血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的酶法制备

以扇贝裙边的酶解产物——蛋白多肽对ACE活性的抑制率作为控制水解程度的指标,确定制备ACE活性抑制肽的最佳酶种及酶解工艺技术条件.通过胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合风味酶、枯草杆菌蛋白酶5种酶酶解扇贝裙边得到的蛋白多肽对ACE抑制能力的比较发现,5种酶在不同酶解时间所得到的酶解蛋白多肽都具有一定的ACE抑制能力,其中胃蛋白酶酶解蛋白多肽的ACE抑制率最高,为91.33%;再经L9(3)4正交实验对胃蛋白酶酶解工艺条件进行优化,确定酶解反应最佳条件是酶量400 U.g-底1物,pH 2.5,温度32℃,底物浓度(原料∶水)1∶2,酶解时间3 h;试验结果还表明,单酶(胃蛋白酶)的酶解蛋白多肽比复合酶(复合风味酶)和双酶(胃蛋白酶 木瓜蛋白酶)的酶解蛋白多肽对ACE活性的抑制能力都强.     

莲子蛋白酶解的扩散-反应动力学

为了探索莲子蛋白质的酶水解动力学特性,于温度为55℃和pH为5.0的条件下,用木瓜蛋白酶酶解莲子蛋白研究酶解莲子蛋白的拟态条件下的米氏常数Km,构建考虑底物抑制和无抑制等影响因素下的扩散-反应动力学模型.研究结果表明:酶和底物在反应体系中的扩散影响酶解反应;当底物初始质量浓度高于13.63 g/L时,反应底物对酶解产生抑制作用;建立的数学模型能够合理地描述和解释莲子蛋白降解的动力学过程,为确定酶解反应的各种参数提供依据.     

响应面法优化酶法制备酪蛋白糖巨肽的工艺条件

采用Minitab方法设计实验,对影响酪蛋白糖巨肽制备的酶解因素进行优化,发现酶解时间、酶解温度、酶解pH、酶与底物比是影响酶解酪蛋白的主要因素.由于唾液酸是酪蛋白糖巨肽的特征性组分,本文以唾液酸的含量表征酶解上清液中酪蛋白糖巨肽的含量.根据Minitab分析的结果,采用Design Expert软件中水平设计和响应面分析法对影响酪蛋白糖巨肽产量的主要因素进行优化,建立唾液酸含量A580对酶解主要条件的二次回归模型,其回归方程的决定系数达到了0.962,9.得到的最佳酶解条件为:酶解时间80,min,酶解温度42.5,℃,酶解pH 6.28,酶与底物比270,U/g.唾液酸含量A580最高为0.653,此时酪蛋白糖巨肽的得率为17.91 mg/g.     

酶解大豆粉蛋白条件优化研究

从底物浓度、pH值、酶解温度、加酶量、酶解促进剂和酶解时间等方面研究了碱性蛋白酶Alcalase和木瓜蛋白酶复合对全脂大豆粉酶解的影响,并运用单因素和正交试验设计优化酶解条件.结果表明,底物体积分数4.5%、pH值8.5、温度60℃、复合酶加酶量(碱性蛋白酶Alcalase与木瓜蛋白酶活力之比为2∶1)2 640 U/g,添加5 mmol/L Mn2+酶解180 min效果较好,水解度达到17.8%.     

胰蛋白和木瓜蛋白酶酶解酪蛋白产物的免疫活性

通过给小白鼠注射胰蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解酪蛋白产物,测定免疫器官重量、外周血白细胞数和E-玫瑰花环形成率研究酶解产物的免疫活性.结果发现两种酶的酶解物对由环磷酰胺所引起的免疫器官重量下降以及白细胞数的减少具有一定的抑制作用;并且两种酶解物也能够抑制环磷酰胺所引起的花环形成率下降.提示两种酶的酶解物对小鼠的免疫活性可能具有增强趋势.     

木瓜蛋白酶酶解豌豆蛋白挤出物产物自由基清除活性评价

以豌豆蛋白为原料,经过挤压处理得到挤出物.利用木瓜蛋白酶对其进行酶解,通过响应曲面实验对酶解条件进行优化设计.对酶解产物的抗氧化性质进行研究,得出如下结论:木瓜蛋白酶酶解最佳条件为加酶量12.1%(E/S)、温度60.6℃、pH 6.50、底物质量浓度0.071g/mL.在此条件下,DPPH清除率、·OH清除率预测值分别为98.3%、84.7%.经验证,得到最佳DPPH清除率、·OH清除率分别为98.2±0.21%、84.5±0.15%,所建模型预测准确可靠,酶解产物抗氧化性高.     

