世界研究开发动态与评论

表观遗传基因沉默研究新进展美国弗吉尼亚联邦大学Massey癌症中心的研究人员确定出了一种蛋白质在血红蛋白基因沉默中的作用。这种蛋白将可能成为在分子水平上治疗遗传性血液疾病如镰刀细胞贫血症和β-地中海贫血症的一个非常有潜力的靶标。这项研究的结果公布在4月的PNAS(美国     

意大利专家发现女性乳腺癌发病新机理

意大利的一个科研小组最近在女性乳腺肿瘤细胞内发现了一种能促使肿瘤细胞病变、转移的蛋白质和一种能抑制肿瘤细胞扩散的蛋白质,这一发现为人类进一步研制有效的药物治疗女性乳腺癌提供了新的可能据意大利媒体的道,这个科研小组是由那不勒斯癌症研究实验室的研究员马西莫·佐洛牵头,由设在萨丁岛的人类基因研究所等机构研究人员组成,研究得到了意大利全国癌症研究协会的资助。佐洛等人在连续数年的跟踪调查和研究后发现,在女性乳腺肿瘤细胞内,存在一种被称作“H -PRUNE”的蛋白质和指导合成这种蛋白质的基因,“H -PRUNE”蛋白质会试图…     

si—DNMT1对肝门部胆管癌细胞抑癌基因甲基化的作用

目的研究RNA干扰对肝门部胆管癌细胞株QRC939抑癌基因甲基化的影响，初步探谤其在胆管癌治疗中的价值。方法构建靶向hDNMT1的发夹式siRNA表达载体；运用脂质体介导法将其转染人胆管癌细胞QBC939；RT-PCR法检测不同时间点hDNMT1、CDH1、p15的表达水平；MSP方法检测转染前后抑癌基因CDH1、p15的甲基纯状态；MTT检测各组细胞的增殖能力。结果1）hDNMT1的基因沉默恢复了抑癌基因CDH1、p15的表达水平；2）CDH1、p15的表达沉默是由启动子高甲基亿导致的；3）转染靶向hDNMT1的发夹式siRNA表达载体能有效地抑制QBC939的增殖能力。结论靶向hDNMT1的发夹式siRNA表达载体能有效、持续、稳定发挥对hDNMT1的基因沉默作用，恢复抑癌基因CDH1、p15的表达水平，从而抑制QBC939肿瘤细胞增殖。     

基因学(Genics)--未来的新兴学科

遗传学的发展是从Heredity(以生物外部表现型为主的数量遗传研究）→Genetics(以生物体内染色体为主的细胞遗传研究）→Genics(以染色体上核酸为主的分子遗传研究）,基因是研究的核心。在二十世纪,在理论方面,基因的结构、功能和概念不断扩展,由单基因→基因家庭→基因簇→同源框基因→基因组学,在应用方面,从基因工程→基因克 隆→转基因→基因沉默→基因流→转基因安全性的研究,有了飞跃性的发展。基因研究已渗透到各个科学领域,出现了后基因组学,功能基因组学,蛋白组学,功能蛋白组学,功能酶学,生物信息学,生物计算机,药物基因组学,疾病基因组学,工业基因组学,转基因（食品）安全性,基因流,环境基因学等新的基因研究方向。基因产业和基因经济将会成为二十一世纪经济发展的新生点。基因学将在二十一世纪走向更加成熟和完善。     

植物核糖体失活蛋白的研究进展

植物来源的核糖体失活蛋白（ｒｉｂｏｓｏｍｅ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＲＩＰ）是一类ＲＮＡＮ－糖苷酶,它能够对核糖体工业基上的ｒＲＮＡ进行脱腺嘌呤作用,从而破坏核糖体的结构,抑制蛋白质的生物合成。核糖体失活蛋白按照一级结构可以分为两类：Ｉ型ＲＩＰ由一条多肽链组成,称单链蛋白;Ⅱ型ＲＩ是通过二硫刍连接的双链蛋白。近年,人们发现核糖体失活蛋白具有多核苷酸：腺苷糖苷酶活性,进一步解释了它作为防御蛋白的生物学功能。随着增强因子和其它相关蛋白质的发现,人们对核糖体失活蛋白和核糖体的相互作有了更进一步的了解。     

