化学发光酶免疫分析法测定血清前列腺特异性抗原的研究

目的建立化学发光酶免疫分析法测定血清前列腺特异性抗原,用于临床前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎患者病情的监测和预后.方法化学发光酶免疫分析法(CLELA)采用辣根过氧化酶(HRP)-鲁米诺竞争法.结果该方法的灵敏度为0.01μg/L,在0.5～80μg/L的范围内线性良好.CLEIA测定血清前列腺特异性抗原的批内、批间与日间变异系数分别为5.0%,4.97%和4.93%.在血红蛋白浓度<2.4g/L、总胆红素浓度<342μmol/L、甘油三酯浓度<9.9mmol/L时的干扰率无临床意义.与放射免疫分析法有较好的相关性(r=0.9472).结论CLEIA法测定血清前列腺特异性抗原能及时有效地满足前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎患者的临床需要,有助于进一步对检测试剂盒的研制.     

松龄血脉康胶囊干预大鼠动脉粥样硬化作用及机制的研究

目的?探讨松龄血脉康胶囊对动脉粥样硬化(AS)大鼠干预作用及其机制。方法?正常大鼠饲喂高脂饲料配合腹腔注射维生素D₃建立AS大鼠模型。将实验大鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、松龄血脉康胶囊低(0.6g.kg_-1.d_-1,C组)、高(1g.kg_-1.d_-1,D组)剂量组、阳性对照辛伐他汀组(10 mg.kg_-1.d_-1,E组)。12周后腹主动脉取血检测各组血脂;酶联免疫吸附法测定各组血清超敏C反应蛋白、白介素6及单核细胞趋化蛋白1含量。结果?12周后与B组相比,D组可以显著降低血脂(TC、LDL) (P<0.05)并使血清超敏C反应蛋白及白介素6含量显著下降(P<0.01);C组、D组血清单核细胞趋化蛋白1含量显著下降(P<0.05) (P<0.01)。结论 松龄血脉康胶囊可通过降低AS大鼠血脂;降低血清超敏C反应蛋白、单核细胞趋化蛋白1、白介素6的水平,减轻炎症反应,阻止AS发展。     

胰岛素化学发光免疫测定法的建立

目的建立化学发光免疫法测定胰岛素及临床糖尿病患者胰岛素治疗跟踪与稳定性的可行性评估.方法 CLIA采用竞争法.结果该方法的灵敏度为1.24 mIU/L,在2.5～160 mIU/L的范围内线性良好.CLIA测定胰岛素的批内与日间变异系数分别为3.05%,4.61%和4.80%,4.92%.在血红蛋白浓度<2.4 g/L、总胆红素浓度<342 μmol/L、甘油三酯<9.9 mmol/L时的干扰率无临床意义.与放射免疫分析法有较好的相关性(r=0.915 6).结论 CLIA法测定胰岛素能及时有效地满足糖尿病患者的临床需要,有助于进一步对检测试剂盒的研制.     

冠心病患者血清超敏C反应蛋白的检测及其临床意义

目的:探讨血清超敏C反应蛋白(Hs-CRP)在冠心病患者中的变化及其临床意义. 方法:采用胶乳增强免疫比浊法分别测定3例稳定性心绞痛(SAP)、48例不稳定性心绞痛(UAP)、12例缺血性心肌病(ICM),29例急性心肌梗死(AMI)及29例急性心肌梗死恢复期患者血清Hs-CRP含量,并与40例健康人做比较,同时探讨Hs-CRP与肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的关系.结果:SAP、UAP、ICM、AMI和AMI恢复期组血清Hs-CRP质量浓度分别为:(0.78±0.52)mg/L、(1.43±1.27)mg/L、(1.67±0.89)mg/L、(31.64±37.37)mg/L及(0.56±0.27)mg/L,经与对照组(0.55±0.23)mg/L比较,UAP、ICM、AMI均显著性升高(P<0.01).结论:Hs-CRP与冠心病发生有关,对冠心病的预测、发展及预后判断有重要的临床价值.     

