饥饿对垂体催乳素分泌的影响及其机理的研究

早在五十年前已注意到在饥饿时垂体发生明显的改变并由此续发机体的一系列功能紊乱,但其详细机理则迄今仍未阐明。由于自然界的、社会经济的或病理的原因造成饥饿或营养不足,仍然是当今世界面临的一个现实问题,研究饥饿对垂体的影响及其发生机理,对于深入认识其规律和寻求有效的促进康复的措施,显然仍有理论和实践的意义。在垂体前叶的各     

应用混合群体的连锁不平衡信息实现基因定位的解析率分析

根据混合群体连锁不平衡值随世代的衰减速率，进行基因高解析率定位分析的模拟实验。结果表明，基因间重组率愈小，混合距今的世代数愈少，利用连锁不平衡信息进行基因定位的效高愈高；在相关基因座间呈紧密连锁条件下，重组率估计的期望值呈向上有偏性。在混合发生后的2－5个世代内，重组率估计值的偏差较大；10－20世代范围内可以得到较高的解析率。同时给出了重组率估计值的均值和置信区间随世代数的变化。     

颌的起源:发育生物学假说与化石实证的交叉

从分子生物学、发育生物学与古生物学等多角度评述了脊椎动物颌的起源研究中的最新进展.发育遗传学的一系列进展促成了颌演化异位理论的提出,即颌的起源,是在上皮-外胚层间质细胞相互作用中,由于口腔发育调控基因的异位表达所导致的一次演化上的创新.在无颌类七鳃鳗的发育过程中,外胚层间质细胞的向前生长由于受到中央鼻垂体板的阻挡,无法像有颌类那样发育成颌和颅桁.因此,该理论推测鼻垂体复合体的分裂是颌发育的最根本的先决条件,应该发生在颌的起源之前.鼻垂体复合体的分裂可能也是促成有颌类双鼻孔起源的一次关键的演化事件,它允许刺猬基因家族调控鼻基板的发育,从而形成侧位的鼻囊.盔甲鱼类是4.35~3.7亿年前生活在中国和越南北部的一种地方性色彩很浓的"甲胄鱼类".盔甲鱼类曙鱼脑颅的三维复原显示其成对的鼻囊位于口鼻腔两侧,而垂体管向前开向口鼻腔中部,三者彼此分开.因此,盔甲鱼类化石提供了无颌类鼻垂体复合体在颌起源之前分裂的关键证据,从而佐证了颌演化的异位理论.藉助于同步辐射X射线断层扫描技术,本文进一步揭示出盔甲鱼类可能已经具有了有颌类特有的颅桁衍生构造(譬如眶鼻间隔、筛骨板),为探讨脊椎动物脑颅在颌的起源之前如何重组提供了关键资料.在探讨颌的起源及相关问题上,盔甲鱼类较之于骨甲鱼类在很多方面是一个更好的对比模型.盔甲鱼类脑颅所揭示出的一些与有颌类共有的进步性状,表明盔甲鱼类有可能取代骨甲鱼类成为有颌脊椎动物的姐妹群.本研究提供了一个发育生物学假说与古生物化石实证相互交叉的有趣案例.     

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因克隆及其原核表达载体构建、表达

通过ＰＣＲ方法克隆出大肠杆菌株Ｈ－３０的胞嘧啶脱氨酶基因，并将其起始密码子ＧＴＧ突变为ＡＴＧ，构建了ＣＤ基因的原核重组表达载体ＰＢＶ２２０－ＣＤ，通过测定胞嘧啶脱氨酶活性筛选出ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０ＣＤ－１１５－氟胸嘧啶对ＣＤ活性克隆有杀灭毒性，ＤＮＡ序列分析显示ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０－ＣＤ－１１较基因文库中所报道的ＣＤ基因存在１６个位点碱基改变，引起肽链中氨基酸改变的位点有５人。     

