沪酿3042米曲霉原生质体制备条件的研究

对影响沪酿3042米曲霉原生质体制备和再生的条件,包括菌龄、酶解温度、酶解时间、再生培养基的稳渗剂进行了研究。结果表明,当菌龄为10h,酶解90min,酶解温度30℃,用0.8mol/LNaCl作再生培养基的稳渗剂,原生质体的形成最好,为7×106个/mL,再生率为27.8%。     

蒙古口蘑原生质体的制备与再生研究

影响蒙古口蘑原生质体形成和再生的因素很多,重点探讨了酶浓度、酶解时间、菌龄、渗透压稳定剂和再生培养基对原生质体形成和再生的影响.结果表明,蒙古口蘑原生质体制备和再生的最佳条件是:菌龄为5 d,2.5% 溶壁酶处理4 h,酶解温度25℃,0.6 mol·L-1KCl为渗透压稳定剂,MB为再生培养基,再生率为8.4×10-4左右.     

卡介苗菌株和结核分枝杆菌H37Ra菌株原生质体的制备研究

分别以卡介苗菌株(BCG)及结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株(H37Ra)为受体菌,制备上述两种菌株的原生质体,同时通过优化细菌菌龄、酶解浓度、酶解温度以及酶解时间等影响因素,探索出制备原生质体形成及再生的最优条件。结果显示:摸索出制备BCG和H37Ra菌株的原生质体条件:在对数生长期的两亲本菌株,经0.01 mol/L EDTA,0.01%β-巯基乙醇溶液预处理;酶解浓度为12 mg/mL,酶解温度为37℃,酶解时间为5 h,可制备出活性较高的两种菌株的原生质体。由此可知,成功制备了BCG与H37Ra菌株的原生质体,并能在高渗固体培养基上再生。本实验为进一步研究该两种菌株原生质体融合试验奠定了基础。     

衣康酸产生菌-土曲霉T-730原生质体的制备和再生

以衣康酸产生菌土曲霉T-730为供试菌株,研究了菌丝体培养方式、酶配比、菌丝的菌龄、酶解温度和时间、再生培养方法等因素对土曲霉原生质体形成和再生的影响．结果表明：采用液体静置培养12h～14h的菌丝体,在含有纤维素酶0．6％,蜗牛酶0．3%,溶菌酶0．1％的混合酶系统中,置35℃酶解3.5h,原生质体形成率最高;采用双层平板培养法于32℃再生,再生率达到70.6%     

链霉菌702原生质体的制备和再生条件研究

为了确定链霉菌702菌株原生质体制备和再生较优组合条件,以链霉菌702菌株为试验材料,试验设计以单因素和多因素多水平的正交试验。在单因素试验结果中探索该菌的对数生长期为35 h~50 h,在菌丝体培养基中添加1.0%甘氨酸有利于该菌原生质体制备和再生;正交试验分别以影响该菌原生质体制备和再生的菌丝体培养时间、溶菌酶使用浓度、酶解温度和酶解时间的四因素三水平的L9(34)正交试验,试验表明:链霉菌702菌株原生质制备和再生较优组合为A2B2C3D1,即菌丝体培养时间为43 h,溶菌酶浓度为2.0 mg/mL,酶解温度为37℃,酶解时间60 m in,原生质体的制备率和再生率分别达到96.5%和27.8%。本试验为该菌进一步进行原生质体诱变打下良好的基础。     

应用正交实验研究铜绿假单胞菌原生质体制备与再生

通过对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生进行正交实验,探讨各因子对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生影响水平,得到铜绿假单胞菌原生质体制备与再生的最优条件:酶解时间 0. 5h,酶浓度 2mg/L,菌龄为 15h 此时原生质体形成率为 80. 5%,再生率为 20. 6%     

截短侧耳素产生菌原生质体的制备条件优化及再生

以截短侧耳素产生菌Clitopilus pinsitus为材料,通过单因素和正交实验,研究菌龄、酶系、酶浓度、酶解时间、温度及稳渗剂对C.pinsitus原生质体制备和再生的影响。实验结果表明,制备原生质体的最佳条件为:5d菌龄,0.4mol/L甘露醇稳渗剂,2.0%蜗牛酶和2.0%纤维素酶混合酶,25℃酶解1.5h,原生质体产量5.9×107个/m L,其再生率为1.2‰。实验为截短侧耳素高产菌株原生质体诱变育种奠定基础。     

