人脑新EST的分离及其表达特异性分析

为了解离发育和分化的机制，利用差异显著技术从１３和３３周和脑中分离到９０个ＥＳＴ。比较ＧｅｎＢａｎｋ以后发现其中的７４个ＥＳＴ代表新的基因，当中的一些与某些脑发育相关的基因同源。将来自差异显示的７个ＥＳＴ固定在膜上，用来自不同组织的总ｃＤＮＡＲＰＷＳＱＦ ＧＮ ＡＤＷ ＶＳ ＵＱ 进一步鉴定了其在胎儿脑中的差异表达。     

肝部分切除及表皮生长因子迅速诱导PC3基因的表达

２／３肝部分切除后数小时内早期反应基因的表达在肝细胞由Ｇ０到Ｇ１期转变和Ｇ１期进程中起关键作用，利用表达性差异显示分析技术研究了２／３肝部分切除后１ｈ的基因表达差异，序列分析揭示一种由神经生长因子（ＮＧＦ）诱导产生的瞬时早期反应基因ＰＣ３基因可能与肝再生调控有关，进而以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实２／３肝部分切除可迅速诱导ＰＣ３基因的表达，其表达高峰为术后１～２ｈ，ＥＧＦ在原代培养大鼠肝细胞体系中可迅     

一种新的红细胞源性降压因子的作用机制

研究了一种来自红细胞的新的内源性降压因子（ＥＤＤＦ）的降压机制，重点探讨其对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）胞浆游离钙离子及核内钙离子转运的影响，以ｆｌｕｏ－３／ＡＭ作为Ｃａ＾２＋荧光探针，采用激光扫描共聚焦显微镜观察人脐静脉ＶＳＭＣ（ＨＵＶ），钙超载模型大鼠肠系膜ＶＳＭＣ（ＣａＯＭＶ）和正常对照Ｗｉｓｔａｒ大鼠肠系膜培养的ＶＳＭＣ（ＷＭＶ）「Ｃａ＆２＋」ｉ及（「Ｃａ＾２＿」ｎ）的变化；用流式细胞仪测定     

高等真核低频磁场作用后特异反应基因的克隆及鉴定

极低频磁场（ＥＬＦＭＦ）生物学效应的机理研究是当前生物电磁学中迫切需要解决的问题，为探索ＥＬＦＭＦ的特异反应基因及这些基因的结构与功能，用ｍＲＮＡ差异显示技术对受ＥＬＦＭＦ辐照与假辐照的Ｄａｕｄｉ细胞内的ｍＲＮＡ进行了检测，筛选到一个受ＥＬＦＭＦ诱牵ＤＤ片段，反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ鉴定进一步证实系磁场导所致，经克隆测序及与ＧｅｎｅＢａｎｋ同源性比较表明该基因片段（ＭＦ－ＣＡ）是人细     

高等真核细胞受极低频磁场作用后特异反应基因的克隆及鉴定

极低频磁场（ＥＬＦ ＭＦ）生物学效应的机理研究是当前生物电磁学中迫切需要解决的问题．为探索 ＥＬＦ ＭＦ的特异反应基因及这些基因的结构与功能，用 ｍＲＮＡ差异显示技术（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ， ＤＤ）对受ＥＬＦ ＭＦ辐照与假辐照的Ｄａｕｄｉ细胞内的ｍＲＮＡ进行了检测，筛选到一个受ＥＬＦ ＭＦ诱导表达的ＤＤ片段（＞１ｋｂ），反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ鉴定进一步证实系磁场诱导所致．经克隆测序及与ＧｅｎｅＢａｎｋ同源性比较表明该基因片段（ＭＦ－ＣＡ）是人细胞中新发现的受磁场诱导的反应基因。     

血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应

ＰＦ４的Ｃ－末端１３肽和ＴＳＰ１的４２９～４５９片段３１肽通过Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ肽桥设计为融合蛋白ＴＳＦ．采用ｐＧＥＸ－２Ｔ载体在 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中获得了 ＴＳＦ蛋白的高效表达．采用 ＭＴＴ方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验，测定了ＴＳＦ及其相关物ＧＳＴ－ＴＳＦ，ＰＦ４（５８－７０），ＴＳＰ１（４２９～４５９）等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应．结果显示ＴＳＦ特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长，并有明显的剂量依赖关系；非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移；显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成；上述抑制活性ＴＳＦ＞＞ＧＳＴ－ＴＳＦ＞ＰＦ４（５８～７０）＞ＴＳＰ１（４２９～４５９）．ＴＳＦ显著抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长，１．０μｍｏｌ／ｋｇ·ｄ的ＴＳＦ对Ｌｅｗｉｓ肺癌的抑瘤率达到６８．７５％．结果说明ＴＳＦ的重组设计是成功的，ＴＳＦ为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子．     