利用GATA-2调控成分制备组织特异性表达GFP的转基因斑马鱼

ＧＡＴＡ－２是在多种血细胞和神经细胞表达的一种转录因子，调控血细胞和神经细胞的分化。利用斑马鱼ＧＡＴＡ－２基因５’侧翼调控序列和绿色荧光蛋白基因，获得了只在中枢神经细胞表达ＧＦＰ，或在神经细胞和表层细胞都表达ＧＦＰ的转基因斑马鱼种质系，同时还进一步证实了ＧＡＴＡ－２基因在胚胎发育中的时空表达谱。     

通过叶绿体基因工程表达聚3-羟基丁酸酯

构建了含phbB,phbA,phbC和ααdA基因表达盒的叶绿体整合及表达载体，通过基因枪轰击法转化烟草，对具壮观霉素抗性的植株进行PCR和Southern等分析，确证外源基因已整合到叶绿体基因组中，同时测定了其同质化程度。Northern点杂交、RT－PCR分析结果表明，叶绿体型转基因植株中目的基因在转录水平的表达明显高于核转化植株中相应基因，并且未观察到基因沉默现象，叶绿体型转基因植株还具有环境安全性好、底物丰富、产物区域化等优点，表明叶绿体基因工程在转基因植物生产聚－3－羟基本丁酸酯(PHB）方面极具潜力。     

猪leptin受体基因OBR的表达检测与部分片段克隆分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的方法分析了猪ｌｅｐｔｉｎ受体ＯＢＲ基因在１１种组织和器官（心肌、肺、肝、脾、肾、肌肉、卵巢、脂肪、大脑、垂体、下丘脑）中的表达分布，结果表明ＯＢＲ基因在１１种组织和器官中都有表达，其中在肺、肝和下丘脑的表达高于其他组织。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析结果显示，编码长细胞内区的长片段表达形式只在下丘脑组织中表达，而已有证据表明只有编码长细胞内区的长片段表达形式才具有     

抑制COM与CCoAOMT调控植物木质素的生物合成

咖啡酸－3－O－甲基转移酶（COMT）与咖啡酰辅酶A－3－O－甲基转移酶（CCoAOMT）基因分别编码植物木质素生物合成中不同底物水平的甲基化酶，构建了它们的单价与双价反义表达载体，并用农杆菌介导转化烟草。PCR－Southern检测表明外源基因已整合到烟草基因组DNA中；Northern点杂交结果表明外源基因在烟草中以转录水平表达。对表达单个及两个甲基化反义基因的成熟转基因植株的木质素含量测定结果表明，反义抑制COMT与CCoAOMT的表达均使转基因植株的木质素含量下降，但单独抑制CCoAOMT表达引起的下降幅度明显大于COMT，并且两个基因同时被抑制时，降低幅度更大，说明它们具有协同效应，组织化学染色结果表明COMT被抑制引起紫丁香基（S）木质素显著减少。上述结果表明，抑制植物内源CCoAOMT表达是反向调控转基因植物木质素生物合成及改良造纸资源植物的有效途径。     

距今42~18 ka腾格里沙漠古湖泊及古环境

腾格里沙漠在距今约42－18^14C kaBP曾形成总面积超过20000km^2的湖泊，古湖泊的形成开始于42－37kaBP；在35－22kaBP期间古湖泊出现最高水位且居高波动，形成“腾格里大湖期”，22－20kaBP期间湖水位一度下降，但在20－18．6kaBP湖面再次有所升高，之后水位下降，至18kaBP大面积湖泊消失。大湖期湖泊以淡水至微咸水为特征，推测当时腾格里沙漠及邻区降水量显著增加；年均降水量比现今高250－350nm，年均气温较现今高1．5－3．0℃，为一较温暖的半湿润气候环境。     

转基因小鼠中糜酶在心脏血管紧张素Ⅱ形成中的作用

为研究人心糜酶（ｈＣｈｙｍａｓｅ）在心脏血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ，ＡｎｇⅡ）形成中的作用及在心肌重塑过程中的意义，建立了ＭＬＣ２－人心糜酶转基因小鼠，用ＲＴ－ＰＣＲ方法分析了糜酶基因的组织特异性表达和心脏中Ⅰ，Ⅲ型胶原基因的转录表达，并用放射免疫法检测了心脏糜酶及血管紧张素转换酶（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ，ＡＣＥ）活力以及心脏和血浆的ＡｎｇⅡ含量，用     