东亚三角涡虫肌球蛋白轻链（MLC）融合蛋白原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

构建了涡虫肌球蛋白轻链融合蛋白原核表达载体，并进行表达，根据涡虫基因文库中肌球蛋白轻链（Mlc）基因完整的ORF序列设计合成特异性51物，通过PCR扩增涡虫Mlc基因，并插入到融合蛋白原核表达载体PET-28a中，转化宿主菌B121（DE3）细胞．0．4mMol／L的IPTG诱导表达MLc蛋白．重组质粒测序和酶切结果显示Mlc基因已正确插入PET-28a中，重组蛋白经SDS—PAGE在18．2KD处有一条明显的蛋白表达条带。western blot检测得到同样大小的条带。结果表明，涡虫His-MLC融合蛋白已成功表达。     

世界研究开发动态与评论

美国开发流感疫苗辅助贴剂美国一家公司正在研制一种新型贴剂 ,它可加强流行性感冒疫苗对人体的作用 ,有利于老年人等免疫力低下者更好地预防感冒病毒。每年 ,全球约有 5 0万人死于流感 ,而其中大部分是 6 5岁以上的老年人。因为老年人免疫系统逐渐衰退 ,每年一度的流感疫苗接种只能对他们起到轻微的预防作用。英国《自然》杂志网站曾报道说 ,美国马里兰州的艾欧迈(IOMAI)公司的研究人员目前正在研究一种贴剂 ,其中含有从大肠杆菌中提取的有毒蛋白质。如果将这种贴剂贴在疫苗接种后留下的针孔上 ,该有毒蛋白便可接触皮肤中的免疫细胞 ,作…     

稳定表达绿色荧光蛋白的B16细胞株的建立及其生物学特性研究

目的建立稳定表达绿色荧光蛋白的B16黑色素瘤细胞株，并研究其生物学特性。方法转染增强型绿色荧光蛋白基因入B16细胞，经G418联合单克隆培养，筛选阳性细胞。激光共聚焦荧光显微镜观察EGFP阳性细胞形态；流式细胞仪检测细胞内EGFP基因的蛋白表达；RT-PCR检测EGFP基因的mRNA表达；皮下接种及MTF法评价细胞在体内外的生长特性。结果流式细胞仪检测表达绿色荧光蛋白的细胞阳性率为99．81％，RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA阳性表达。生长曲线显示其体外增殖趋势与B16相似，EGFP—B16体内成瘤速度较B16慢（P〈0．05）。结论稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP—B16细胞株成功建立，可作为作为进一步研究恶性黑色素瘤的材料。     

慢病毒介导的α-烯醇化酶基因沉默对宫颈癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的探讨沉默α-烯醇化酶(ENO1)基因对宫颈癌SiHa细胞化疗药物敏感性的影响。方法采用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立ENO1基因稳定沉默SiHa细胞系;通过western blot方法验证ENO1的表达水平;ENO1基因沉默后运用细胞增殖实验检测其对细胞增殖能力的影响;采用MTT的方法评价沉默ENO1基因的SiHa细胞对紫杉醇和顺铂的敏感性。结果成功建立ENO1基因沉默的SiHa细胞系;沉默ENO1基因表达后,SiHa细胞增殖能力下降;沉默ENO1基因能够增强SiHa细胞的药物敏感性。结论:ENO1能够影响宫颈癌细胞的增殖及其对化疗药物的敏感性。     

世界研究开发动态与评论

俄白两国科研人员联手培育转基因山羊乳传递蛋白质是母乳中的一种非常重要的蛋白质,婴儿出生时,母乳中的乳传递蛋白质含量可达每升6克。这种蛋白质具有很强的抗氧化性,能够很好地保护婴儿免受疾病干扰,提高婴儿的免疫力,对婴儿的成长和发展具有重要作用。俄罗斯科学院遗传生物研究所和白俄罗斯国家科学院动物科研所正在积极合作,培育含有人体基因的转基因母山羊,以大量获取含有乳传递蛋白质的转基因山羊奶。俄罗斯和白俄罗斯两国科研人员联手,已研制出获取乳传递蛋白质基因结构的方法,并在老鼠身上进行了试验。结果发现,实验鼠分泌的乳汁中…     

