山茱萸作用鼠IgA肾病的肾组织差异蛋白质谱

通过小鼠肾组织的双向电泳(2DE),发现单味中药山茱萸醇提物(FCE)作用鼠IgA肾病的肾组织差异蛋白质表达谱发生显著变化.比较IgA肾病和正常小鼠肾组织的2DE图,在1267个蛋白点中有664个匹配蛋白点,其中表达量差异在2倍以上的有263个,另有3种蛋白在IgA肾病肾组织中未被表达和1种蛋白特异表达.比较FCE服用前后鼠IgA肾病肾组织的2DE图发现,在原先差异表达的263个蛋白质中,用药后有147个显著地恢复正常表达,在IgA肾病3种未表达和1种特异表达的蛋白都恢复了正常表达,同时用药后新出现1种特异表达蛋白.该方法提示,这些差异和特异表达的蛋白质可能是IgA肾病和FCE药物作用的靶蛋白,FCE能有效地纠正小鼠IgA肾病可能是通过影响这些靶蛋白而起作用的.     

烟草ftsZ基因表达对质体发生的影响

FtsZ是广泛存在于原核生物和高等植物中的一种功能蛋白,它控制着原核细胞和质体的分裂过程.为进一步认识原核细胞和质体分裂的分子机制及真核细胞的起源和进化等重要问题,研究了该基因的表达调控特征.从烟草克隆ftsZ cDNA,构建了谷胱甘肽转移酶(GST)与FtsZ融合蛋白的表达质粒,并将其导入到在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下能高效表达的大肠杆菌JM109中.高表达的融合蛋白通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化后,用以免疫兔子制备抗血清.免疫印迹法表明烟草ftsZ基因的表达具有明显的组织器官特征,在质体(叶绿体)分裂活跃的部位表达强,其表达量为幼嫩花瓣>幼叶>幼根>老叶>茎.黑暗培养1d对ftsZ基因表达似乎无影响,随黑暗培养时间延长,FtsZ蛋白表达逐渐降低,叶绿体转化成为体积小、数目众多(增加2～3倍)的淡黄色或白色质体.该实验结果证明,光对植物ftsZ基因表达很可能无直接影响,ftsZ基因表达的强弱是决定质体(叶绿体)分裂和细胞中质体(叶绿体)数目多少的主要原因之一.     

茶树早期光诱导蛋白1基因的克隆和表达分析

报道了茶树早期光诱导蛋白1基因(CsELIP1)的cDNA和DNA序列的克隆.该基因编码蛋白含190个氨基酸残基,其基因组序列含有两个内含子(长度分别为129和855 bp).表达分析显示,CsELIP1的mR-NA水平在常温加较强光照(200μmol.m-2.s-1)和低温(5℃)弱光时上调都较少,但在5℃加200μmol.m-2.s-1时被强烈上调,表明CsELIP1的表达可能有一种在其他植物ELIP基因表达中存在的PSⅡ光合效率介导的调节方式.也暗示CsELIP1基因的生理作用可能涉及到茶叶细胞的光保护作用.     

四膜虫有性生殖过程中特异表达基因TCD3的序列分析

含有CHROMO(chromatin organization modifier)结构域的蛋白参与了染色质结构的调节.本研究从嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)全基因数据库(www.ciliate.org)和基因表达数据库(tged.ihb.ac.cn)中筛选到有性生殖特异表达TCD3(Tetrahymena chromo domain-containing protein 3)基因.该基因ORF为1 005bp,大核染色体中基因全长1 241bp,含有两个内含子.5′-RACE和3′-RACE表明5′端非编码区(5′-UTR)长度为40bp,3′端非编码区(3′-UTR)长度为90bp.TCD3基因预测编码334个氨基酸构成,含有一个CHROMO结构域.CHROMO结构域聚类分析表明四膜虫Tcd3蛋白可能与线虫CeCDP功能类似,参与异染色质的形成和DNA序列删除.     