利用cDNA微阵列技术筛选和鉴定NYD-SP9基因

运用cDNA微阵列杂交技术从人睾丸cDNA文库中筛选出人蛋白激酶基因，命名为NYD－SP9，NYD－SP9在成人睾丸中表达水平比胚胎睾丸高10倍，Southern印迹杂交结果表明，这一基因高表达于睾丸，而低表达于卵巢，cDNA序列的蛋白质基序磷酸化位点分析也进一步提示，它有可能参与精子发生中的信号转导过程，由于这些磷酸化位点的位置彼此很接受，在这些位点之间可能存在相互作用以调控精子发生，该基因含有一个保守的穿膜功能结构域，提示经翻译后为一跨膜蛋白，以上实验结果表明，蛋白激酶基因NYD－SP9可能在男性生殖细胞分化过程中发挥一定作用。     

利用修饰的T7 RNA聚合酶基因建立一种植物耦联表达系统

通过基因修饰，在T7RNA聚合酶基因的5′端添加了SV40大T抗原的核定位信号编码序列，利用CaMV35S启动子和修饰的T7RNA聚合酶基因构建了植物表达载体pBBT7。同时，利用T7启动子和β－葡糖醛酸酶基因（gusA）构建了另一个植物表达载体pBTG。通过农杆菌介导法将上述两个植物表达载体共转化烟草，共转化植株表现出较强的β－葡糖醛酸酶基因（β－glucuronidase，GUS）活性，上述结果表明T7RNA聚合酶－T7启动子耦联表达系统在植物中是有效的，说明已成功构建了一种植物耦联表达系统。     

18α(H)-新藿烷及17α(H)-重排藿烷类化合物的地球化学属性与应用

以下辽河西部凹陷原油为例，探讨了１８ａ（Ｈ）－新藿烷及１７ａ（Ｈ）－重排藿烷类化合物的地球化学属性与应用意义．新藿烷及重排藿烷类化合物相对丰度可用作判识原油成熟度的有效指标，但需以源岩沉积－有机相相近为前提，其有效应用范围为成熟～高成熟阶段．新藿烷及重排藿烷参数同时具有成熟度和沉积－有机相双重地球化学属性，故可作为油源对比和原油族群划分的有效参数．沉积介质条件和粘土矿物对重排藿烷类前身物的形成和原始丰度具有重要控制作用．原油中检出一新系列化合物，初步研究认为其可能为另一重排藿烷型系列化合物，其分布特征和地球化学属性与１７ａ（Ｈ）－重排藿烷系列相近．     

基质金属蛋白酶基因MMP20在人食管癌发生发展中的表达差异分析

研究了基质金属蛋白酶基因MMP20在人食管癌发生发展过程中的表达变化。用RT－PCR检测配对食管癌手术标本及食管癌早期活检组织中MMP20基因表达，用免疫组织化学染色和Western印迹检测表达的MMP20蛋白。发现MMP20基因在mRNA和蛋白质水平上均为食管部过表达，MMP20基因的表达在食管癌发生早期未见明显升高，在浸润癌期明显过高表达，提示在食管癌发展中MMP20过表达与癌细胞浸润相关，是食管癌演进过程中的晚期事件。     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

携带人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因重组腺相关病毒的大量制备与体内外表达研究

构建了一系列携带有人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因（ｈⅨＲ３３８Ａ）及不同调控元件的腺相关病毒 表达载体，并经体外转导不同的细胞系，筛选、优化，挑取高表达质粒及其转导稳定细胞克隆，然后， 以一个携带有腺相关病毒包装蛋白的ｒＡＡＶ/ＨＳＶ杂合病毒包装系统介导进行重组腺相关病毒的大量制 备，建立了可进行产业化制备的技术路线及高滴度、大量制备重组腺相关病毒的技术方法，所获得的重 组病毒滴度达 １．２５ × １０１２病毒颗粒／ｍＬ，然后，利用这一重组病毒，对ｒｈＦⅨＲ３３８Ａ进行离体及在体表达， 获得了 ｒｈＦⅨＲ３３８Ａ在肌细胞系 Ｃ２Ｃ１２及血友病 Ｂ小鼠体内的高效表达，表达峰值分别达（２５５１．３２± ９２．１４）ｎｇ·（１０６细胞）－１·（２４ｈ）－１及４６３．２８ｎｇ·ｍＬ－１，与野生型Ⅸ因子的表达水平（２５６５．７６±６４．３６）ｎｇ· （１０６细胞）－１·（２４ ｈ）－１及４５３．９２ ｎｇ· ｍＬ－１无显著性差异．然而，其凝血活性却成倍增加，约为后者的 ２．４６倍.．将人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因引入血友病 Ｂ基因治疗研究之中，同时，探讨了一个新的包装 系统──ｒＡＡＶ／ＨＳＶ杂合病毒包装系统──在重组ＡＡＶ载体大量制备中的应用     