基于猪链球菌2型烯醇化酶建立的筛查并监控细菌侵袭性感染的ELISA方法

目的探索猪链球菌2型(S.suis2)重组烯醇化酶(Enolase)蛋白的免疫学特性,建立调查S.suis2侵袭性感染的标记和方法,并用于人群及猪群中S.suis 2感染的监控和筛选有效的疫苗抗原。方法 PCR法检测enolase在各血清型菌株中的分布情况,免疫印记检测Enolase的免疫反应性,建立筛查S.suis 2感染的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。结果 PCR检测显示enolase在多种血清型中广泛存在,Western-blot表明重组Enolase蛋白具有较好的免疫反应性。基于Enolase建立的ELISA结果显示,感染S.suis 2的猪血清中Enolase抗体效价较高。结论基于Enolase建立的ELISA方法能有效地用于S.suis 2感染的筛查和监控。     

C-反应蛋白与冠状动脉粥样硬化相关性研究

目的研究C-反应蛋白与冠状动脉粥样硬化斑块的相关性.方法选择89例原发性高血压患者,应用B型超声测所有病例颈动脉内膜粥样斑块,用免疫学方法测定血液中C-反应蛋白浓度.分析斑块与C-反应蛋白浓度的关系.结果粥样斑块Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ级C-反应蛋白浓度高于粥样斑块0级(P<0.05).结论原发性高血压患者血液中C-反应蛋白浓度增高与颈动脉粥样硬化关系密切.     

血清CK,CRP的测定对急性心肌梗死的诊断价值

目的 探讨血清肌酸激酶CK,C－反应蛋白（CRP）对急性心肌梗死的辅助诊断价值。方法 CK采用酶动力学方法测定,CRP采用免疫琼脂扩散方法测定。结果 CK在心肌梗死2h后有明显升高,6h后仍为阳性,CRP在发作2h后质量浓度明显高于正常人。结论 同时检测血清CK、CRP对急性心肌梗死有诊断价值。     

油脂中黄曲霉毒素B_1快速检测试剂盒研究

在胶体金免疫层析技术的基础上,建立了一种快速检测油脂中黄曲霉毒素B1(AFB1)的新方法.本研究的AFB1快速检测试剂盒突破了常规胶体金免疫层析检测试纸只能检测水溶液样品的限制,可对含油脂样品直接检测,工作时无需复杂的油脂样品处理工艺,缩短了预处理时间.其基本原理是利用吐温(Tween 20)对油脂样品进行乳化处理,使油脂在油脂处理液(甲醇-吐温-磷酸缓冲溶液)中均匀分散为微小油滴,形成稳定的水包油型乳化体系,从而使水相中的抗原、抗体反应不受油脂干扰.测试结果表明本试剂盒对油脂中的AFB1的检测限为10ng.mL-1,检测时间为10min,无假阳性、假阴性.     

血清C反应蛋白、补体C3与冠心病的相关性

目的探讨血清C反应蛋白（CRP）、补体激活标志物C3与冠心病发生的相关性。方法选取93例患者，其中稳定性心绞痛（SAP）50例、不稳定性心绞痛（UAP）43例，用免疫透射比浊法测定CRP、C3；并选取健康受试者40例作为对照。结果SAP、UAP患者的CRP、C3水平均较正常对照组高；UAP患者CRP水平比SAP患者CRP水平升高显著。结论CRP、C3含量增高是冠心病的危险因子，与冠心病的发生发展密切相关。     

胭脂红酸ELISA检测试剂盒的制备及应用

为了快速高效检测肉类食品中胭脂红酸含量,制备了胭脂红酸ELISA检测试剂盒,检测了市售肉类样品中胭脂红酸含量,并通过高效液相色谱法进行了验证。结果显示试剂盒的检测限为1 ng/mL,线性范围7. 8～1 150 ng/mL,灵敏度IC50值为95. 2 ng/mL;该试剂盒中的检测抗体对胭脂红的交叉反应率为108. 7%,但与其他4种色素添加剂均未见交叉反应。检测市售肉类样品的批内回收率在79. 1%～103. 1%之间,批间回收率在81. 6%～98. 8%之间;批内、批间试验的相对标准偏差基本小于10%,且与HPLC方法具有良好的一致性(R2=0. 927),说明该试剂盒具有灵敏、准确、简便、快速的特点,为胭脂红酸免疫学快速检测方法的建立提供了技术基础。     

