他克莫司产生菌原生质体制备、再生与诱变

对筑波链霉菌的原生质体制备、再生条件进行了研究,建立了筑波链霉菌的原生质体诱变筛选体系.在此基础上,通过原生质体的紫外诱变处理,筛选得到1株高产菌株,与出发菌株相比,该菌株的平均发酶单位提高51.4%.通过原生质体的紫外诱变来筛选他克莫司高产菌株是一种行之有效的方法.     

利用基因组重排技术选育高产洛伐他汀红曲菌株

采用基因组重排法选育高产洛伐他汀红曲菌株.原生质体制备条件:溶壁酶1.0%(质量分数),菌丝菌龄66 h,酶解时间3 h,酶解温度30℃,高渗磷酸盐缓冲液pH值为6.0,再生培养基的渗透压稳定剂为0.6 mol·L~(-1)NaCl;原生质体灭活条件:紫外灭活120 s,微波灭活300 s;原生质体融合条件:PEG 30%(质量分数),Ca~(2+)0.03 mol·L~(-1),30℃融合12 min,原生质体融合率1.95%.以经紫外和微波诱变得到的正突变菌株为亲本进行三轮基因组重排,获得一株遗传稳定、高产洛伐他汀菌株R″-30,洛伐他汀产量较原始菌株SH2-7提高52%。     

紫外诱变原生质体选育高产L-乳酸菌株的研究

以干酪乳杆菌ZZ-L为出发菌株,对其原生质体制备条件进行了优化.结果表明,用为0.4 mg/mL的溶菌酶溶液和0.7 mol/L NaCl溶液作为渗稳剂对菌龄为22 h的干酪乳杆菌ZZ-L酶解时间110 min,原生质体的形成率为89.5%,再生率为47.7%,达到最佳水平.并对原生质体进行了紫外诱变育种.通过平板和静置发酵实验,筛选得到8株突变株产量比出发菌株高的突变株,其中菌株ZZ-06的L-乳酸产量达78.6 g/L,比出发菌种提高了20.7%,突变株ZZ06经12次传代,其遗传性状稳定.     

复合诱变选育高富硒嗜热链球菌

采用紫外-氯化锂诱变法对嗜热链球菌进行复合诱变,最终筛选得到一株高富硒率的嗜热链球菌突变株ZZ-CW4.实验结果表明,在紫外诱变时间为15s,氯化锂添加量为1.0mg/mL时,复合诱变条件最佳,嗜热链球菌的富硒率达到83.43%.与出发菌株相比,富硒率提高了47.94%.突变菌株ZZ-CW4经10次传代培养,其遗传性状保持稳定.     

原生质体紫外诱变法选育高产γ-氨基丁酸秀珍菇菌株

采用原生质体紫外诱变育种方法,进行高产γ-氨基丁酸的秀珍菇菌株选育工作,对原生质体制备条件、再生条件和诱变株γ-氨基丁酸含量进行了筛选分析。结果表明:MM缓冲液中,20 mg/mL的溶壁酶能够有效去除秀珍菇细胞壁,获得2×10~6个/mL的原生质体;在含有0.5 mol/L甘露醇的YMG培养基上,原生质体再生率最高,可达到0.65%±0.13%。35 W紫外灯照射1～2 min时,致死率可达到76%～86%;菌丝体和子实体中,3株突变株γ-氨基丁酸含量较出发菌株分别提高了20.7%、196.3%、126.8%和21.3%、237.8%、97.3%。诱变菌株的获得,可为高值化富含γ-氨基丁酸秀珍菇生产菌株的培育提供优异的育种材料。     

纳豆芽孢杆菌原生质体制备条件的研究

以纳豆芽孢杆菌ZJ-zx为出发菌株,利用溶菌酶进行原生质体制备,并对其制备条件进行了优化.结果表明:在溶菌酶质量浓度为0.6mg/mL、酶解时间为40min、酶解温度为35℃、渗透压稳定剂为0.7mol/L的条件下,制备原生质体的形成率为95.46%,再生率为15.83%,为下一步的诱变育种工作奠定了基础.     

北冬虫夏草原生质体的制备及诱变育种

通过对北冬虫夏草(Cordyceps militaris Link)菌种液体发酵培养,离心分离获得菌丝体菌液,分别从渗透压稳定剂、裂解酶、裂解时间及菌龄4个方面优化原生质体制备的条件.结果表明:原生质体制备的最优渗透压稳定剂为0.6 mol/L MgSO_4,最优酶解液为1%纤维素酶,最佳菌龄为5 d,最优裂解时间为2 h.L_(20)(5~4)的正交试验表明,优化条件下制备原生质体为1.46×10~7个/m L.紫外诱变实验结果表明:北冬虫夏草半致死率时的照射剂量约为40 s,诱变距离与致死率成反比,在诱变总时间相同的情况下,诱变受诱变次数影响较小,分次处理和一次处理效果基本相同.以多糖含量为指标,筛选诱变菌株,诱变株多糖含量高于普通菌株,其中17~#菌株多糖含量达6.01%,筛选菌株的稳定性实验表明:继代培养3次,筛选的菌株产多糖能力下降较少,表明筛选菌株具有较好的稳定性.     

α-亚麻酸特异性脂肪酶产生菌的复合诱变研究

将前期实验中经筛选、紫外诱变获得的α-亚麻酸特异性脂肪酶产生菌为诱变出发菌,通过紫外线、硫酸乙二酯和氯化锂的物理—化学复合诱变处理,经平板筛选和摇瓶发酵及发酵液中脂肪酶活性的测定,分离出具有产生更高活力α-亚麻酸特异性脂肪酶的菌株,测试结果显示,其酶活较单一紫外诱变菌种提高了31%.     

紫外和He-Ne激光复合诱变筛选L-丙氨酸高产菌株

对L-丙氨酸产生菌德阿昆哈假单孢菌分别进行紫外、激光以及紫外—激光的复合诱变筛选,结果表明,复合诱变正突变率幅度较大.从紫外—激光的复合诱变得到的突变株中筛选到3株遗传性状稳定的高产菌株,其L-天冬氨酸-β-脱羧酶的活性较之出发菌株分别提高19.97%、30.04%和26.55%,经9次传代培养,突变株性质稳定.     

辅酶Q_(10)生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生研究

研究对辅酶Q10生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生条件进行了优化,确定了原生质体制备及再生的最佳条件为:茵龄20 h,蜗牛酶浓度2 g/L,酶溶液pH值6.5,酶解温度25℃,酶解时间2 h.通过对粟酒裂殖酵母原生质体制备及再生条件的研究,建立了制备粟酒裂殖酵母原生质体的方法,以期进一步通过原生质体诱变获得辅酶Q10高产菌株.