红皮云杉球状胚诱导影响因子分析

为了提高红皮云杉体胚形成的数量和质量,对红皮云杉球状胚诱导阶段的一些影响因子进行了分析.结果发现:肌醇、活性炭和遗传基础对红皮云杉球状胚诱导的影响均达到了显著水平;附加15 g/L肌醇和3 g/L活性炭而不加任何激素的RJW培养基的球状胚诱导效果最好,达到97.6个/g;遗传基础不同的3个细胞系对中等浓度肌醇和活性炭的反应是一致的.     

抗松材线虫病马尾松体胚发生与植株再生条件的优化

【目的】为使抗松材线虫病马尾松(Pinus massoniana Lamb.)快速大规模繁殖,对抗性马尾松体细胞胚胎发生和植株再生条件进行优化。【方法】以抗病马尾松未成熟合子胚为材料,探讨胚性愈伤组织的诱导、增殖与维持、分化成熟以及萌发的合适培养条件,并对体细胞胚进行生根诱导,对再生植株进行壮苗培养以及驯化移栽。【结果】以LP为基本培养基,添加2.0 mg/L 2,4-D(二氯苯氧乙酸)和1.0 mg/L 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤),抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率最高达27.8%。在胚性愈伤组织增殖维持过程中,悬浮培养中的增殖系数和同步化程度都显著高于固体培养,且经过悬浮培养的细胞系分化能力更强。萌发过程中只有少量能顺利分化出根系,未能顺利分化出根的体胚于添加适量 IBA和 NAA的生根培养基中能够更好地生根。壮苗培养过程中,添加0.01 mg/L油菜素内酯有助于体胚苗的生长。体胚苗在驯化移栽时不同大小的苗移栽成活率相差较大,5 cm左右的体胚苗成活率最高达90.3%。【结论】生长素2,4-D和6-BA组合(2.0 mg/L和1.0 mg/L)对抗性马尾松胚性愈伤组织诱导率较好; 悬浮培养后的细胞系更利于诱导体胚,适宜浓度的IBA和NAA(1.0 mg/L和0.2 mg/L)能够促进体胚苗根系生长。在壮苗培养基中添加适量油菜素内酯能够促进抗性马尾松再生植株的生长,待苗长至5 cm左右移栽较好。     

青钱柳幼胚愈伤组织的诱导

以青钱柳幼胚为外植体,研究了不同幼胚期、基本培养基种类、植物生长调节剂种类及其浓度配比对愈伤组织诱导的影响。结果表明,不同发育期的幼胚诱导出的愈伤组织在形态上差异较大,青钱柳种子发育至子叶胚中期较适合愈伤组织的诱导。青钱柳幼胚愈伤诱导时基本培养基以改良DKW效果最佳,诱导率达到了88.89%,且无褐化现象;含2,4-D与KT组合的培养基较适宜愈伤组织的诱导,其中2,4-D(0.5 mg/L)+KT(2.0 mg/L)和2,4-D(1.0 mg/L)+KT(1.0 mg/L)的组合对青钱柳幼胚诱导愈伤组织效果最佳,诱导率分别为80.00%和78.33%。     

铁线莲'Multi-Blue'体细胞胚诱导和植株再生

以铁线莲品种'Multi-Blue'的茎尖为外植体,1/2MS为基本培养基,进行胚性愈伤组织和体细胞胚的诱导及植株再生条件的选择.结果表明:茎尖外植体在1/2MS+TDZ(1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)+2%蔗糖+0.7%琼脂的固体培养基中培养时可形成淡黄色块状至颗粒状愈伤组织,经继代培养后可逐渐形成胚性愈伤组织;体细胞胚诱导以1/2MS+TDZ(0.2mg/L)+IBA(0.1mg/L)+ABA(0.3mg/L)+CH(0.5g/L)为佳,诱导率可达96%;而适宜的体细胞胚萌发培养基为1/2MS+6-BA(0.2mg/L)+IBA(0.05mg/L).体胚再生植株经驯化后,移栽成活率可达80%以上.     

抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织的诱导及增殖

以抗松材线虫病赤松未成熟合子胚为外植体,研究了合子胚发育阶段、激素种类及浓度以及碳源等对胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:发育至2~4阶段的合子胚为胚性愈伤组织诱导的适宜外植体,2,4-D和6-BA是最优激素组合,麦芽糖比蔗糖、葡萄糖更有利于胚性愈伤组织的诱导。抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织诱导率总体较低,以DCR为基本培养基,添加2 mg/L 2,4-D和1 mg/L 6-BA时诱导率最高为5.0%,诱导的胚性愈伤组织在增殖培养基上能够稳定增殖。     

铁线莲‘Multi Blue’体细胞胚诱导和植株再生

以铁线莲品种‘Multi Blue’的茎尖为外植体,1/2MS为基本培养基,进行胚性愈伤组织和体细胞胚的诱导及植株再生条件的选择。结果表明：茎尖外植体在1/2MS+TDZ(1.0 mg/L)+NAA(0.5 mg/L)+2 %蔗糖+0.7 %琼脂的固体培养基中培养时可形成淡黄色块状至颗粒状愈伤组织,经继代培养后可逐渐形成胚性愈伤组织;体细胞胚诱导以1/2MS+TDZ(0.2 mg/L)+IBA(0.1 mg/L)+ABA(0.3 mg/L)+CH(0.5 g/L)为佳,诱导率可达96 %;而适宜的体细胞胚萌发培养基为1/2MS+6-BA(0.2 mg/L)+IBA(0.05 mg/L)。体胚再生植株经驯化后,移 栽成活率可达80 %以上。     

番木瓜胚珠高频率体胚发生和植株再生

将番木瓜(Carica papaya L.)受精胚珠接种于MS IAA1mg/L BA2mg/L GA_3 2mg/L S(蔗糖)3％和1/2MS 谷胺酰胺400Mg/L CW(椰子汁)20％ S6％的培养基中,诱导愈伤组织,愈伤组织继代培养于MS CW 2％ S6％ 2.4-D 2mg/L的培养基上。进行了几种激素配比和基本培养基(MS和改良MS)对诱导胚性愈伤组织、体胚发生和植物再生培养基的比较实验。结果表明:在改良MS 硫酸腺嘌呤160mg/L NAA 1mg/L BA 0.5mg/L GA_3 1mg/L S4％培养基中获得理想胚性愈伤组织和体胚,在改良MS 硫酸腺嘌呤160mg/L NAA 1mg/L KT 0.5mg/L GA_3 1mg/L S4％产生正常具三裂片和根系的小植株。进行番木瓜体胚包埋、制成人工种子,实验获得小苗,并移栽成功。     

不同苜蓿栽培品种再生体系的差异性比较

通过对10种不同苜蓿的栽培品种再生体系的比较研究,以及再生条件的优化,筛选出易于再生的费纳尔,金皇后,赛特6号3个苜蓿栽培品种．结果表明：胚性愈伤组织诱导培养基：改良Ms＋2,4-D2mg／L＋6-BA0．5mg／L＋蔗糖3％,胚性愈伤组织诱导率为65％～92％;胚状体诱导培养基：SH＋2,4-D2mg／L＋6-BA0．5mg／L＋LH300mg／L＋蔗糖3％;胚状体诱导率为42．3％～83．4％;胚状体再分化培养基：SH＋GA30．5mg／L＋LH300mg／L＋肌醇60mg／L蔗糖3％;胚状体萌发率为20％～75％;生根培养基：1／2Ms＋NAA0．3～0.5mg／L＋蔗糖2％,生根率为91％,移栽成活率93％．     

非洲高淀粉甘薯品种Tanzania的再生研究

研究了一个非洲高淀粉甘薯品种Tanzania的胚状体再生途径.将去腋芽的茎段在含有不同生长素浓度(0~2mg/L)MS培养基上置于暗处,经过6~8周诱导出了胚性愈伤组织.Tanzania品种的胚性愈伤组织诱导频率较低,平均为13.4%,而对照Huachano品种为43.3%.Tanzania品种胚性愈伤组织由于生长素种类的不同而呈现不同的质量,形态和颜色特征.当诱导条件优化后,Tanzania品种茎尖在含1mg/L的4-fluorophenoxyacetic acid(4-FA)的培养基上,胚性愈伤组织诱     

