃溃疡病发生中起拮抗作用.