水稻低分子量GTP结合蛋白基因osRACD的分离

应用改良的ｍＲＮＡ差别显示技术，从农垦５８Ｓ水稻中，获得了一条与光周期育性转换性状相关的差异表达片段ＲＤＰ－８，同源性比较表明，该片段与玉米低分子量ＧＴＰ结合蛋白基因之间存在着很的序列同源性，进一步应用ＲＤＰ－８片段为探针，筛选长日照光周期处理的水稻农垦５Ｎ幼穗ｃＤＮＡ文库，经ＤＮ序列分析和同源性比较证实，所得的阳性克隆含有水稻低分子量ＧＴＰ幼穗ｃＤＮＡ文库，经ＤＮＡ序列分析和同源性比较证实。所得     

应用抑制差减杂交法分离水稻幼穗发育早期特异表达的基因

以水稻茎尖分生组织为对照群体,幼穗分生组织为目标群体,进行抑制差减杂交。用经过ＳＡＭ ｃＤＮＡ差减的Ｐｂ／Ｓｂ ｃＤＮＡ群体构建了一个差减文库,通过差示筛选鉴定了４０个在Ｐｂ／Ｓｂ中特异表达或表达增强的候选克隆,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交验证,至少４０％的候选克隆代表了在Ｐｂ／Ｓｂ中特异表达或表达增强的基因,同时,相当一部分克隆为你荐度转录本。对４０个ｃＤＮＡ克隆单向测序后,与ＧｅｎＢａｎｋ中同源序列进     

光敏核不育水稻育性相关基因cDNA片段的分离

光敏核不育水稻是我国特有的水稻种质资源,对于按“两系法”途径实现水稻杂种优势育种有着重要意义。采用ｍＲＮＡ差别显示技术,分析了处于不同光周期条件下,光敏感核不育水稻农垦５８Ｓ和常规晚粳品种农垦５８幼穗中基因的表达情况,成功地建立了适合水稻幼穗ｍＲＮＡ差示的优化体系,并筛选获得了５８Ｓ长日处理条件下３条特异表达的ｃＤＮＡ片段经同源比较认为这些ｃＤＮＡ片段可能与幼穗的发育和成熟有关。     

人类肽-甲硫氨酸亚砜还原酶的cDNA克隆、组织表达谱特征及染色体定位

蛋白质结构中某些氨基酸的氧化和还原是生物体内对蛋白功能的一种调控方式．甲硫氨酸（Ｍｅｔ）被氧化则变为甲硫氨酸亚砜（Ｍｅｔ（Ｏ））,它可导致所在蛋白质的生物学活性降低或丧失,但肽－甲硫氨酸亚砚还原酶（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ, ｍｓｒＡ）则可使甲硫氨酸亚砜还原为甲硫氨酸,使其所在蛋白质重新恢复活性．为了研究人体中Ｍｅｔ氧化还原的机制,以牛ｍｓｒＡ ｃＤＮＡ序列为信息探针,筛选人ＥＳＴ数据库,依据若干同源ＥＳＴ的信息从人ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个长１２５５ｈｐ的人ＭＳＲＡ ｃＤＮＡ．该ＣＤＮＡ包含一个长７０５ ｂｐ的可读框,它编码了 ２３５个氨基酸残基．同源性比较表明,该基因与牛和大肠杆菌的ｍｓｒＡ基因的氨基酸一致性分别为８８％和６１％．表达谱分析发现,该基因在人体大多数组织中均有一条长约１．６ｋｂ的转录本,并在肾中呈高表达．应用辐射杂种细胞株定位系统（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｈｙｂｒｉｄ ｍａｐｐｉｎｇ ｐａｎｅｌ, ＲＨ ｍａｐｐｉｎｇ）将该基因精确定位在人染色体８ｐ２２～２３区带的ＤＳＳ５１８和Ｄ８５５５０位标之间,由于此前已有Ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃｗｉｎｔｅｒｅｒｙｔｈ     

PHF2全长cDNA及剪接异构体的克隆鉴定

ＰＨＤ锌指结构蛋白作为ＨＯＸ基因的上游调控因子,在生物体的发育过程中起着重要作用涉及该蛋白的异常还与人类的某些恶性疾病如白血病相关,利用基因数据库同源性比较,ＰＣＲ扩增ｃＤＮＡ文库筛选ｃＤＮＡ及部分基因组ＤＮＡ序列分析,多组织Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交等方法,克隆鉴定了一种新的人类编码ＰＨＤ蛋白的全长ｃＤＮＡ及该基因的不同剪接异构体。     

FMRP与TDG蛋白的相互作用

脆性Ｘ智力低下蛋白ＦＭＲＰ表达的缺乏可以导致最常见的遗传性智力低下疾病—脆性Ｘ综合征。用酵母双杂交体系筛选与ＦＭＲＰ相互作用的蛋白质,以期通过相互作用的蛋白质研究与ＦＭＲＰ相关的生化途径。从小鼠胚胎ｃＤＮＡ文库中得到一个与ＦＭＲＰ特异相互作用蛋白的ｃＤＮＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ号ａｆ１０２８５７）。该ｃＤＮＡ编码的蛋白与人的Ｇ／Ｔ错配ＤＮＡ胸腺嘧啶糖苷酶（ｈＴＤＧ）高度同源通过多种ＦＭＲＰ造反剪接异构体     

