乙酰胆碱酯酶壳聚糖膜的制备研究

以新鲜母鸡血为材料,30%～70%(V/V)乙醇分步沉淀制备粗酶制剂,再经DEAE-Cellulose与Sephadex G-75 柱层析,部分纯化鸡红细胞乙酰胆碱酯酶(AChE),再以壳聚糖制备成膜作为载体,采用吸附-交联法固定AChE制备壳聚糖酶膜,分别考察制备壳聚糖酶膜的壳聚糖浓度(0、0.05、0.1、0.15、0.2g/ml),壳聚糖酶膜的吸附时间(2、4、6、8、10、12h)和吸附温度(0、4、25、30、37℃),以及戊二醛质量浓度(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%),戊二醛交联时间(40、80、120、160、1200min),戊二醛交联温度(0、4、25、37℃)和给酶量(0～2000U/ml)对壳聚糖酶膜固定化效果的影响.结果显示,鸡红细胞AChE粗酶制剂的部分纯化倍数为12倍时,活力回收34.1%.优化的固定化条件是以0.1g/ml壳聚糖溶液制备载体膜,采用950 U/ml的酶液(蛋白质含量为 0.43 mg/ml),在4℃下吸附10 h,再以质量浓度为0.6%的戊二醛溶液4℃下交联2h.此条件下制备的酶膜活力达11.5 U/cm2,活力回收达 30%.     

重组毕赤酵母生产β-葡萄糖苷酶发酵条件优化及固定化研究

为了实现绿色木霉菌Trichoderma viride来源的β-葡萄糖苷酶在重组毕赤酵母中的高效表达,对重组菌P.pastoris KM71/pPIC9K-bgl1/pPICZ A-pdi进行3.6L罐发酵培养条件优化。结果表明,当诱导温度28℃,初始诱导菌体浓度50g/L,诱导阶段甲醇体积分数1.0%时,酶活力最高,能达到1452U/mL。同时以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂,采用吸附交联法对β-葡萄糖苷酶进行固定化。结果表明,当壳聚糖质量浓度0.03g/mL,戊二醛质量浓度0.008g/mL,游离酶添加量400U/g(1g壳聚糖微球加酶量为400U),固定化吸附时间20h时,固定化酶酶活回收率最高,达到65.4%。以800g/L葡萄糖为底物,优化的转化条件下连续转化6次,低聚龙胆糖产率仍达到15.2%,显示出该固定化酶具有较好的持续利用性及较高的低聚龙胆糖生产能力。     

葡萄糖氧化酶-过氧化氢酶共固定研究

以弱碱性阴离子交换树脂D301T为载体,对过氧化氢酶（CAT）和葡萄糖氧化酶（GOD）两种酶进行分次固定,并对固定化条件进行了优化。所得最佳工艺条件为：共固定化酶采用先固定CAT,再固定GOD的顺序进行,其中CAT 0.5 mL,GOD 0.25 mL。所得CAT蛋白结合量为1.07 mg/g,固定化效率为46.71%;GOD蛋白结合量为1.58 mg/g,固定化效率为43.62%;每mL GOD酶液的表观酶活为47.98 U/mL,每g载体中GOD的酶活为12.0 U/g。以戊二醛作为交联剂,体积分数取0.5%,交联时间取15 min时,所得固定化酶表观酶活达到最大值,为14.66 U/g,固定化酶连续反应10批后,其酶活为初始值的85.3%,显示出固定化酶具有良好的操作稳定性。     

海藻酸钠固定化β-葡萄糖苷酶的制备及其性质研究

在活性炭、明胶等8种固定化载体筛选的基础上研究了以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂固定化β-葡萄糖苷酶的条件,并对固定化酶的酶学性质及其在催化制备大豆异黄酮活性苷元染料木素中的应用进行了研究。β-葡萄糖苷酶在0.20%戊二醛溶液中交联2 h后再与20 g/L海藻酸钠混合,然后逐滴加到4 g/LCaCl2溶液中,固化1 h后过滤、洗涤得固定化β-葡萄糖苷酶,固定化酶的酶活回收率为83.67%。固定化酶的最适温度、热稳定性、pH值稳定性以及与底物的亲和力都有所提高,最适pH值基本不变。该固定化酶重复使用6次后其活力仍保持90.94%,染料木苷转化率达60.02%。     

