盐生盐杆菌含耐盐相关基因DNA片段的克隆

将盐生盐杆菌总DNA的BamHI不完全酶切片段与质粒pUC19连接成重组质粒,并以重组质粒转化E.coli JM101.经X-Gal-IPTG法筛选白色重组子,结合高盐平板检测,已经获得了3株比原受体菌的耐盐性提高30％－67％的转化子。重组质粒酶切电泳分析表明,被克隆的盐生盐杆菌含耐盐相关基因的DNA片段长度在1．0－3．5kb之间。     

耐盐细菌质粒的研究

本实验以1株耐盐细菌My23（耐18％NaCl）作为研究对象,采用碱裂解法对其进行质粒提取,结果表明可以提取得大小2个不同质粒;改变常规提取方法中的部分环节,如加入STE清洗菌体的培养基成分,溶菌酶的使用,以及加入碱裂解液Ⅰ后静置20min,对该耐盐菌质粒的提取有较好的作用。经SDS法将小质粒消除后的菌株与野生型菌株的耐盐功能比较,发现提取出的小质粒与耐盐无关。将大肠杆菌DH5α制备成感受态细胞,将耐盐菌的质粒进行转化,结果进一步表明耐盐性状与质粒没有关系。     

芽孢杆菌属一新种的鉴定

从萧县盐碱地土样中分离到一株耐盐耐碱芽孢杆菌,其可在NaCl浓度为5%～10%的培养基中生长良好,耐碱性可达pH值为11.该菌好氧,菌体杆状,具芽孢,芽孢椭圆形,膨大,端生,菌体常连成线丝状,细胞大小为(0.6～0.8)μm×(2.5～4)μm,菌落白色大型,中有一色浅圈,边缘向周围延展成波纹状,菌落中部较厚,不透明,边缘延展部分较薄,无色透明.该菌接触酶阳性,水解淀粉,硝酸盐还原,L—阿拉伯糖和D—木糖不产酸,不利用柠檬酸盐,V·P反应阴性,在V·P肉汤中生长后pH为6.5～7,形成吲哚、溶菌酶(0.001%)不敏感.根据这些特征,该菌应归芽孢杆菌属(Bacillus),同时又不同于该属的其它已知菌株,因此将它定为新种,命名为耐盐耐碱芽孢杆菌(Bacillushaloalkaloresistatsp·nov·).     

一株产脂肪酶蜡状芽孢杆菌的分离鉴定

从三角湖生活用水排污口取样,利用橄榄油培养基筛选产脂肪酶菌株。革兰染色结果为革兰氏阳性杆状菌;16SrDNA序列显示,该菌为蜡状芽孢杆菌;并从生理生化特征上进一步证实了是蜡状芽孢杆菌;对其生长曲线进行了测定;其生长规律与模式菌株大肠杆菌基本相同。对蜡状芽孢杆菌脂肪酶分解不同类型油脂的能力进行了评估,该菌脂肪酶对猪油分解能力强,橄榄油及花生油次之,对牛油分解能力差。     

连云港台南盐田中嗜盐和耐盐菌群分布的调查

2001年、2002年冬春夏3季在连云港台南盐场取卤水和底泥样品，对嗜盐菌和耐盐菌的分布状况进行调查．结果表明，不同盐度(6．6％-32．3％)盐池中栖息着不同的菌群，夏季嗜盐菌和耐盐菌数量较高，主要以盐单胞菌属、海球菌属、盐水球菌属等非芽孢菌为优势菌，低盐度(6．6％-9．9％)池中耐盐菌数量高于嗜盐菌，中盐度(13．8％-17．4％)池中耐盐菌数量接近嗜盐菌，高盐度(20．2％-32．3％)池中主要为极端嗜盐菌．此外，底泥中嗜盐菌和耐盐菌的数量一般高于卤水中．     

诱导小麦花药愈伤组织耐盐突变体的遗传参数

选用耐盐与丰产、不耐盐两套亲本品种,按不完全双列杂交设计,组配杂交组合,其F_1花药在筛选培养基(加0.3％NaCl)上诱导筛选耐盐突变体,摸清在诱导筛选过程中的主要遗传参数。结果表明:诱导筛选耐盐突变体的频率高低与亲本品种耐盐特性关系密切。就亲本品种耐盐性诱导率性状而言、亲本品种间的一般配合力高低差异明显。耐盐性诱导率的广义遗传力为97.9％,说明F_1的耐盐突变体诱导率的变异,是以遗传变异为主,受环境影响甚微;狭义遗传力为65.87％,表明加性遗传方差(遗传变异的可固定部分)占表现型方差比例中的比重较大。因此,依品种耐盐特性的表现选配杂交亲本,提高耐盐突变体诱导效率是有明显效果的。     