儿茶素对晚期糖基化终末产物诱导的内皮细胞凋亡的干预作用

目的探讨儿茶素对晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导内皮细胞凋亡的干预作用。方法糖孵育法制备晚期糖基化终末产物，分离肾血管内皮细胞，将内皮细胞分成空白对照组、AGE组、浓度分别为10、15、20μg／ml的儿茶素组共五组。实验末，采用AlamarBlue还原法测定同内皮细胞增生活力，TUNEL法测定细胞凋亡率，生化法测定培养上清中·OH、MDA浓度，RT-PCR测定Bcl-2mRNA表达，Western-Blotting测定Bcl-2蛋白活性。结果与对照组相比，AGE组内皮细胞增生活性、Bcl-2基因与蛋白活性显著降低（P均〈0．01）；凋亡率、·OH与MDA浓度显著增加（P均〈0．01）；与AGE组相比，儿茶素各浓度组内皮细胞增生活力与Bcl-2基因与蛋白活性表达增高，凋亡率、·OH与MDA浓度降低；儿茶素各剂量组之间呈浓度梯度效应。结论儿茶素可降低AGEs引起的血管内皮细胞凋亡，其机制可能是通过有效清除活性氧自由基、上调Bcl-2mRNA与活性蛋白表达，阻断内皮细胞内过氧化物的堆积二种途径实现的。     

法国科学家发现新的结核病敏感性遗传因子

巴斯德研究院和法国国家科学研究院（CNRS）的研究团队最近确认出一个相当可能与结核病有关的遗传因子。他们在分析大量感染结核杆菌（Mycobacterlum tuberculosis）者的DC-SIGN基因变异资料后，发现具有此基因的某一种变异型者不发病的比例特高。此研究结果发表在PLoS Medicine上，预期将有助于将来结核病感染的研究及拟定新的治疗策略。     

中国汉族人群中Vav2基因和Vav3基因多态性与原发性闭角型青光眼之间关系的研究

目的本实验的目的是研究沌以和Vav3基因多态性与中国汉族人群中原发性闭角型青光眼（Prim aryangle-closure glaucoma，PACG）的遗传性是否有联系。方法211名原发性闭角型青光眼患者和206名性别和种族匹配的健康对照者纳入到本病例对照研究中。2个单核苷酸多态（the single nucleotide polymorphisms，SNPs）rs2156323（Vav2）和rs2801219（vav3）的基因分型用聚合酶链反应的限制性片段长度多态性分析（polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism，PCR—RFLP）。这两个基因位点的多态性与PACG遗传性之间的关系用卡方检验来评价。结果rs2156323（Vav2）和rs2801219（Vav3）的基因频率在所有参与者中均没有偏离哈迪一温伯格平衡（Hardy-Weinberg Equilibrium，HWE，P〉0．05）。该两个位点的等位基因频率和基因型频率的分布在PACG患者和正常对照者之间均没有差异。结论本研究的结果显示rs2156323和rs2801219可能不是中国汉族PACG的易感基因位点，Vav2和Vav3基因可能不是中国汉族PACG患者的易感基因。     

美科学家发现导致细胞癌变的基因

美国科学家进行的一项新研究表明，如果消除实验鼠体内一个特殊基因的活性，以减少一种蛋白质的产生，就可以使实验鼠的癌细胞转变为无害的正常细胞。     

不同转移潜能乳腺癌细胞中EGFR的表达及意义

目的 研究表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）在不同转移潜能乳腺癌细胞中的表达,并探讨其在乳腺癌侵袭转移过程中的作用. 方法 利用人工基质膜侵袭实验获得高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测两系细胞生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测两系细胞周期,transwell侵袭小室模型比较两系的迁移能力.应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western Blot）检测EGFR在两系细胞中的表达. 结果 利用transwell小室成功筛选出高、低转移潜能乳腺癌细胞亚系;它们的体外生长速度、倍增时间、细胞周期和侵袭力具有明显差异;RT-PCR和Western Blot均显示在高转移潜能乳腺癌细胞中EGFR在基因和蛋白水平的表达均显著高于低转移乳腺癌细胞. 结论 EGFR的过表达与乳腺癌细胞侵袭能力显著性相关,EGFR在乳腺癌侵袭过程中发挥了重要的作用.     