戊二醛交联壳聚糖固定化青霉素G酰化酶及其性质研究

以戊二醛为交联剂,壳聚糖为载体固定化粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶.通过单因素和正交试验优化确定固定化最佳条件:0.1 g载体,2.5%戊二醛,酶量160 U,0.6mol/L NaCl,0.2 mol/L磷酸缓冲液9.5 mL,37℃,pH 8.0,固定化38 h.固定化酶最高比活为48.7 U/g湿载体.固定化酶性...     

凝胶法固定乙酰胆碱酯酶的研究

以海藻酸钠为载体包埋固定乙酰胆碱酯酶(AChE),考察了影响酶固定化的重要因素,获得了最佳固定化条件。实验结果表明,将1U乙酰胆碱酯酶,2μLφ(戊二醛)为5%的戊二醛,1μL10g/L的牛血清白蛋白(BSA),与30g/L的海藻酸钠配成300μL的酶溶液,滴入20g/L的氯化钙溶液中,3℃下固定8h,制备的凝胶酶珠机械强度高,活力重现性好。在20g/L的氯化钙溶液中3℃下保存40d,活力基本不变,相对标准偏差为5.53%～6.82%。     

固定化木瓜蛋白酶的研究及其应用

从8种载体材料中选取自制的氨基含量约2．878mmol/g的甲壳质作为固定化载体,采用吸附交联法,以戊二醛为交联剂,对木瓜蛋白酶进行固定化。17．5mg/g的固定化酶／载体比较,pH6.5,5℃下,先吸附10min,再以0．7％的戊二醛终浓度交联12h,所得固定化酶酶活回收可达52．0％,酶活力为3．54U／g。固定化酶在65℃以下,溶液酶在55℃以下稳定;固定化酶在pH7.0以下稳定,溶液酶在pH6.0以下稳定;5℃条件下,固定化酶贮藏半衰期为183d;以酪蛋白为底物,固定化酶的操作半衰期可达27d。用固定化酶水解甲壳胺,产物分子量小于10 000的甲壳胺低聚糖得率约为45．55％。     

多胺化壳聚糖载体固定化漆酶及其性质研究

以多胺化壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂固定化白毒鹅膏菌漆酶,研究了最佳固定化条件及固定化酶的部分性质.结果表明,戊二醛浓度2％,交联时间14h,固定化时间6h,给酶最70mg/g载体时同定化效果最佳,酶活力可达64.3 U/g.此固定化漆酶的Km为8.73mmol· L-1;最适pH值4.2,较自由漆酶向酸性偏移;最适反...     

壳聚糖固定化云芝漆酶的制备及特性

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂制备固定化漆酶,测定了不同戊二醛浓度、交联时间、给酶量以及固定化时间对固定化漆酶活性的影响。结果表明,固定化反应的最佳条件为戊二醛浓度5%,交联时间8h,给酶量20mg/g载体,固定化时间6h,在此条件下制备的固定化漆酶酶活性保持率为52.2%。此固定化漆酶具有最大活性时的溶液pH值在4.5,相比于自由漆酶的最佳pH值5.0,其向酸性偏移;与自由漆酶相比,固定化酶有很好的稳定性和可重复使用性。     

聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶的工艺研究

采用交联法制备了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)载体,并将其用于固定化L-天门冬酰胺酶。研究了聚乙二醇浓度、交联剂戊二醛浓度、活化剂甲醛浓度、酶溶液浓度等因素对PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶活力的影响。结果表明：在适当的条件下,PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶的活力可达20～40U／g,并且PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶具有良好的生化性质。