小鼠胚胎脑特异表达的新基因bsg3的克隆及初步研究

通过消减差异筛选的方法克隆到一个在小鼠胚胎脑特异表达的基因bsg3(brain specific gene 3).它编码的蛋白与人的KIAA0961具有80.3%的同源性.bsg3基因包含一个1644bp的完整阅读框,编码一个含548个氨基酸,具有1个KRAB结构域(kruppel-associated box)和13个C2H2型锌指结构域的蛋白.该基因定位在小鼠第7号染色体上,包含5个外显子,4个内含子.以bsg3基因全长编码区为探针的原位杂交结果显示,bsg3在小鼠胚胎脑及鸡胚脑特异表达.半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的结果表明,在成体小鼠的组织中,bsg3基因脑中表达也较强.这提示bsg3基因可能在小鼠脑发育中起着重要的作用.对bsg3基因时间和空间的表达模式的分析将有助于进一步揭示它在脑发育及功能维持中的作用.     

TNF-α和机械牵拉对圆锥角膜成纤维细胞MMP/TIMP及IL-6表达的影响

研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与机械牵拉对圆锥角膜成纤维细胞白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、基质金属蛋白酶-1,-3(matrix metalloproteinase-1,-3,MMP-1,-3)、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1,-2(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,-2,TIMP-1,-2)基因表达与蛋白合成的影响。对体外培养的圆锥角膜成纤维细胞进行牵拉幅度12%、频率0.1Hz的周期性牵拉6h,并给予1ng/mL TNF-α处理,采用Real-Time PCR技术检测细胞中IL-6,MMP-1,MMP-3,TIMP-1,TIMP-2mRNA的表达,ELISA方法检测蛋白的含量。TNF-α单独作用可以诱导圆锥角膜成纤维细胞IL-6、MMP-1以及MMP-3的基因表达与蛋白合成(p0.05),对TIMP-1、TIMP-2的基因表达与蛋白合成无明显影响,提高MMP-1/TIMP-2以及MMP-3/TIMP-2蛋白浓度的比值(p0.05);机械牵拉单独作用促进IL-6、MMP-1以及MMP-3的基因表达与蛋白合成(p0.05),下调TIMP-1、TIMP-2的基因表达与蛋白合成(p0.05),上调MMP/TIMP蛋白浓度的比值(p0.05);两者联合作用则表现出协同效应(p0.05).提示TNF-α和机械牵拉可能通过上调IL-6及MMP/TIMP的比例促进圆锥角膜基质降解,加剧角膜组织破坏,导致角膜膨隆的发生发展。     

酵母双杂交泛素系统分析CLV1/2/3间的相互作用

CLAVATA(CLV)家族在拟南芥茎顶端分生区干细胞增殖与分化平衡的调节中发挥至关重要的作用.CLV基因家族编码受体蛋白激酶CLV1、受体样蛋白CLV2和细胞外多肽信号配基CLV3,前期研究表明,CLV1和CLV2可能以复合体形式接收并向胞内传递CLV3的信号,而受体激酶CORYNE(CRN)参与CLV3信号转导途径,可能和CLV2相互作用组成二聚体与CLV1形成平行独立的通路来应答CLV3信号.采用酵母双杂交泛素分裂系统研究了CLV家族蛋白之间的相互作用,研究结果表明CLV1的胞外域与CLV3和CLV2分别存在相互作用,这进一步为CLV家族受体-配体复合体的形成提供了证据.     

黄瓜离体雌核发育的过程及其早期生化变化研究

本首次研究了黄瓜离体雌核发育的形态及细胞学过程，以及培养早期生理、生化的变化．结果表明：雌核发育在培养的前6d即已开始，24d时形成胚状体，40d时形成成熟的胚状体．雌核发育的前6d，外植体POD酶活性急剧上升，SOD先上升后下降，Q酶活性明显上升但低于非雌核发育，Ca^2 -ATP酶和Mg^2--ATP酶活性变化较小且均低于非雌核发育．雌核发育的外植体IAA和ABA含量明显下降，iPA，Zr，CA3和CA4含量均有所下降并明显低于非雌核发育外植体．     

不同精子激发彭泽鲫卵子产生的子代及其双亲同工酶的比较

用彭泽鲫和尖鳍鲤的精子分别与彭泽鲫的卵子授精,产生2种子代PP和PS.采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对子代及父母本3种组织(心脏、肾脏、肝脏)的4种同工酶(LDH,EST,SOD,MDH)以及肌肉蛋白进行了比较分析,结果表明:两种子代的同工酶表型几乎完全一致,且在肝脏LDH、肾脏EST和SOD以及肌肉蛋白表型上与母本彭泽鲫存在差异,说明精子来源的不同对子代成体的同工酶和肌肉蛋白表型没有影响.暗示在正常情况下,无论与同源精子还是异源精子授精,彭泽鲫都行雌核发育生殖方式.而子代与母本存在差异的事实又意味着彭泽鲫的雌核发育与传统意义上的单性型雌核发育鱼类不同,可能属于非典型的雌核发育.     