蛋白酶水解骨素的对比及其优化研究

选取木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶分别对骨素进行酶解,对比了几种酶解液的苦味和水解度.结果表明:风味蛋白酶最适合酶解骨蛋白,其水解产物鲜味明显,无明显苦味;木瓜蛋白酶水解骨蛋白效果最差,其水解产物苦味最为明显;中性蛋白酶水解效果介于风味蛋白酶和木瓜蛋白酶之间.风味蛋白酶水解骨蛋白的最佳酶解条件为:温度50℃,加酶量6 000 U/g底物蛋白,p H值为7.0,酶解时间2 h,料液比1∶5(g/m L),在此条件下其水解度可达34.80%.     

乳清蛋白肽的酶法制备、分离纯化及活性评价

以抗氧化活性及蛋白质回收率为筛选指标对乳清蛋白肽酶解工艺进行优化,用层析柱对酶解液进行逐级分离纯化,并对其分子质量进行检测.研究结果表明:利用胰酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解制备乳清蛋白肽,最佳用酶为碱性蛋白酶、最适底物含量为4.0%、最适加酶量为8000U/g、最佳酶解时间为4h;酶解液经DEAE-52纤维素层析后得到的A组分抗氧化活性最好,其还原力为0.320 0±0.004 1,DPPH自由基清除率为6.58%±0.36%;A组分再经Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析柱分离纯化后得到组分G,其DPPH自由基清除率为6.73%±0.083%;组分G的主要成分为分子质量378 u的肽段,其一级氨基酸组成为赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)及丝氨酸(Ser).     

酶解鲭鱼罐头蒸煮液制备生物活性肽

以鲭鱼罐头蒸煮液为研究对象,从风味蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶中筛得最佳酶为风味蛋白酶,通过单因素实验和正交试验确定风味蛋白酶的最佳酶解工艺为:5 g底物(即5 m L蒸煮液)、加酶量28.6 mg/m L、时间5 h、p H值6.0、温度50℃.按最佳工艺条件酶解,并经小分子电泳分析,证明蒸煮液主要蛋白被风味蛋白酶高效酶解;所得生物活性肽酶解液具有较好的抗氧化活性,其DPPH自由基清除活性的IC50值为31.35 mg/m L;羟自由基清除活性的IC50值为9.807 mg/m L;还原力的IC50值为7.019 mg/m L.     

褐藻胶裂解酶AlgL17酶解工艺优化及酶解产物分析

为探索重组褐藻胶裂解酶AlgL17酶解工艺的优化条件,采用3,5-二硝基水杨酸法(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)和苯酚-硫酸法分别测定反应生成的还原糖及总糖含量,计算平均聚合度,从反应温度、反应pH值、底物质量分数、加酶量及振荡速率5方面探讨各因素对酶解反应的影响,确定褐藻胶裂解酶酶解工艺的最优条件。结果表明,AlgL17酶解海藻酸钠的最优工艺条件:反应温度为35℃,pH=8. 0,初始底物质量分数为1. 1%,加酶量为1. 16 U,不振荡反应180 min。在此条件下,产生的还原糖质量浓度为7. 09 g/L,酶解产物的平均聚合度为2。液相色谱质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)分析海藻酸钠酶解终产物为单糖、二糖、三糖和四糖。     

斑点叉尾鮰鱼皮水解产物及其理化性质

以斑点叉尾鮰鱼皮为原料,在低于蛋白变性温度的条件下利用乙酸提取和乙酸/木瓜蛋白酶提取的2种不同水解产物,对其理化性质进行系统测定.实验结果表明,乙酸水解产物和酶溶性水解产物的热变性温度分别为30～35℃和28～35℃;酶溶性水解产物在溶解性能、乳化性能和乳化稳定性方面优于乙酸水解产物,而在吸水性能、吸油性能、起泡性以及泡沫稳定性方面,乙酸水解产物明显好于酶溶性水解产物.     

Effect of enzymatic fish frame protein hydrolysate on freeze-induced denaturation of myofibrillar protein from bighead carp fish （Aristichthys nobilis ） during frozen storage

Three kinds offish frame protein hydrolysates （PPH, APH and FPH） were prepared from fish frame of red drum （ Sciaenops ocellatus ） by papain, alkaline proteinase and flavorzyme treatment. The hydrolysates were mainly composed of peptide （83.5 % -84.6% ） and displayed different molecular weight distribution pattern. The protective effects of hydrolysates on the freeze-induced denaturation of myofibrillar protein （Mf） from bighead carp （Aristichthys nobilis） mince during storage at -20℃ for 12 weeks were investigated. The hydrolysate （5 % dried weight/wet weight） reduced the freeze-induced denaturation of Mf as evidenced by the lowered decrease in Ca-ATPase activity and reactive sulfllydryl contents as well as the impeded increase in surface hydrophobicity. Microscopic photographs indicated that the hydrolysates inhibited the growth of ice crystal in fish mince, and then prevented the aggregation of Mf during frozen storage. The protective effects of hydrolysates on freeze-induced denaturation of Mf were influenced by the molecular weight distribution. PPH had strongest cryoprotective ability among three hydrolysates.     