水仙胚性愈伤的获得及农杆菌介导GUS基因的遗传转化

用正交实验设计对前期影响水仙胚性愈伤诱导和分化关联性大的因素进行综合分析,结果显示,培养基类型、激素及处理方式、不同添加物等对水仙外植体胚性愈伤诱导及分化的影响是基于培养基的多因素协同效应。水仙适宜胚性愈伤诱导培养基是:改良MB+NAA(0.2 mg/L)+6BA(2 mg/L)+ABA (2 mg/L)+AgNO3(5 mg/L);适宜的分化培养基是：改良N6+2,4D(0.5 mg/L)+6BA(2.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)+ABA(2 mg/L)。实验中观察到水仙体细胞胚的发生,在胚性愈伤诱导和分化体系优化基础上实现农杆菌介导GUS基因转化,稳定表达抗性愈伤GUS染色显示最佳胚性愈伤诱导培养基能促进水仙外植体感受态的形成,有利于外源基因的接受,PCR检测表明实验中获得3株转GUS基因阳性植株。     

碳源对不同产地香樟体细胞胚胎发生及植株再生的影响

【目的】 探究渗透调节物质种类及其不同浓度对香樟体细胞胚胎发生及植株再生的影响,为提高香樟体胚诱导率、优化体细胞胚胎发生体系奠定理论基础。【方法】 以7月初在湖南省郴州、长沙、娄底及怀化市采集的香樟(Cinnamomum camphora L.)的未成熟合子胚为试验材料,分析不同碳源种类、浓度及组合方式对香樟体胚诱导、芽萌发、生根等方面的影响。【结果】 适合香樟的体胚诱导培养基为MS+1.0 mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)+0.3 mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+1.0 mg/L 链霉素+15 g/L 蔗糖+30 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂+700 mg/L水解酪蛋白;增殖培养基为MS+15 g/L 蔗糖+30 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂+700 mg/L 水解酪蛋白;芽萌发培养基为MS+0.1 mg/L 苯基噻二唑基脲(TDZ)+0.5 mg/L 萘乙酸(NAA)+0.1 mg/L 吲哚丁酸(IBA)+15 g/L 蔗糖+15 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂;生根培养基为MS+1.0 mg/L IBA+15 g/L 蔗糖+15 g/L 山梨醇+6.5 g/L 琼脂。【结论】 经过改良,添加15 g/L蔗糖和30 g/L山梨醇的组合碳源,香樟体胚的诱导率明显提高;添加15 g/L蔗糖和15 g/L山梨醇的组合碳源处理的新植株生根条数多、主根明显,生长状况更优。     

抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织的维持与稳定增殖

【目的】为了研究抗松材线虫病赤松体细胞胚胎发生和植株再生,进行了抗病赤松愈伤组织培养条件的优化。【方法】以抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织22#-1和13#-1为材料,首先在体视镜下观察胚性与非胚性愈伤组织的细胞学形态差异,然后研究激素配比、基因型、继代方式和次数对愈伤组织增殖中形态上和生物量上的影响。【结果】抗病赤松愈伤组织可分为两类:一类为胚性愈伤组织,含有胚性胚柄细胞团(embryonic suspensor mass, ESM)结构,一类为非胚性愈伤组织; 胚性愈伤组织维持与增殖最佳的激素组合是2.0 mg/L 6-BA和4.0 mg/L NAA; 不同基因型的胚性愈伤组织的增殖状况存在差异,其中抗病赤松无性系22#-1胚性愈伤组织增殖较快,无性系13#-1增殖较慢,但差异不显著; 液-固与固体交替培养方式为抗病赤松胚性愈伤组织最适宜的继代增殖方式。【结论】不同的基因型增殖状况差异不显著,增殖过程应挑选胚性愈伤组织进行增殖,使用2.0 mg/L 6-BA和4.0 mg/L NAA激素配比的培养基,并采用液-固与固体交替的方式培养。     