碱性脂肪酶产生菌--扩展青霉K40原生质体的制备和再生

采用 0 .6%纤维素酶加 0 .6%蜗牛酶的混合酶由扩展青霉 K4 0中获得大量的原生质体 ,并比较了菌龄、二硫苏糖醇 ( DTT)预处理方式、酶解时间、温度、 p H、培养基成分及稳定剂等因素对原生质体的形成和再生的作用 .选出制备原生质体的最适条件 :0 .6%纤维素酶 +0 .6%蜗牛酶 ,在 0 .6mol/L Na Cl+0 .3 %Ca Cl2 ,DTT预处理 0 .5h,菌龄为 1 9～ 2 0 h,p H 5.4 ,2 8℃酶解 3～ 3 .5h,原生质体产量可达 2 .3 6× 1 0 7个/ml,实现再生 ,再生率达 70 %～ 80 % .并对原生质体的释放和再生方式进行跟踪观察     

黄伞原生质体制备与再生条件研究

探讨了渗稳剂种类、酶种类和浓度、酶解时间、酶解温度、菌龄等因素对黄伞原生质体制备和再生的影响．结果表明,其原生质体制备和再生的最佳条件是菌龄为7d,2％溶壁酶处理2．5h,酶解温度25℃,0．6mol／L KCl为制备时的渗稳剂及0．6mol／L甘露醇为再生时的渗稳剂,其原生质体的产率为2．16×10^7个／mL,再生率为0．52％．     

金色链霉菌原生质体的制备

对金色链霉菌原生质体制备的具体条件进行了优化研究 .发酵培养基中采用蔗糖浓度 12 %、甘氨酸浓度 0 .5 %、酶解条件采用菌龄为 48h的菌丝、溶菌酶浓度 6mg/mL、酶解时间为 1h制备原生质体 ,原生质体制备率可高达 6 0 %以上 .     

齿毛菌原生质体的制备与转化

探究菌龄、稳渗剂种类、溶壁酶质量浓度、酶解温度、酶解时间和再生培养基对齿毛菌原生质体制备及再生的影响,并利用PEG介导原生质体转化. 结果表明： 以0.6mol·L^-1甘露醇为稳渗剂,20mg·mL^-1溶壁酶于30℃酶解48h菌龄的菌丝3h,所得原生质体形成数最多,为1×10⁸个·mL^-1;所得原生质体在0.8mol·L^-1蔗糖为稳渗剂的2号培养基中再生率最高,为0.1%;PEG介导原生质体转化,经潮霉素B抗性平板筛选获得2个转化子. 实验建立的齿毛菌原生质体制备及转化体系,为其遗传操作及分子生物学研究奠定基础.     

Aspergillus oryzae与Aspergillus niger原生质体的制备、再生与非对称灭活工艺研究

为提高菌丝原生质体的释放量和活力,分别考查了培养基碳源、菌龄、酶浓度、酶解时间及再生培养基种类对Aspergillus oryzae和Aspergillus niger 原生质体释放和再生的影响,并研究了两亲本原生质体的非对称灭活参数。结果表明:（1）以MPY液体培养基为菌丝培养基,按105个孢子/ml培养基的接种量接入新鲜孢子悬液,30 ℃/100 rpm分别振荡培养18和21 h,总浓度15 mg/ml的复合酶液（溶壁酶：蜗牛酶：纤维素酶＝1:1:1）按1 g湿菌丝球/10 mL酶液的比例,于30 ℃/70 rpm条件下酶解2.5 h,然后以高渗豆汁固体培养基为再生培养基,在上述制备工艺参数下两亲本原生质体的释放量和再生率均可达到107个/ml和30％以上;（2）通过灭活曲线确定A. oryzae HN3042原生质体于15 W紫光灯垂直距离13 cm处照射15 min,A. niger CICC2377原生质体于65 ℃水浴10 min,此灭活剂量可使99％以上双亲原生质体非对称失活。     

褐球固氮菌和荧光假单胞菌原生质体制备条件的研究

为了利用原生质体融合技术获得同时具备固氮、解磷、抑病等活性的多功能菌株,本文对褐球固氮菌A41和荧光假单胞菌P32原生质体的制备条件进行了研究。通过对菌龄、酶解温度、酶浓度、酶解时间等影响因素的正交实验确定了褐球固氮菌A41和假单胞菌P32原生质体制备的最佳条件。实验结果表明,固氮菌A41最佳制备条件为菌龄20h、酶解温度37℃、酶浓度3mg/mL、酶解时间45min;假单胞菌P32最佳制备条件为菌龄20h、酶解温度37℃、酶浓度2mg/mL、酶解时间30min。     

荨麻青霉(Penicillium urticae)原生质体的制备与再生

对荨麻青霉原生质体的高效制备以及再生方法进行了探索.结果显示荨麻青霉较为适合的原生质体制备及再生条件的组合:菌龄为28 ℃恒温下培养20～22 h,DTT预处理0.5 h,以7 mg/mL的纤维素酶,7 mg/mL蜗牛酶,5 mg/mL溶菌酶为混合酶,0.6 mol/L的NaCl作为渗透压稳定剂,28 ℃恒温酶解3.5 h,PDA高渗双层培养基再生.该组合制备原生质体形成量达到1.59×107～1.89×107/mL,其再生率达到16.24%～19.25%.     