两步法活化微晶纤维素及在固定木瓜蛋白酶中的应用

微晶纤维素经过两步活化,可在温和条件下实现木瓜蛋白酶固定化,用对甲基苯碘酰氯活化微晶纤维素后,与乙二胺反向载体引入有机胺基因,再用戊二醒处理所得的二次活化载体可在温和条件固定木瓜蛋白酶,所得固定化酶活力为103U／g载体,与溶液酶比较,热稳定性有明显提高。     

Coffee contains potent opiate receptor binding activity

Opiate receptor-active peptide fragments (exorphins) have been identified recently in casein and gluten hydrolysates, and morphine has been found in bovine and human milk. To determine whether similar peptides or alkaloids occur in other foodstuffs, we have screened potential sources using a rat brain homogenate assay to detect opiate receptor activity. We report here that instant coffee powders from a variety of manufacturers compete with tritiated naloxone for binding to opiate receptors in the rat brain membrane preparations, with no significant difference between normal and decaffeinated coffee. The receptor binding activity resembles that seen with opiate antagonists, in that there was no change in the half-maximal effective dose (ED50) in the presence of 100 mM Na+; on bioassay, the activity was similarly shown to be antagonistic and specific for opiate-induced inhibition of twitch. Preliminary characterization of the activity reveals that it has a molecular weight (MW) in the range 1,000-3,500, is heat-stable, ether-extractable, not modified by enzymatic digestion with papain, and clearly separable from caffeine and morphine on TLC. As its concentration in an average cup of coffee is five times the ED50, these data suggest that drinking coffee may be followed by effects mediated via opiate receptors, as well as effects of caffeine.     

章鱼内脏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose 离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂 (Octopus Trypsin Inhibitor ,OTI)．Tricine-SDS-PAGE 电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u．性质分析结果表明:OTI在pH=1.0~11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100 ℃下加热1 h、2 h 后仍分别具有90% 和65% 的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 (MBSP) 引起的肌球蛋白降解．     

木瓜蛋白酶的原位固定化及理化性质研究

以氨基载体原位固定化PEG相中的木瓜蛋白酶,获得了高固定化率(95.9%)和酶活回收率(38.9%)的固定化木瓜蛋白酶,解决了双水相分离纯化后成相聚合物和目的蛋白难以分离的问题。固定化木瓜蛋白酶的最适pH在7.0左右,最适温度处于60～70 ℃之间。相比游离木瓜蛋白酶,在广泛的pH区间内(3.0～9.0)固定化酶稳定性都较好,热稳定性也有改善。在4 ℃密闭容器内将固定化木瓜蛋白酶以湿润状态保存可以较好地保留其活性。LH-HA固定化木瓜蛋白酶可以特异性地水解单克隆抗体IgG,制备Fab和Fc片段。     

Alcalase酶解7S富集组分及其产物功能特性研究*

摘要：采用Alcalase对β-伴球蛋白(7S)富集组分进行酶解处理,通过对其酶解产物溶解性、乳状液粒度分布和热诱导凝胶特性的研究,探讨了不同水解度(DH)对产物功能特性的影响。结果表明：酶解初期(酶解时间30min内,DH<7.69%)是影响7S富集组分功能特性的关键阶段,DH为4.53%时,其酶解产物溶解性、乳化性和凝胶性显著改善,中性条件下溶解性提高27.3%,相应乳状液体积平均粒径(D[4.3])减少至0.936μm,仅为7S富集组分乳状液D[4.3]的4.55%,弹性模量增加了158.15%。DH进一步增大,相应酶解产物的溶解性、乳化性和凝胶性反呈下降趋势。     

荷叶生物碱对胰脂肪酶的抑制作用

荷叶粗粉经过石油醚去脂后，用95%乙醇提取，初步纯化后得荷叶生物碱粗提物.初步探 讨了荷叶生物碱对胰脂肪酶的抑制机理：抑制剂不直接与酶分子作用，而是间接改 变底物乳化来阻碍底物 酶结合达到抑制作用.通过试验测定了抑制常数： K i=0.2 mg /m L.Dixon图和Lineweaver Burk图的特征表明，该抑制剂对胰脂肪酶的抑制呈非竞争性抑制.