小鼠烧伤后时序芯片数据分析及免疫标志物的初步筛选

目的:从基因转录水平探讨烧伤早期免疫系统功能变化情况,并筛选烧伤后免疫相关标志物,为临床诊疗提供新思路.方法:GEO数据库下载GSE7404数据集(小鼠,25%TBSA,3度),共获得32例基因表达谱数据.应用配对样本t检验和倍比法(fold-change,FC)筛选差异表达基因(P-value0.01和|lg FC|1).分别利用DAVID数据库和STRING数据库进行生物学过程功能富集分析及构建免疫相关蛋白互作网络.互作网络的模块及可视化分析应用Cytoscape软件进行,并用BINGO插件进行模块功能分析.结果:在烧伤后第1 d的基因表达谱的变化最显著,共1 825个差异基因被选出,其中上调基因658个,下调基因1 167个.功能富集分析显示刺激反应和免疫系统过程等生物学功能贯穿整个烧伤早期.蛋白互作网络分析表明LCK、CCR2、TLR2和My D88等免疫相关基因可能在烧伤早期免疫功能变化过程中起着重要的作用.结论:利用生物信息学方法,分析烧伤后时序基因芯片数据,可以有效地揭示烧伤后免疫系统潜在的分子机制,可以为早期诊断和治疗靶点的筛选提供新的思路.     

Complexes of MADS-box proteins are sufficient to convert leaves into floral organs

Genetic studies, using floral homeotic mutants, have led to the ABC model of flower development. This model proposes that the combinatorial action of three sets of genes, the A, B and C function genes, specify the four floral organs (sepals, petals, stamens and carpels) in the concentric floral whorls. However, attempts to convert vegetative organs into floral organs by altering the expression of ABC genes have been unsuccessful. Here we show that the class B proteins of Arabidopsis, PISTILLATA (PI) and APETALA3 (AP3), interact with APETALA1 (AP1, a class A protein) and SEPALLATA3 (SEP3, previously AGL9), and with AGAMOUS (AG, a class C protein) through SEP3. We also show that vegetative leaves of triply transgenic plants, 35S::PI;35S::AP3;35S::AP1 or 35S::PI;35S::AP3;35S::SEP3, are transformed into petaloid organs and that those of 35S::PI;35S::AP3;35S::SEP3;35S::AG are transformed into staminoid organs. Our findings indicate that the formation of ternary and quaternary complexes of ABC proteins may be the molecular basis of the ABC model, and that the flower-specific expression of SEP3 restricts the action of the ABC genes to the flower.     

梅花鹿抗病毒蛋白的生物信息学分析

通过在线生物软件分析梅花鹿四种抗病毒蛋白A3Z2、BST-2A、BST-2B和SAMHD1蛋白的生物信息学特性。从转录组中获得四种蛋白的基因序列,应用Prot Param、Protscale、SOPMA、TMHMM、Target P、Signal P、Motif Scan、Interproscan以及BLAST等在线软件分析蛋白的理化性质、二级结构、穿膜域、结构域等等。首次获得了四种抗病毒因子的基因和蛋白序列,梅花鹿A3Z2基因编码393个氨基酸,相对分子质量为47.59 k Da,碱性,不稳定性亲水蛋白,无信号肽和跨膜结构域,胞内定位,具有糖基化和磷酸化位点,两个胞嘧啶脱氨酶结构域。梅花鹿BST-2A和2B基因编码159个氨基酸,相对分子质量为17.69 k Da和18.12 k Da,酸性,不稳定性亲水蛋白,无信号肽,BST-2A有两个跨膜结构域,BST-2B有一个跨膜结构域,膜定位,具有糖基化和磷酸化位点。梅花鹿SAMHD1基因编码613个氨基酸,相对分子质量为70.51 k Da,碱性,不稳定性亲水蛋白,无信号肽和跨膜结构域,胞内定位,具有磷酸化位点,d NTP磷酸水解酶活性结构域。梅花鹿A3Z2、BST-2A、BST-2B和SAMHD1蛋白具有潜在的抗病毒能力。     