芒萁组培技术体系的优化

【目的】芒萁(Dicranopteris pedate)是尾矿及酸性边坡修复的优良植物。优化芒萁组培技术,提高组培效率,可为困难立地修复提供大量芒萁孢子体。【方法】以芒萁孢子为外植体,研究外植体收集时间、消毒时间与孢子萌发率的关系;通过改变培养基中无机盐浓度、蔗糖浓度及植物生长调节剂类型及浓度,研究孢子萌发、原叶体增殖、孢子体生成3个过程的最佳培养基配方。【结果】春季2—4月采集的芒萁孢子萌发活性最强;孢子诱导萌发最佳处理为DKW+5%(质量分数) NaClO消毒15 s,萌发率97.15%,20 d原叶体可见;原叶体最佳增殖培养基为1/2 MS+蔗糖5 g/L+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L,30 d质量增殖倍数为7.28;孢子体诱导生成最佳培养基为1/2 MS+蔗糖30 g/L+NAA 1.0 mg/L,第8天孢子体即可产生,生成率53.33%。【结论】芒萁孢子活性与生长区域、生成月份存在关联性,广州地区3月的孢子活性最强;在幼孢子体的瓶苗生成率较低的情况下,研发原叶体绿色球状体(prothallus green globular body, PGGB)高效增殖...     

春剑种子无菌萌发过程的显微观察

【目的】春剑(Cymbidium tortisepalum var. longibracteatum)种子在自然环境下难以萌发,大约只有百万分之一的萌发率。分析春剑种子萌发机制,可为春剑种子的高效萌发和共生萌发提供参考。【方法】通过无菌播种技术对春剑种子进行萌发试验,并用体式显微镜和扫描电镜对各发育阶段春剑种子形态变化进行观察。【结果】Hyponex(花宝1号)3 g/L + 6-BA 0.50 mg/L + NAA 0.50 mg/L培养基上种子萌发效果最佳,种子萌发率为30.33%;从播种到形成幼苗需400 d。观察发现,春剑种子萌发的主要途径为种胚膨大并从种子一侧突破种皮但未从种皮中脱落,种胚突破种皮后经光合作用变绿并分化成原球茎,原球茎伸长生长形成根状茎最后形成幼苗。【结论】添加适宜浓度的6-BA和NAA能有效促进春剑种子的萌发;春剑种子的发育阶段分为:未萌发、种胚吸水膨大、种皮破裂露出种胚、形成原球茎、形成根状茎、形成幼苗6个阶段。     

小冠花高效体细胞胚胎发生与植株再生的研究

目的建立小冠花稳定高效体细胞胚胎植株再生体系。方法采用植物离体组织培养技术,通过优化外植体,基本培养基及其激素组合,提高体细胞胚发生和植株再生频率。结果子叶外植体在附加1.0mg/L 2,4-D,1.0mg/L NAA,0.5mg/L KT和100mg/L脯氨酸的MSB培养基上35d100%形成体细胞胚,产生体细胞胚数量达625个/g,在MS KT 1.0mg/L IBA 0.1mg/L 脯氨酸300 mg/L培养基上转换成完整植株的平均数为21棵/g。再生植株移栽成活率为80%,其形态特征和生长习性未见变异。外源激素是体细胞胚胎诱导所必需的,2,4-D是其中最关键的一种。结论建立了小冠花高频稳定高效体细胞胚胎发生和植株再生体系。     

金叶复叶槭水培嫩枝组织培养体系研究

【目的】筛选基本培养基、增殖和生根培养基最佳激素组合,探索炼苗移栽方法,建立金叶复叶槭组织培养体系,为该树种优良种苗规模化生产提供新途径。【方法】以金叶复叶槭水培嫩枝为试材,通过单因子逐步筛选法,研究MS、WPM、B₅培养基对初代培养,6-BA、TDZ和NAA对增殖培养,IBA和NAA对生根培养,以及相对湿度对移栽成活的影响。【结果】MS和WPM诱导外植体腋芽萌发率显著高于B₅培养基,但MS培养基在促进新芽伸长生长方面优于WPM。6-BA、NAA与低浓度的TDZ联合使用可有效地提高不定芽增殖系数,在MS附加0.5 mg/L 6-BA、0.01 mg/L TDZ、0.06 mg/L NAA的增殖培养基中,每个外植体可增殖5.8个新芽。添加生长素可显著提高增殖芽生根率,添加IBA生根效果显著好于NAA,1/2 MS附加0.05 mg/L IBA即可使生根率达100%。85%的相对湿度条件下组培苗移栽成活率可达95%。【结论】适宜金叶复叶槭水培嫩枝组培快繁的基本培养基为MS培养基,最佳增殖培养基为MS + 0.5 mg/L 6-BA + 0.01 mg/L TDZ + 0.06 mg/L NAA;最佳生根培养基为1/2 MS + 0.05 mg/L IBA;金叶复叶槭组培苗对移栽基质要求不高,保湿是关键。     