C-反应蛋白对弥漫大B淋巴瘤的表达意义

目的探讨弥漫性大B淋巴瘤(DLBCL)患者的血清中C-反应蛋白(CRP)的表达以及其与病程和预后之间的关系.方法选取健康体检者47例,并收集同时期经病理确诊的DLBCL患者51例,采用酶联免疫法检测所有受试人群的CRP浓度.结果 DLBCL患者的CRP浓度为(23.85±7.22)mg/L,相对于健康人群的(6.64±3.17)mg/L明显升高.随着临床分期的进展,CRP水平逐渐上升,与对照组及不同分期之间比较差异均具有统计学意义(P0.05).高表达CRP患者化疗有效率为44.83%,低表达CRP组为77.27%,组间比较差异具有统计学意义(P0.05,χ2=31.728).GCB组患者的血清CRP水平明显低于NGCB组,且均显著高于对照组,组间比较差异均具有统计学意义(P0.05).结论 DLBCL患者进行CRP检测能够反映其疾病变化,并且能够应用于评估不同类型、分期和严重度.     

C反应蛋白与急性冠脉综合症的相关性及PCI术后的变化

探讨C反应蛋白(CRP)水平与急性冠脉综合征的相关性及行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后的变化。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定经冠状动脉造影确诊的57例冠心病患者及28例冠状动脉造影正常者的血清CRP水平,并比较16例行PCI术的患者术前、术后的血清CRP水平变化。血清CRP在急性心肌梗死组(15.74±1.62)mg/L明显高于不稳定型心绞痛组(11.35±2.52)mg/L,且两者明显高于稳定型心绞痛组(4.68±2.61)mg/L和正常对照组(2.68±1.16)mg/L,(P<0.01)。同时冠心病患者PCI术后血清CRP水平明显高于术前。CRP水平与ACS的临床类型密切相关,可以作为判断ACS预后的指标;PCI能导致冠心病患者的内皮损伤,加重炎症反应,可能是引起管腔内再狭窄的因素。     

葛根素治疗不稳定性心绞痛71例临床观察

目的探讨在常规治疗基础上应用葛根素注射液治疗不稳定性心绞痛(UA)的疗效。方法对于入院确诊为不稳定性心绞痛的患者,随机分为两组:对照组为常规抗凝组,低分子肝素5000u皮下注射,1次/12h,共5d,阿斯匹林肠溶片0.3g,1次/d,3d后改为0.1g,1次/d,长期服用;治疗组为葛根素组,葛根素300mg静脉滴注,1次/d,其余治疗同对照组。结果治疗组控制症状及改善异常心电图方面均优于对照组,并使C-反应蛋白(CRP)浓度更快下降,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。结论在抗凝及抗血小板基础上加用葛根素,治疗UA疗效优于常规抗凝治疗。     

运动疗法对膝骨性关节炎患者关节滑液中细胞因子的影响

目的:观察运动疗法对膝骨性关节炎(KOA)患者关节滑液中细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)含量的影响,探讨其治疗骨性关节炎的作用机制。方法:选择KOA患者80例,随机分为治疗组和对照组,各40例,治疗组患者口服双氯芬酸钠,同时进行运动疗法治疗,对照组患者口服双氯芬酸钠治疗,治疗4周。分别于治疗前后检测两组患者膝关节滑液中TNF-α、hs-CRP和MMP-3的含量。结果:治疗后,两组患者膝关节滑液中TNF-α、hs-CRP和MMP-3水平均较治疗前显著下降(P<0.01),治疗组患者膝关节滑液中TNF-α、hs-CRP和MMP-3含量均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:运动疗法能够降低KOA患者关节滑液中TNF-α、hs-CRP和MMP-3的水平,抑制炎症因子对关节软骨的破坏,从而延缓关节软骨退变的进程。     

