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为研究MHCⅡ类基因转录活化因子(CⅡTA)对人类白细胞抗原(HLA)Ⅱ类分子表达的影响,用RT-PCR方法从Raji细胞中克隆到C Ⅱ TA基因cDNA 5'端片段,构建成CⅡTA反义RNA真核表达载体 pcDNA-Ⅱ,基因转移 HLA Ⅱ类分子诱导型表达的 HeLa细胞.经 IFN-γ诱导,发现稳定转染pcDNA-Ⅱ的细胞中HLA-DR,DP和DQ的表达均较转pcDNA3空载体的细胞有显著下降,而 HLAⅠ类分子的表达不受影响.实验证明 CⅡ TA反义 RNA对 HLA Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用,为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据. 相似文献
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转基因马铃薯中病原诱导GO基因的表达及其对晚疫病的抗性 总被引:14,自引:0,他引:14
利用PCR技术从黑曲霉(Aspergillus niger)中扩增并克隆了葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,简称GO)基因,并将马铃薯病原诱导型启动子(Prp1-1基因启动子)与其融合构建了植物表达载体pCAMGO。经农杆菌介导转化获得了转基因植株,Southern杂交显示葡萄糖氧化酶基因整合进马铃薯基因组。该基因的表达及所引起的H2O2的生成由淀粉-KI的显色反应得到证实。用马铃薯晚 相似文献
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蛋白质结构中某些氨基酸的氧化和还原是生物体内对蛋白功能的一种调控方式.甲硫氨酸(Met)被氧化则变为甲硫氨酸亚砜(Met(O)),它可导致所在蛋白质的生物学活性降低或丧失,但肽-甲硫氨酸亚砚还原酶(Peptide methionine sulfoxide reductase, msrA)则可使甲硫氨酸亚砜还原为甲硫氨酸,使其所在蛋白质重新恢复活性.为了研究人体中Met氧化还原的机制,以牛msrA cDNA序列为信息探针,筛选人EST数据库,依据若干同源EST的信息从人cDNA分子库中克隆到一个长1255hp的人MSRA cDNA.该CDNA包含一个长705 bp的可读框,它编码了 235个氨基酸残基.同源性比较表明,该基因与牛和大肠杆菌的msrA基因的氨基酸一致性分别为88%和61%.表达谱分析发现,该基因在人体大多数组织中均有一条长约1.6kb的转录本,并在肾中呈高表达.应用辐射杂种细胞株定位系统(radiation hybrid mapping panel, RH mapping)将该基因精确定位在人染色体8p22~23区带的DSS518和D85550位标之间,由于此前已有Keratolyticwintereryth 相似文献
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一种新的小鼠被毛突变基因定位 总被引:5,自引:1,他引:4
分别尝试用RAPD(随机扩增多态DNA)法和重组率测定法对所发现的被毛突变进行基因定位。结果为所选用的100个10bpRAPD引物中,87个获得了扩增产物,由于所获得的产物与小鼠表现间缺乏相关性,利用RAPD法未能交闰到染色体上。以分布于小鼠11条染色休下的Idh1,Car2,Mup1,Pgm1,Hbb,Es10,Es1,Mod1,Gdc1,Ce2,Es3等生化基因位点为遗传标记,对分别对与CAB 相似文献
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水稻减数分裂相关基因OsDMC1的克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
酵母DMC1基因是一个在减数分裂前期 I表达的减数分裂特异基因,其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的.根据在酵母Dmc1与拟南芥AtDmc1中保守的氨基酸motifs合成的简并性引物,以cDNA作模板,通过套式PCR(nested PCR)和RACEs克隆了水稻中酵母DMC1的同源基因 OsDMC1.OsDMC1全长的 cDNA是 1348 bp,编码 344个氨基酸组成的多肽(OsDmc1). OsDmc1与 Dmc1和AtDmc1的氨基酸序列一致性分别是51.8%和81.7%.OsDMC1在生殖器官中表达量较高,在根中有少量表达,而在叶和幼芽中不表达. Southern blot分析结果表明水稻基因组中有两个拷贝的 OsDMC1. 相似文献
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Gsα是与激活腺苷酸环化酶信号转导途径相关的蛋白质,不同的GsαmRNA是由不同形式的剪接或利用不同的启动子产生的。报道人白血病细胞株中Gsα转录物的一种新型民学剪接。以来自Jurkat细胞株的人白血病文库cDNA及人白血病细胞株HL-60mRNA反转录后的cDNA第一链模板,PCR扩增出Gsα基因完整编码区,DNA序列分析表明,GsαLeu与正常Gsα相比有2个区域发生不改变阅读框架的缺失,一个 相似文献
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热休克基因mRNA定量RT-PCR检测方法的建立及其应用 总被引:11,自引:0,他引:11
广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)不仅在机体的应激保扩、生长发育中起重要作用,而且与疾病的发生密切相关因此,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT-PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义。首先应用DNA重组技术及体外转录体系制备了一种能用作测定hsp70,hsp90α及hsp90βmRNA的复合内参照RNA;然后,通过对反应条件的优化、选择,建 相似文献
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离子束介导转基因提高E.coli UV敏感菌株的DNA损伤修复能力 总被引:12,自引:0,他引:12
以氯化钙制备感受态受体细胞转移法为对照,用离子束介导基因转移技术,将具有高效DNA损伤修复系统的耐辐射异常球菌(D.radiodurans AS1.633)的基因组DNA片段,转入对紫外(UV)辐照敏感的大肠杆菌中。结果表明,转入DNA后的菌株对UV辐射的抗性不仅高于其对应的敏感菌株,而且也高于其对应的敏感菌株的产生菌株,表现为转入DNA后的菌株受紫外辐照的存活率明显提高,代表修复合成的非按期DN 相似文献
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