基因疗法助胖老鼠"燃脂瘦身"

美国和瑞士科学家日前通过基因疗法,将老鼠体内储存脂肪的细胞转化为消耗能量的细胞,使老鼠的体重平均减少了四分之一。这可能为治疗肥胖症以及糖尿病等与肥胖相关的疾病提供一种新方法。英国《新科学家》杂志网站前些日报道,美、瑞科学家给有患糖尿病倾向的老鼠静脉注射一种名为腺毒素的病毒。这种病毒含有一种促使动物体内产生“瘦身蛋白”Leptin的基因。在静脉注射2到4天后,老鼠体内由肝脏合成的Lep tin含量比正常水平高出近5 0倍。两周后,老鼠的体重减少了2 0 7克到2 80克,食量也减少了三分之一。研究人员随后对老鼠体内的脂肪细胞进行…     

胃癌侧群细胞耐药性研究及干细胞相关基因检测

目的研究胃癌侧群（Side Population，sP）细胞对化疗药物5-Fu（氟尿嘧啶）的耐药性及可能机制，并检测干细胞相关基因Nanog、Musashi-1及cD44的表达情况。方法选择人胃癌细胞株sGc-7901，以荧光染料H0echst 33342染色，维拉帕米桔抗对照，应用流式细胞仪分选sP细胞和nonsP细胞。细胞耐药实验比较sP细胞与nonsP细胞对化疗药物5．Fu的耐药性差异；westem_h10t检测ABcG2和bcl-2蛋白表达情况；流式细胞仪分析细胞周期；荧光定量PcR检测两组细胞中干细胞相关基因Nanog、Musashi-1及cD44mRNA的表达差异。结果胃癌细胞株sGc．790l中sP细胞的比例为2．8％，sP细胞对5-Fu的耐药存活率明显高于non-sP细胞（P〈0．05），与nonsP细胞相比，sP细胞高表达耐药蛋白ABcG2和抗凋亡蛋白bcl-2，有更多的细胞处于c0／G1期（P〈0．05），并高表达干细胞相关基因Musashi-1和cD44。结论胃癌sGC_7901细胞株中sP细胞对化疗药物5．Fu的耐药性明显高于nonsP细胞，其耐药机制可能与sP细胞高表达耐药蛋白ABcG2和抗凋亡蛋白bcl-2，有更多细胞处于G0／Gl期有关；Musashi-1和cD44可能是相对特异性的胃癌干细胞标志物。     

胎儿宫内发育迟缓疾病标志物的初步研究

目的筛选胎儿宫内发育迟缓大鼠血清中差异表达的蛋白质，寻找与胎儿宫内发育迟缓相关的疾病标志物。方法收集大鼠疾病正常组、IUGR组血浆各3例；TCA法沉淀血清蛋白，建立疾病组和正常组蛋白质的双向凝胶电泳图谱；ImageMaster分析软件分析差异蛋白质；飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）获得差异蛋白肽指纹图谱，MASCOT引擎搜索蛋白质种类。结果鉴定出个差异蛋白点3个，分别为：IGF—I、IGF-Ⅱ、IGFBP-3。结论IGF—I、IGF-II、IGFBP-3，可能是胎儿宫内发育迟缓疾病诊断的生物标志物。     

嗜热蛋白稳定机理研究进展

嗜热蛋白是一类主要来源于嗜热微生物的热稳定蛋白，能够在高温下长时间保持活性而不变性．通过对嗜热蛋白耐热机理的深入研究，对于人们深入理解蛋白质的折叠、结构与功能、进化以及在蛋白质加工中对蛋白质分子的定向设计和改造有着重要的意义。本文主要介绍了目前对嗜热蛋白的研究概况和主要进展。     

嗜热蛋白热稳定机理研究进展

嗜热蛋白是一类主要来源于嗜热微生物的热稳定蛋白,能够在高温下长时间保持活性而不变性,通过对嗜热蛋白耐热机理的深入研究,对于人们深入理解蛋白质的折叠、结构与功能、进化以及在蛋白质加工中对蛋白质分子的定向设计和改造有着重要的意义.本文主要介绍了目前对嗜热蛋白的研究概况和主要进展.