Melnikov猜想Δ=4情形的一个证明

设Ｇ为一个平面图,Ｖ(Ｇ),Ｅ(Ｇ),Ｆ(Ｇ),δ(Ｇ)和Δ(Ｇ)分别表示Ｇ的顶点集合、边集合、面集合、顶点最小度和最大度.ＮＧ(ｕ)为点ｕ在Ｇ中的邻集,Ｇ[Ｓ]为Ｇ中由ＳＶ(Ｇ)导出的子图.Ｇ中的一个3圈Ｃ3称为Ｇ的一个分离三角形,如果Ｃ3的内部和外部均含有Ｖ(Ｇ)\Ｖ(Ｃ3)中的顶点.Ｇ的边面全色数χｅｆ(Ｇ)是使得集合Ｅ(Ｇ)∪Ｆ(Ｇ)中的相邻或相关联的元素均染为不同色的最少颜色数.由定义,χｅｆ(Ｇ)≥Δ(Ｇ)是显然的.另一方面,Ｍｅｌｎｉｋｏｖ猜想[1]:对任何简单平面图Ｇ,χｅｆ(Ｇ)≤Δ(Ｇ) 3.文献[2,3]给出了下面结果:定理1　若Ｇ为Δ(Ｇ…     

VK3诱导的植物细胞凋亡及其机理

ＶＫ３可诱导烟草细胞的凋亡，表现为：染化体凝集，凋亡小体形成，ＤＮＡ末端断裂、降解形成梯状电泳，此过程伴随特异核酸酶的激活，其活性依赖于Ｃａ＾２＋，Ｍｇ＾２＋，可被Ｚｎ＾２＋和ＥＤＴＡ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ）抑制。ＤＮＡ降解可被ＤＥＶＤ（Ａｃ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ａｌｄｅｈｙｄｅ）抑制。核纤层蛋白降解为３５ｋｕ片段，ＤＥＶＤ，ＰＭＳＦ（Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔ     

小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法，扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因，将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上，构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示，经ＩＰＴＧ诱导，７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原，免疫家兔，首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

植物幼小原胚的电激转化

用电激法将外源报告基因导入植物原胚获得瞬间表达．用酶解和显微解剖法分离出烟草含８～３２个细胞的幼小原胚与含２５０～４００个细胞的球形胚，导入ＧＵＳ和ＧＦＰ基因后，置于ＫＭ８ｐ培养基 １～２ｄ．当电场强度为 ５００～１５００ Ｖ／ｃｍ时，可检测到 ＧＵＳ蓝色反应和 ＧＦＰ绿色荧光，其中幼小原胚在电场强度为 ７５０ Ｖ／ｃｍ时，外源基因瞬间表达频率最高，为 ２．２％，球形胚在电场强度为１２５０ Ｖ／Ｃｍ时表达频率最高为 ５．９％．若以转化细胞占胚细胞总数的比例为有效转化频率，则幼小原胚的有效转化频率约为球形胚的７倍．     

PLT/P（VDF-TrFE）纳米复合材料的热释电性能研究

采用溶胶－凝胶方法制备出ＰＬＴ纳米晶微粉，并用该微粉在超声分散下与Ｐ（ＶＤＦ－ＴｒＦＥ）进行均匀复合，成功地制备了ＰＬＴ／Ｐ（ＶＤＦ－ＴｒＦＥ）纳米复合材料。测定了不同体积分数下样品的介电湿谱；结合ＳＥＭ形貌观察，利用Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ模型较好地解释了复合样品的介电特性；对不同极化电场下复合样品的热释电性能和优质因子进行了研究，结果显示，当极化电场为４５ｋＶ／ｍｍ，样品的优质因子可高达１．７３μＣ     

丙型肝炎病毒多表位抗原在小鼠与家兔中的免疫应答

在丙型肝炎病毒基因组中优选５个具有良好免疫原性的高度保守Ｔ／Ｂ细胞表位，组合成一个ＨＣＶ多表位抗原基因，并与β－并乳糖苷酶基因融合后在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达了具有ＨＣＶ免疫特异性的ＧＺ－ＰＣＸ抗原。     

沙冬青抗冻蛋白的分离、纯化及其理化特性分析

用ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ－５２，丙烯葡聚糖Ｓ３００柱层析，热处理及等速电泳技术分离纯化了热稳定的冬季沙冬青叶片抗冻蛋白（ＡＦＰ），获得了电泳纯的分子量约为５０ｋｕ的ＡＦＰ，经Ｓｈｉｆｆ试剂检验为含糖的ＡＦＧＰ，显微镜观察冰点熔点差异技术和差示扫描量热法（ＤＳＣ）测定了该蛋白热滞活性（ＴＨＡ），用ＤＳＣ测定ＴＨＡ在５ｍｇ／ｍＬ时约为０．３５℃．圆二色性（ＣＤ）分析表明，该ＡＦＧＰ中ａ－螺旋为１１％，反     