人P53的原核表达及包涵体复性研究

通过检测血清中p53蛋白及其抗体变化诊断肿瘤的ELISA试剂盒的研发需要大量制备p53蛋白.本研究通过构建人野生型p53基因的原核表达质粒pET-32a-p53,在大肠杆菌中诱导表达得到p53包涵体蛋白,经包涵体变性、亲和纯化、复性得到可溶p53蛋白.发现利用8M尿素对包涵体进行变性溶解,经镍柱亲和纯化得到纯度超过95%的变性蛋白.尝试透析复性、稀释复性和柱上复性3种方法分别对p53变性蛋白进行复性.结果表明透析复性的复性率最高,这为原核表达制备p53提供了一种参考.本研究为ELISA法检测血清中p53蛋白及其抗体诊断肿瘤相关试剂盒研发奠定了基础.     

ELISA方法检测恒河猴血清中抵抗素

目的用ELISA检测试剂盒,探索一种恒河猴血清抵抗素（Resistin）定量的快速检测方法,初步建立各年龄段恒河猴血清抵抗素的正常参考值。方法选择用于人抵抗素检测的ELISA定量检测试剂盒,对恒河猴血清进行抵抗素的测定;按年龄段将实验猴分组,幼年组、成年组和老年组,每组10只,制备血清,检测抵抗素,并进行统计分析,初步建立各年龄段恒河猴血清抵抗素的正常参考值。结果用ELISA定量检测试剂盒测定恒河猴血清抵抗素数值稳定,幼年组、成年组和老年组的血清抵抗素正常参考值分别为（6 510±1 730）pg/mL、（5 880±1 250）pg/mL和（1 760±920）pg/mL,有随年龄增长而逐步降低的趋势,老年组极显著低于幼年组和成年组（P〈0.01）。结论人抵抗素ELISA检测试剂盒可以作为一种对恒河猴血清抵抗素定量的临时快速的检测方法,且随着年龄的增长其血清抵抗素正常参考值有逐步降低趋势。     

血清C反应蛋白水平与急性脑梗死病情及预后的关系

目的探讨急性脑梗死患者血清C反应蛋白（CRP）水平的变化与病情严重程度及其预后的关系。方法分别测定大动脉粥样硬化性脑梗死患者（LAA组）78例、腔隙性脑梗死患者（LCI组）36例和健康体检者（对照组）40例血清CRP含量,并进行比较。按脑卒中患者临床神经功能缺损程度评分（NDS）标准对患者进行评分。结果LAA组CRP含量高于LCI组,LCI组高于对照组（P〈0．05）;IAA组中,CRP异常率高于LCI组（P〈0．05）,CRP异常的患者NDS评分的改善低于CRP正常组,且CRP异常者预后中无变化者高于正常对照组（P〈0．01）。结论CRP水平增高与脑梗死的发生和严重程度预后有密切关系。     

自制和进口试剂盒在犬细小病毒检测中的应用

用本研究室研制的犬细小病毒单克隆抗体和多克隆抗体，采用夹心ＥＬＩＳＡ原理，研制成功犬细小病毒快速诊断试剂盒。对８７份犬粪便样品进行检测，并与ＨＡ法和美国ＩＤＥＸＸ公司研制的ＥＬＩＳＡ试剂盒进行比较。结果表明，与ＨＡ法相比，自制试剂盒的敏感性为９３．３％，特异性为１００％，总符合率为９５．４％；与美国试剂盒相比，自制试剂盒的敏感性为１００％，特异性为８４．６％，总符合率为９５．０％，达到国外同类产品     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因原核表达产物的检测应用

利用猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的原核表达产物,分别建立了检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的间接ELISA方法及乳胶凝集试验．对200份血清样品分别应用建立的间接ELISA方法和乳胶凝集试验,及由IDEXX公司生产的EUSA检测试剂盒进行抗体检测,结果显示,乳胶凝集试验及间接ELISA方法与IDEXX公司试剂盒相比,检出符合率分别达78％和91％．建立的乳胶凝集试验还需改进,而N蛋白-ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,是一种有应用前景的检测方法．