香菇菌丝原生质体制备及融合条件的研究

讨论不同菌龄、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂对香菇原生质体产率的影响。结果表明 ,香菇菌丝制备原生质体时最适菌龄为 6天 ,酶解时间为 3h ,酶解温度为 34℃ ,渗透压稳定剂用 0 .6mol/L甘露醇为最佳。在此基础上 ,以 35 %的PEG为融合诱导剂进行香菇B0 1、L2 6种间原生质体融合 ,并用显微镜观察到融合子的形成     

利用基因组重排技术选育高产洛伐他汀红曲菌株

采用基因组重排法选育高产洛伐他汀红曲菌株.原生质体制备条件:溶壁酶1.0%(质量分数),菌丝菌龄66 h,酶解时间3 h,酶解温度30℃,高渗磷酸盐缓冲液pH值为6.0,再生培养基的渗透压稳定剂为0.6 mol·L~(-1)NaCl;原生质体灭活条件:紫外灭活120 s,微波灭活300 s;原生质体融合条件:PEG 30%(质量分数),Ca~(2+)0.03 mol·L~(-1),30℃融合12 min,原生质体融合率1.95%.以经紫外和微波诱变得到的正突变菌株为亲本进行三轮基因组重排,获得一株遗传稳定、高产洛伐他汀菌株R″-30,洛伐他汀产量较原始菌株SH2-7提高52%。     

绿色木霉原生质体的制备与再生研究

以绿色木霉 (TrichodermaviridePers .exFr.)为研究对象 ,采用多因素实验正交优选法 ,对绿色木霉原生质体的制备和再生条件进行了研究 ,并对原生质体释放过程进行了形态观察 .结果表明 ,制备绿色木霉原生质体的最佳条件为 :菌龄为 11h ,用A培养基作生长培养基 ,5 % (w/w)蜗牛酶处理 ,酶解温度 30℃ ,0 .7mol/LKCl作渗透压稳定剂 ,在添加 10 %PEG(MW 6 0 0 0 )和 10mmol/LCaCl2 等再生促进因子的情况下 ,再生率可达 14 .6× 10 - 4;绿色木霉原生质体的释放方式为原位释放 ,原生质体平均直径为 6 .5 μm .     

白色念珠菌SC5314原生质体制备的研究

通过研究白色念珠菌菌龄、预处理剂、酶解温度、裂解酶种类、酶解时间等不同因素对白色念珠菌SC5314原生质体制备的影响,确定了其原生质体制备的条件:选用菌龄为12 h的菌体,用50 mmol/L EDTA+5%巯基乙醇(体积比)+50 mmol/L Tris (pH=8.0)的复合预处理剂进行预处理,用0.7 mmol/L的NaCl作为渗透压稳定剂,1%的蜗牛酶+1%的纤维素酶+1%的溶壁酶在30 ℃的条件下酶解120 min.在此条件下,其原生质体制备率高达98%.     

金针菇原生质体制备和再生条件实验

本文采用溶壁酶(Lyuvllzyme)、蜗牛酶(Snailase)、纤维素酶(Cellulase)制备金针菇(Flammulina Velutipes)的原生质体.比较了酶的浓度、渗透压稳定剂、温度、酶解时间、菌龄等因素对原生质体形成和再生的作用.1％蜗牛酶和1.5％溶壁酶酶解金针菇菌丝获得了高产量的原生质体.无机盐(kcl,Nacl,Mgso_4)和甘露醇是制备金针菇原生质体的有效稳定剂.35℃、酶解1小时、菌龄3～4天的菌丝是制备金针菇原生质体的最佳条件.不同的再生菌丝生长速度和子实体形成的时间有很大的差异.     

稗弯孢菌（Curvularis lunata）原生质体的制备

研究了不同菌龄、酶浓度、渗透压稳定剂、缓冲液pH值以及酶解温度和时间等因素对稗弯孢菌(Curvularia lunata)原生质体形成的影响。将培养18h的菌丝,以0.7mol/L KCl作为渗透压稳定剂,30℃下,经过2％溶壁酶和4％纤维素酶混合酶液(pH5.8)酶解4h,原生质体在静止条件下最大释放量达到 1.7×10~6/mL,再生率为0.76％。