红松成熟胚愈伤组织诱导外植体选择及培养条件优化

【目的】通过培养条件的优化和适宜外植体类型的筛选,解决红松成熟胚愈伤组织诱导中存在的愈伤组织诱导率低、生长状态差、褐化率较高等问题,为建立红松成熟胚体胚发生体系奠定基础。【方法】用5种培养基类型、3种蔗糖浓度和9种植物生长调节剂组合,选择8种来源于成熟种子不同部位的外植体,对愈伤组织诱导的培养条件和适宜外植体类型进行优化和筛选。【结果】① 在5种培养基中,DCR培养基上愈伤组织诱导率高于其他培养基、生长状态好于其他培养基; ② 添加在DCR中的3种蔗糖浓度中,35 g/L时的愈伤组织诱导率最高(92.01%)、褐化率最低(17.01%); ③ DCR添加35 g/L蔗糖情况下,9种植物生长调节剂组合中NAA 2.0 mg/L + 6-BA 1.5 mg/L组合的愈伤组织诱导率最高、褐化率最低、生长状态最佳; ④ 在选出的优化培养条件下,8种来源外植体中,从裸胚上切离的下胚轴的愈伤组织诱导率高、褐化率低,且增殖能力强,具备胚性愈伤组织的形态解剖特征。【结论】红松成熟胚愈伤组织诱导的优化培养条件为DCR +蔗糖35 g/L + NAA 2.0 mg/L+ 6-BA 1.5 mg/L,适宜外植体裸胚上切离的下胚轴。     

仙客来种苗球茎胚性愈伤的诱导及体胚的发生

为了建立仙客来稳定的快繁增殖体系,以仙客来种苗为试材,接种于含不同浓度激素组合的I／2MS培养基上,经过初培养和多次继代培养,诱导产生胚性愈伤,结果表明：球茎是较好的诱导胚性愈伤的材料,1／2MS＋6-BA0．2mg／L＋2,4-D2mg／L＋蔗糖30g／L＋琼脂6．5g／L＋肌醇100mg／L＋酪蛋白100mg／L是较好的诱导配方,将胚性愈伤转接到不含激素的1／2MS基本培养基上,诱导产生大量球形胚和鱼雷胚,2—3周后正常成熟的体胚萌发,表明此研究可以为仙客来的快速繁殖提供技术参考．     

珍稀濒危植物四合木体细胞胚胎发生的组织学观察

通过对四合木愈伤组织诱导和体细胞胚胎形成过程中组织学观察的研究,得出以下结果：１）茎尖、茎段、肉质叶和花蕾四种外植体中花蕾的愈伤组织诱导率最高,其中花蕾的肉质花托是四合木体细胞胚胎发生的良好外植体来源;２）基本２基为改良Ｍｓ固体培养基;ａ．附加０．１ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．５ｍｇ／Ｌ,２,４－Ｄ可诱导产生大量的淡黄色疏松状愈伤组织;ｂ．愈伤组织在去除外源植物生长调节物质的条件下,经一年左右继代培养     

大叶相思体细胞胚胎发生的初步研究

以种子萌发的无菌苗下胚轴为外植体，在Ｂ５＋２，４－Ｄ（１０－４ｍｏｌ／Ｌ）＋ＢＡ（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）＋ＣＨ０．５ｇ／Ｌ的固体培养基上培养４周，获得了胚性愈伤组织．该愈伤组织经Ｂ５＋２．４－Ｄ（１０－４ｍｏｌ／Ｌ）的液体培养基７ｄ的诱导在Ｂ５＋Ｌ－谷氨酰胺（２００ｍｇ／Ｌ）＋ＣＨ（０．５ｇ／Ｌ）的液体培养基上培养１４ｄ产生了球形胚．球形胚具有明显的两极，但只是根端发育，苗端并没有发育