多种体系中黄连素和NAC抗氧化活性的研究

采用硫代巴比妥酸比色法,彗星电泳,SDS-PAGE法检测了黄连素与NAC单独或联合时对脂质过氧化、DNA损伤、蛋白质氧化降解的保护;用邻苯三酚自氧化法、甲基紫法和DMPD·+法检测了二者对超氧阴离子、羟自由基和DMPD·+自由基的清除能力.结果表明,黄连素具有良好的抗氧化效果,且呈浓度依懒性.黄连素浓度为30μmol/L时对超氧阴离子清除率达到22.01%,150μmol/L时接近100%.在与NAC联合后,作用强于二者单独作用的效果,但稍低于二者单独作用的叠加.黄连素在清除羟自由基,浓度为10μmol/L时,清除率已达到95%,联合NAC作用后,却显示了负协同效应.相比而言黄连素对DMPD·+的清除能力较弱,黄连素浓度为80μmol/L时,对DMPD·+自由基的清除率为3.6%,而NAC与黄连素联用后,清除活性远高于两者的单独加和.以上结果均呈现出黄连素显著的抗氧化活性.     

番茄红素的抗氧化活性研究

番茄红素是最主要的类胡萝卜素,且具有多种生理活性.为了促进番茄红素在医药方面的应用,通过铁氰化钾法、脱氧核糖降解法、邻苯三酚自氧化法以及硫代巴比妥酸比色法检测番茄红素的还原力,以及对羟自由基、超氧阴离子的清除作用和对脂质过氧化的抑制作用;用MTT法、SDS-PAGE法以及毛细管电泳检测番茄红素对细胞、蛋白质以及DNA氧化损伤的保护作用,用槲皮素为对照,研究番茄红素的抗氧化活性.结果表明,番茄红素具有一定的还原力和较强的自由基清除能力,对羟自由基和超氧阴离子的EC50分别为0.02和69.31μmol·L-1;抑制脂质过氧化的IC50为20.8μmol·L-1,在浓度为5μmol·L-1时对细胞、DNA的氧化损伤具有明显保护作用,且活性均比槲皮素强.表明番茄红素具有较强抗氧化活性.     

多种体系中NaHS抗氧化活性的研究

采用邻苯三酚自氧化法、硫代巴比妥酸比色法、DMPD法、甲基紫法和SDS-PAGE法,检测了NaHS对超氧阴离子的清除能力、脂质过氧化的抑制作用、DMPD.+自由基的清除能力、清除羟自由基的能力及蛋白质氧化降解的保护作用.研究结果表明,NaHS在各体系中均具有很强的作用,且呈浓度依赖关系.脂质过氧化的半抑制浓度为22.04μg/mL,对超氧阴离子、DMPD和羟自由基的半清除率分别为3.44、1.26和54.07μg/mL,活性均远高于人工合成抗氧化剂Trolox.对蛋白质的氧化损伤在2μg/mL时已有明显的保护作用,作用也比Trolox强.这些结果表明NaHS在这些反应系统中均表现出突出的抗氧化活性.     

4种植物多酚对生物大分子的保护作用

为了研究多酚类化合物对生物大分子氧化损伤的保护作用,采用MDA测定、SDSPAGE、琼脂糖电泳,检测了4种多酚对由自由基引起的脂质过氧化、蛋白质氧化降解、DNA断裂的保护作用.结果表明:槲皮素在抑制脂质过氧化中作用最突出,在保护蛋白质氧化降解中香草醛作用最强;芦丁在保护DNA的氧化性损伤中最有效.说明4种化合物在不同的抗氧化体系中有不同的活性.     

维生素C和维生素E的联合抗氧化活性研究

维生素C和维生素E具有多种生理活性,也是抗氧化剂,二者联合作用的生化机理研究鲜见报道.本文采用铁氰化钾法、甲基紫法、邻苯三酚自氧化法和DMPD法,检测了维生素C和维生素E单独及联合作用后的还原力、对DMPD·+自由基、羟自由基和超氧阴离子的清除能力;采用SDS-PAGE法和SCGE法检测了二者对蛋白质和细胞DNA氧化损伤的保护作用.结果表明,维生素C和维生素E在各个体系中具有较强的作用,并呈浓度依赖性.维生素C在还原能力、清除自由基能力方面比维生素E强,二者的联合作用大多强于单独作用,表现出一定的协同增效作用.同时,维生素C和维生素E在AAPH引起的蛋白质氧化损伤中也有很好的保护作用,二者联合后作用效果更明显,但在对细胞DNA的氧化损伤中未见协同保护作用.     

多种植物提取物对DMPD自由基清除作用的研究

用DMPD法检测了植物来源的天然产物对DMPD˙＋自由基的清除作用. 结果表明,11种单体化合物和沙棘籽油在此反应体系表现出不同的活性. 黄酮类化合物中槲皮素活性最强,100 μmol/L时清除率为55.76%,芦丁和葛根素居中,分别是16.64%、2.25%,芹菜素最弱,此浓度未检测到清除作用;酚类化合物中阿魏酸的活性最强,100 μmol/L时达96.78%;三萜化合物熊果酸较齐墩果酸作用强,1 μmol/L时检测到清除活性达到最高,分别为23.05%和3.05%;混合物沙棘籽油对DMPD˙＋自由基有一定的清除能力,其半清除浓度为12.84 mg/mL. 此结果为这些植物来源化合物发挥抗氧化作用的合理浓度范围及进一步应用提供了一定的依据.     