桂枝茯苓汤含药血清对子宫内膜癌细胞的影响

为探究桂枝茯苓汤含药血清是否通过调控3-磷酸肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT),参与调控子宫内膜癌细胞增殖、上皮-间质转化(EMT)与凋亡,将72只SD大鼠分为健康组、桂枝茯苓汤高剂量组、桂枝茯苓汤中剂量组、桂枝茯苓汤低剂量组和奥沙利铂组,对各组大鼠灌胃相应剂量药物,从大鼠的腹主动脉取血制备含药血清,培养子宫内膜癌HEC-B细胞,分为对照组、含药血清高剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组、奥沙利铂血清组、含药血清高剂量+通路激活剂组,向各组细胞培养基中加入相应血清及试剂.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western Blot法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平及PI3K/AKT通路相关蛋白磷酸化水平.结果表明：与对照组相比,含药血清高剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组的细胞生存率、Vimentin和N-cadherin蛋白表达量、PI3K和AKT磷酸化程度均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadh...     

RNA helicase activity associated with the human p68 protein

It has been proposed that p68, a nuclear protein of relative molecular mass 68,000, functions in the regulation of cell growth and division. A complementary DNA analysis of the protein has revealed extensive amino-acid sequence homology to the products of a set of genes recently identified in organisms as diverse as Escherichia coli and man, which include the eukaryotic translation initiation factor elF-4A. The protein products of the new gene family have several motifs in common which are thought to be involved in nucleic acid unwinding. As yet, however, only elF-4A, through its effect on RNA, has been shown to possess unwinding activity. Here we report that purified p68 also exhibits RNA-dependent ATPase activity and functions as an RNA helicase in vitro. The protein was first identified by its specific immunological cross reaction with the simian virus 40 large T antigen, the transforming protein of a small DNA tumour virus. Surprisingly, T antigen also has an RNA-unwinding activity: the homology between the two polypeptides, although confined to only a small region resembling the epitope of the cross-reacting antibody (PAb204), should therefore be of functional significance. Furthermore, the RNA-unwinding activity may be involved in the growth-regulating functions of both proteins.     

黄瓜子叶组培中器官发生的全息现象

以黄瓜子叶的１／２切块和１／３切块为外植体，用不同激素处理进进行芽器官诱导和发根培养。现黄瓜子叶切块在离体培养时同样存在全息现象，无论是芽的诱导是根的分化，其器官发生的部位以及器官发生的数量、频率的梯度变化都遵循生物全息律。     

磷脂酰肌醇转移蛋白质家族的研究进展

脂类的单体转移是由一娄蛋白质来执行的，这组蛋白质把脂类结合到疏水腔，从而使脂娄避开了含水环境、其中的这样一组蛋白质是磷脂酰肌醇转移蛋白质家族(PITPs)，能结合磷脂酰肌醇和磷脂酰胆碱，把它们从一个膜区转移到另一膜区．PITPs是在单细胞和多细胞组织中发现的，但在细菌中没有发现．在鼠和人类中，人们发现负责脂类转移的PITP结构域有五个蛋白，按照序列分成两类：类型I PITPs由两个家族成员α，β构成，它们是小蛋白35kDa，有一个PITP结构域，可以普遍表达；类型Ⅱ A PITPs(RdgBαI和Ⅱ)是很大的蛋白质，有另外的结构域，把蛋白质靶向膜，仅能结合脂类，但不能介导转移．类型Ⅱ B PITP(RdgBβ)与类型I在大小(38kDA)上相似，也是普遍表达的．类型Ⅲ PITPs，以secl4P家族为代表，是在酵母和植物中发现的，但是在序列和结构上与类型I和类型Ⅱ PITPs相似．讨论了PITP蛋白是被动转运蛋白辽是调节蛋白，在行使肌醇酯类和膜转换的专门的生物功能时，能否把转运和结合性质偶连起来．     

外源基因在转基因动物乳腺中的特异性表达研究

动物基因工程研究最大的突破就是转基因动物研究的进展,自八十年代初第一批转基因小鼠问世以来,转基因动物的研究已从方法学研究步入了应用性研究阶段,转基因动物除作为研究工具广泛应用于发育生物学、免疫学、遗传学以及医学等生命科学领域外,外源基因在转基因动物的特异性表达,尤其是在乳腺的表达,又可将转基因用作生物反应器进行了生物活性蛋白的生产而于商业生产,在转基因动物乳腺的特异性表达研究中,寻找乳蛋白基因调控