缺氧伴高碳酸血症大鼠脑微血管通透性改变与纤维连接蛋白的关系

目前认为纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)与微血管通透性变化有关。因此我们设想在缺氧伴高碳酸血症情况下,Fn与脑微血管通透性之间可能存在某种内在的联系。     

用微卫星标记定位一个未知的小麦抗条锈病基因

条锈病抗生鉴定和遗传分析表明，小麦品系Ｒ５５携带一个显性抗条锈病基因；用微卫星标记和Ｆ３分离群体分组分析法研究表明，该抗条锈病基因们于小麦１Ｂ染色体短臂上，与微卫星分子标记ＷＭＳ１１－１９３ｂｐ，ＷＭＳ１８－１８４ｂｐ紧密连锁，遗传距离均为１．９ｃＭ；据抗源的系谱、亲本抗性及基因位点分析，该基因来源于圆锥小麦，不同于已知的小麦抗条锈病基因，以ＰＣＲ为基础的微卫星标记可方便地用于小麦育种辅助选择。     

烟草花叶病毒及番茄花叶病毒弱毒疫苗N14基因组重组体的构建与侵染性分析

用基因交换的方法将烟草花叶病毒普通株（中国分离物，ＴＭＶ－Ｃｖ和番茄花叶病毒弱毒疫苗Ｎ１４基因组的运动蛋白（ＭＰ）、外壳蛋白（ＣＰ）基因编码区和３＇非编码区嵌合于Ｎ１４和ＴＭＶ－ＣＶ ５＇非编码区和复制酶基因的下游，构建重组病毒克隆ｐＴＮ和ｐＮＴ，并进行体外转录和烟草侵染试验结果 ｐＴＮ和 ｐＮＴ体外转录物对烟草均具侵染性：前者感染枯斑三生烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ．Ｓａｍｓｕｎ ＮＮ），等量感染的枯斑形成数比 ＰＴＭＶ－Ｃｖ少；感染普通烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ． Ｈｕａｎｇｍ－ｉａｏｙｕ，黄苗榆品种），出现典型系统症状，但叶片畸形率较低．后者感染枯斑三生烟，等量感染的枯斑形成数比ｐＮ１４多；感染普通烟仍不出现系统症状．结果表明：重组病毒ＴＮ和ＮＴ仍能在试验用烟草中增殖，前者在普通烟上基本表现为ＴＭＶ－Ｃｖ的强病毒性状，后者在普通烟上表现为Ｎ１４的弱病毒性状； ＴＭＶ－ＣＶ和 Ｎ１４的复制酶与 ＭＰ， ＣＰ和 ３＇非编码区之间为非严紧型连接，两者在类似的各亚基因组之间可进行功能互补．初步推测，Ｎ１４复制酶编码基因的突变区对Ｎ１４的致弱起主要作用；其运动蛋白编码基因的突变区对被侵染烟草     

转mtlD/gutD 双价基因水稻的耐盐性

Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和酶活性检测试验表明，通过农杆菌介导法已经把细菌１－磷酸甘露醇脱氢酶（ｍｔｌＤ）基因和６－磷酸山梨醇脱氢酶（ｇｕｔＤ）基因同时整合进水稻基因组并且在转基因水稻中得到表达．气相色谱分析证明转基因水稻合成并积累了甘露醇和山梨醇．与未转基因对照相比，转基因植株耐盐性明显提高．