栽培番茄耐盐变异系的离体选择

利用细胞工程技术，首先在1．5％NaCl下进行筛选，然后在1．0％NaCl下长期继代及在无盐下和1．5％NaCl下反复的多步选择方法。经过7个月的连续筛选，分离得到耐盐性稳定的番茄耐盐变异细胞系。耐盐系在不同NaCl浓度下的生长情况表明，该耐盐系的耐盐性有了较大提高，接近于1．0%NaCl。耐盐系和对照中可溶性糖和游离脯氨酸含量明显差异，这与耐盐系具有较高耐盐性相对应。同时对游离脯氨酸在盐胁迫下积累的意义进行了探讨。     

地衣芽孢杆菌营养要求的研究

本文报道了地衣芽孢杆菌的营养要求,结果表明,以葡萄糖为碳源,多种氨基酸为氮源,地衣芽孢杆菌的最佳C/N为4～4．51。满足该菌对维生素H和必须氨基酸的需要以及主要无机盐的需要时,其菌数最高为(3．55～6．7)×107/ml,可使菌数是对照的2．1～3．5倍。     

过量表达鲁氏酵母耐盐基因GPDl对酿酒酵母的影响

GPDl是3撕酸甘油脱氢酶的编码基因,在酵母的耐盐通路中发挥着重要的作用．为了探讨耐盐酵母家族成员鲁氏酵母的GPDl对酿酒酵母的影响,本文利用分子生物学方法构建了质粒YEplacl95一GPDl,并将其转入到酿酒酵母菌株W303中,得到工程菌株WYS．研究发现在菌株WYS中过量表达鲁氏酵母的GPDl,其耐盐性、抗性及甘油产量均明显高于对照菌株wY,特别是在含盐量为18％的情况下菌株WYS甘油产量提高了14．35％．说明GPDl的过量表达是菌株耐盐性提高的重要原因．     

深海抗锰细菌的分离鉴定

从太平洋深海底泥样品中富集、筛选得到50株锰抗性细菌，16S rDNA鉴定结果表明这50株细菌中含有40株芽孢杆菌、3株短杆菌、1株短状杆菌、1株考克氏菌、4株副球菌和1株食烷菌．50株中80％是芽孢杆菌，有6个种．90％以上为革兰氏阳性菌．短小芽孢杆菌（B．pumilus）Mn12对Mn^2＋的耐受能力最好，最高的Mn^2＋耐受浓度是130mmol／L．该菌在28℃以200r／min培养24h后，能去除含锰（Ⅱ）10mmol／L培养基中90％的锰（Ⅱ）（锰含量由高碘酸盐分光光度法测定）．而Mn59在同样条件下，可耐受30mmol／L锰（Ⅱ），可去除99％的锰（Ⅱ），具有抗性高、去除率高、速度快的优点，具有极大的应用前景．     

渗透压对细菌的影响

在等渗溶液中,微生物正常生长繁殖;在高渗溶液中,细胞失水收缩,而水分为微生物生理生化反应所必需,失水会抑制其生长繁殖.根据不同盐质量分数下细菌的繁殖情况,可以判断渗透压对细菌的影响.用含不同质量分数NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基培养细菌来观察渗透压对细菌的影响,选用的菌种为金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌.大肠杆菌耐高渗透压的能力较差,在质量分数为3%以下的NaCl溶液中能正常生长,在5%的NaCl溶液中受到抑制;枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌有较强的耐盐能力,枯草芽孢杆菌在5%的NaCl溶液中能正常生长,在10%的NaCl溶液中受到抑制,而金黄色葡萄球菌在10%的NaCl溶液中仍能正常生长,在高于10%的NaCl溶液中生长受到抑制.     

烟台海域一株中度嗜盐芽孢杆菌YTM-5的鉴定及其耐盐机制研究

从山东烟台近海盐场泥样中分离得到菌株YTM-5,该菌株能在1%～15%NaCl的培养基中生长,最适宜生长条件为：3%NaCl,温度为37℃,pH值为8。经过形态学观察、生理生化特性分析及16S rDNA序列测定,鉴定该菌株为芽孢杆菌Bacillus。高压液相色谱分析表明YTM-5菌体内含有相容性溶质四氢嘧啶,其含量随培养基内NaCl含量的增加而增加,当NaCl含量达到7%以上时,一直维持较高的水平,以稳定此逆境下的渗透平衡。该菌株的发现为开发烟台海域海洋微生物资源及相关抗盐基因的利用奠定了基础。     