利用GATA-2调控成分制备组织特异性表达GFP的转基因斑马鱼

ＧＡＴＡ－２是在多种血细胞和神经细胞表达的一种转录因子，调控血细胞和神经细胞的分化。利用斑马鱼ＧＡＴＡ－２基因５’侧翼调控序列和绿色荧光蛋白基因，获得了只在中枢神经细胞表达ＧＦＰ，或在神经细胞和表层细胞都表达ＧＦＰ的转基因斑马鱼种质系，同时还进一步证实了ＧＡＴＡ－２基因在胚胎发育中的时空表达谱。     

genistein抑制人TNF-α诱导的猪内皮细胞对人单核细胞和自然杀伤细胞的黏附

研究了蛋白质酷氨酸磷酸化在ｈＴＮＦ－α诱导猪主动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）黏附分子Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）和血管细胞黏附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达以及在增强人外周血单核细胞（ＰＢＭｏ）和自然杀伤细胞（ＰＢＮＫ）黏附中的作用，以选择性的蛋白质酷氨酸激酶（ＰＴＫｓ）抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ预处理ＰＡＥＣ，剂量依赖性也抑制了ｈＴＮＦ－α增强的ＰＡＥＣ对ＰＢＭｏ和ＰＢＮＫ的黏附。这种抑制作用发生在     

基因发现史话

基因组革命 （续上）ＤＮＡ测序技术由于揭示了原先并不了解的基因之间的相互联系而立即震惊世界。两个较早的例子是致癌基因ｓｉｓ和ｅｒｂＢ。一个研究组克隆了这些基因并测定了它们的ＤＮＡ序列。同时，另一个主要从事生化研究的小组分离了两种蛋白质──血小板生长因子（ＰＤＧＦ）和表皮生长因子（ＥＧＦ）──并测定了两者的氨基酸序列。令这两个研究组人员惊讶的是，致癌基因的ＤＮＡ序列与这两种控制生长的蛋白质的氨基酸序列几乎完全一致。这就立刻表明，是致癌基因ｓｉｓ和ｅｒｂＢ使正常细胞转变成癌细胞的。 发现这样的联系还只…     

肌肉电针介导VEGF基因治疗大鼠闭塞性血管病

应用电针介导血管内皮生长因子 (VEGF)基因治疗实验性外周血管闭塞症大鼠 ,以RT PCR及免疫组化方法观察VEGF基因的表达 ,通过血管造影技术观察VEGF基因导入大鼠体内后的生物效应 .结果显示 ,电针介导VEGF基因可在大鼠肌肉组织高效表达VEGF ,并可促进局部组织新生血管形成和侧枝循环建立 ,使血流恢复 ,为闭塞性血管病的基因治疗提供一种新的基因转移方法 .     

修正RNA的错误剪接提高转基因表达水平

建立了ＷＡＰ基因调控序列指导的人Ｇ－ＣＳＦ乳腺表达的转基因小鼠,在检测出转基因低表达的基础上,采用ＲＴ－ＰＣＲ从转基因小鼠乳腺ＲＮＡ中获得人Ｇ－ＣＳＦ基因,序列分析表明基因缺失第４外显子,与人Ｇ－ＣＳＦ基因组基因比较,缺失部分含有内含子剪接的供体和受体位点,推断Ｇ－ＣＳＦ的第３和第４内含子亦缺水。重新构建了转基因注射构件,其中删除了Ｇ－ＳＦ第３和第４内含子,用其所建立的转基因小鼠,其乳腺表达的Ｇ－     

hB1F与HNF1协同调控HBV增强子Ⅱ的功能

人Ｂ１结合因子（ｈｕｍａｎ Ｂ１ ｂｉｎｄｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ，ｈＢ１Ｆ）是本实验室克隆到的一个新的转录因子，它能够结合于ＨＢＶ增强子Ⅱ（ＥＮⅡ）的Ｂ１区并反式激活其功能，对ｈＢ１Ｆ和其他反式激活ＥＮⅡ的肝细胞核因子间在功能上的相互关系进行了研究。氯霉素乙酰转移酶（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＣＡＴ）报告基因分析发现，ｈＢ１Ｆ与ＨＮＦ３β，ＨＮＦ４间在激活Ｅ     

大力开发基因药物

大力开发基因药物李载平（中科院上海生化所研究员）没有医药的现代化，工业和科技的现代化是不全面的。有时光一个药的年产值就超过宝钢一年的年产值，如象ＥＰＯ（促红细胞生成素）、ＧＣＳＦ（粒细胞集落刺激因子）等，其中每一个都能获得１０亿美元的产值，如果上海能...