姜黄素在生化和细胞体系的抗氧化与促氧化作用

采用3个生物化学反应体系及细胞学方法探讨姜黄素的抗氧化或促氧化作用.甲基紫法检测显示,姜黄素在低浓度(1～5μmol·L~(-1))时清除羟自由基活性随浓度升高而增强,但浓度达7μmol·L~(-1)时作用反而下降.在大鼠肝微粒体脂质过氧化实验中,姜黄素浓度在0.01～100μmol·L~(-1)范围内抑制作用随浓度升高而升高,铜离子的加入增强了其低浓度(0.01～1μmol·L~(-1))的抑制作用,高浓度(10～100μmol·L~(-1))时抑制作用减弱.偶氮二异丁脒盐酸盐(AAPH)降解蛋白质实验表明,100～200μmol·L~(-1)的姜黄素可浓度依赖性地保护牛血清白蛋白(BSA)降解,铜离子的加入使其保护作用明显减弱.上述结果说明,姜黄素抗氧化作用在不同生化体系中差异很大,除与其浓度相关外,也与环境中其他因素如铜离子的存在与否有关.姜黄素处理人脑胶质瘤细胞U87时,Hoechst 33258荧光染色与AO/EB双染检测结果显示,H_2O_2单独作用及较低浓度姜黄素均可以引起细胞核凝集,而二者联合使用加剧了核凝集等细胞凋亡的特征.彗星电泳法检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC) DNA损伤时,也发现姜黄素预处理加剧了H_2O_2的氧化损伤,加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)后,损伤作用减弱,提示在此浓度范围内姜黄素具有促氧化特性.这些结果说明,姜黄素在几种生化体系中具有不同的抗氧化作用,但在两种细胞中都具有促进H_2O_2的氧化作用,显示姜黄素具有通过促氧化作用杀死细胞的潜力.     

南瓜醇提物对DNA损伤的保护及体外抗氧化研究

采用琼脂糖凝胶电泳技术,检测南瓜醇提物(ethanol extract from pumpkin,EEP)对因紫外线照射过氧化氢(H2O2)产生羟自由基(·OH)而引发质粒pUCl8 DNA链断裂的保护作用.用化学体系模拟法测定EEP对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH·)和·OH的清除能力;将Fe3 还原成Fe2 的能力以及在β-胡萝卜素/亚油酸自氧化体系中的总抗氧化能力.结果表明,EEP在浓度为12.0 mg/mL时能有效保护DNA的氧化损伤,对DPPH·和·OH的清除能力较强,IC50值分别为18.8 mg/mL和44.9 μg/mL时有显著的还原力和总抗氧化力.EEP具有较强的体外抗氧化活性.     

高粱红色素的体外抗氧化研究

为研究高粱红色素的体外抗氧化活性,测定了高粱红色素对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH·)、超氧自由基(O2-·)和羟自由基(·OH)的清除能力,还原力,对Fe2+诱导的脂质过氧化反应和β-胡萝卜素/亚油酸自氧化体系的抑制作用.结果表明,高粱红色素对DPPH·有较好的清除能力,能很好地清除O2-·和·OH,对Fe2+诱导的脂质过氧化有一定的抑制作用,对β-胡萝卜素/亚油酸自氧化体系有明显的抑制作用,可见高粱红色素具有良好的抗氧化能力,除作为色素使用外,也可作为抗氧化剂使用.     

不同浓度铁离子对栅藻生理生化特性和生长的影响

研究了不同浓度铁离子对栅藻生长和藻细胞抗氧化系统的影响.分析测定了培养基初始Fe3+分别为0,1.2×10-3,1.2×10-4,1.2 ×10-5,1.2×10-6,1.2×10-7 mol·L-1时栅藻的细胞密度、生物量、蛋白质含量、总脂产量及脂肪酸组成,并研究了不同浓度铁离子对栅藻细胞的抗氧化系统的影响.实验结果表明,当培养基中初始铁离子浓度为1.2×10-4 mol·L-1时最适合栅藻生长和蛋白质合成,蛋白质含量达到最大为97.33 μg·mL-1;当初始Fe3+浓度为1.2 ×10-5 mol·L-1时,栅藻细胞总脂占干质量最高达38.60％;C18∶ 2和C18∶3占总脂肪酸的比例随Fe3+浓度增加而降低.当Fe3+浓度达到1.2×10-3 mol·L-1时,栅藻的生长受到抑制.与对照组(培养基不添加铁离子)相比,不同浓度铁离子使栅藻总抗氧化能力增加,超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性有不同程度的提高,羟自由基能力受到不同程度的抑制.