小麦耐盐愈伤组织内源脯氨酸含量和细胞学特征

以小麦幼穗和幼胚为外植体，诱导出愈伤组织，通过在培养基中逐渐增加选择剂（ＮａＣｌ：Ｎａ２ＳＯ４＝４：１）方法，获得耐０．８％至２．０％选择剂的耐盐愈伤组织，其内源脯氨酸含量显著高于相同盐渍条件下的对照组．培养基中选择剂浓度达到１．６％耐盐细胞仍能保持细胞及细胞器正常形态，液泡化程度低，细胞核大，有的细胞中出现二或二个以上核仁．在培养基中选择剂超过１．２％，绝大多数细胞处于坏死或类坏死状态．耐盐愈伤组织在培养基中选择剂不超过２．０％，生长良好，可以再生植株，其后代在０．３％ＮａＣｌ土壤中仍表现耐盐性．     

Transformation of the salt-tolerant gene of<Emphasis Type="Italic">Avicennia marina</Emphasis> into tobacco plants and cultivation of salt-tolerant lines

Salt-tolerant gene, CSRG1, which was isolated from a kind of salt-tolerant mangroves, Avicennia marina, constructed the transgenic plasmid, pGAM189/CSRG1. CSRG1, GUS, Kmr and Hyg^r could be transferred into tobacco genome by the ameliorated leaf discs method of agro-bacterium-mediate transformation. Thirteen stable resistant lines were obtained when fifty transgenic explants were selected through 50 mg/L hygromycin and 150 mg/L kanamycin. Assessments of PCR amplification, Southern blot analysis and GUS histochemical staining showed that CSRG1 has been integrated into the genome of the eleven transgenic lines (frequency of transformation was 22%). Northern bolt analysis revealed that CSRG1 had expressed in transgenic lines. The assessments of salt-tolerant ability and photosyn-thetic rates indicated that the survival rate of the transgenic lines is 80%—90% and the transgenic lines could increase by 30%—40% in plant height, even when they were cultivated in MS medium containing 2% NaCl and the total seawater (salinity 24). It is supposed that the special physiologic metabolic pathway formed by the products of CSRG1 can really endow the tobacco plants with the high salt-tolerant ability, not only to Na^ stress, but also to the comprehensive stress of various ions.     

Characterization of nitrogen-fixing moderate halophilic cyanobacteria isolated from saline soils of Songnen Plain in China

Twenty out of 200 isolates of cyanobacteria mainly from saline soils of Songnen Plain of China were successfully grown on BG11 N-free medium. The nitrogen-fixing activity was then demonstrated for the twenty isolates in modified BG11 medium using the acetylene reduction assay. All of them possessed appreciable nitrogenase activity (acetylene reduction) under non-saline conditions; however, at 5 % NaCl only 60 % of the isolates exhibited a high rate of this activity and 25 % were completely negative under these conditions. The cyanobacteria isolates grew well in BG11 medium; nevertheless, growth of the majority of isolates was reduced by about 25%-85% in the same medium containing 5% NaCl. Cellulolytic activity was detected in 50% of the twenty strains, amylolytic in 45%, and pectinolytic in 10% of the isolates. The cyanobacteria isolates showed also enzymeatic activity under saline conditions (6%). The preliminary identification indicated that seven isolates were Nostoc, two were Microcystis, four were Oscillatoria, six were Anabaena, and one isolate was Synechococcus.      

正交试验优化基因工程菌(E.Coli/p WSY)产黑色素培养基的组成

用正交试验优化了基因工程菌（Ｅ．ｃｏｌｉ／ｐ ＷＳＹ）产黑色素培养基的组成。配方为：蛋白胨１％、葡萄糖０．２％、硫酸铵０．５％、磷酸氢二钾０．７％、磷酸二氢钾０．３％、氯化钠０．５％，硫酸镁０．０１％，为实现微生物发酵法大规模生产黑色素提供了重要数据。     

愈伤组织生长的影响

通过对不同盐浓度胁迫下小麦愈伤组织增重百分率数据的统计分析可知,一般敏盐小麦的愈伤组织增重百分率随着盐浓度的增加而显著降低.H870634小麦的愈伤组织增重百分率对盐浓度的回归方程为yH870634=-18167x 109.31,即当非盐胁迫时,其愈伤组织每天增长7.29%;在0.5%NaCl时,其增长降低到1.23%,几乎接近停滞生长的状态.     

一株高效脱硫菌的筛选及脱硫性能的研究

从呼和浩特化肥厂附近表层土壤中分离到一株脱硫杆菌菌株Z1.该菌株的生长曲线表明菌体生长迅速,延滞期约为4h,对数生长期持续时间大约12h,稳定期较短为12h.通过脱硫实验考察了pH值、盐度和溶氧量对脱硫率和菌体生长的影响,结果表明:在pH=3.0～8.0、盐度为0～20%(NaCl%,W/V)的范围内,该菌株能正常生长.具有一定的耐酸性和耐盐性.当pH=6.0、盐度0.5%和装液量75mL/250mL时,该菌株生长最好,脱硫效果最佳.