人伴侣蛋白CCT的 β亚基全长cDNA克隆、表达及染色体定位的研究

伴侣蛋白能促进其他底物蛋白形成正确折叠结构,而本身并不成为底物蛋白的组分。在真核细胞质中的伴侣蛋白ＣＣＴ主要是参与协助细胞骨架蛋白的构成,为细胞生长所必需。通常哺乳动物的ＣＣＴ是由７￣９种不同亚基所组成的蛋白复合体,从人的睾丸组织ｃＤＮＡ文库中分离出一条新的全长ｃＤＮＡ,在其１９３５ｂｐ序列中含有一个长１６０５ｂｐ的可读框,它编码了５３５个氨基酸。基于从该ｃＤＮＡ推导的蛋白质与啤酒酵母、裂殖酵母、     

人和鼠GRY-RBP cDNA的克隆

通过筛选人胎儿脑ｃＤＮＡ文库,克隆了编码一个新的ＲＮＡ结合蛋白的人ｃＤＮＡ,命名为ＧＲＹ－ＲＢＰ,人ＧＲＹ－ＲＢＰ ｃＤＮＡ的长度为２９３２ｂｐ,编码一个具６２３个氨基酸,分子量为６９．６ｋｕ的ＲＮＡ结合蛋白。ＧＲＹ－ＲＢＰ蛋白含有３个ＲＮＡ识别基序（ＲＮＡ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆｓ,ＲＲＭｓ）和一个富含甘氨酸（Ｇ）、精氨酸（Ｒ）、酷氨酸（Ｙ）的羧基端,经数据库比较发现该蛋白与许多ＲＲ     

人LDB1 cDNA的分离与克隆

根据与鼠ＬＩＭ结构域结构蛋白Ｌｄｂ１有较高一致性人ＥＳＴＡＡ４５２７３４设计筛库引物,在人胎脑ｃＤＮＡ文库中筛出一长度为２３９８ｂｐ的ｃＤＮＡ克隆。其开放读码框编码３４７个氨基酸与鼠Ｌｄｂ１、爪蟾ＸＬｄｂ１及果蝇Ｃｈｉｐ蛋白高度同源,含ＬＩＭ相互作用结构域及核定位信号。     

CD2胞内区结合蛋白的分子克隆与鉴定

为了探讨ＣＤ２分子的信号传递功能,以编码ＣＤ２胞内区（Ｔｈ４２１１－Ｇｌｎ３３６）肽段的ｃＤＮＡ为“钓饵”,采用酵母双杂交系统从激活的人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中筛选与之相互作用蛋白ｃＤＮＡ序列,并采用免疫共沉淀法鉴定该蛋白在体内ＣＤ２胞内区结合的特异性,克隆并鉴定了一个与ＣＤ２胞内区特异性结合的胸内蛋白分子与ｖ－ｆｏｓ转化效应蛋白（Ｆｔｅ－ｌ）同源,Ｆｔｅ－１参与细胞转化、生长、蛋白合成及向线粒体     

高粱细胞质雄性不育与HSC70mRNA的关系

使用注射方法把ＨＳＰ７０反义ｃＤＮＡ导入到高粱不育系（３Ａ）和可育系（３Ｂ）幼穗中,并分别进行热激或常温处理,发现常温时３Ａ花药细胞中最缺乏ＨＳＣ７０ｍＤＮＡ的。此时３Ａ为不育;当热激处理时,３Ａ中出现ＨＳＣ７０ｍＤＮＡ,此时３Ａ由不育变为可育。在３Ｂ花药细胞中,不论是常温不是热激条件下都出现ＨＳＣ７０ｍＤＮＡ。对花药细胞线粒体总蛋白量测定表明,３Ａ幼穗经热激处理后,它的线粒体总蛋白量是热激前的２     

水稻减数分裂相关基因OsDMC1的克隆

酵母ＤＭＣ１基因是一个在减数分裂前期 Ｉ表达的减数分裂特异基因,其产物是减数分裂同源染色体配对所必需的．根据在酵母Ｄｍｃ１与拟南芥ＡｔＤｍｃ１中保守的氨基酸ｍｏｔｉｆｓ合成的简并性引物,以ｃＤＮＡ作模板,通过套式ＰＣＲ（ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）和ＲＡＣＥｓ克隆了水稻中酵母ＤＭＣ１的同源基因 ＯｓＤＭＣ１．ＯｓＤＭＣ１全长的 ｃＤＮＡ是 １３４８ ｂｐ,编码 ３４４个氨基酸组成的多肽（ＯｓＤｍｃ１）． ＯｓＤｍｃ１与 Ｄｍｃ１和ＡｔＤｍｃ１的氨基酸序列一致性分别是５１．８％和８１．７％．ＯｓＤＭＣ１在生殖器官中表达量较高,在根中有少量表达,而在叶和幼芽中不表达． Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明水稻基因组中有两个拷贝的 ＯｓＤＭＣ１．     

通过构建嵌合分子研究mEAAC1和mASCT1的底物结合区域

采用重组ＰＣＲ的方法,构建了小鼠兴奋性氨基酸转运蛋白家族２种亚型ｍＥＡＡＣ１和ｍＡＳＣＴ１的ｃＤＮＡ嵌合分子,通过体外转录成ｃＲＮＡ,显微注射亚洲爪蟾卵母细胞中外源表达后,用同位素示踪技术进行＾３－Ｇ和＾３Ｈ－Ｓｅｒ流量测定,结果表明,该２种转运蛋白的－ＮＨ２末端及其相邻的部分可能不含有决定底物特异性的氨基酸,它们也许仅对底物结合位点的形成起结构支持作用。     

人类细胞因子信号传导抑制因子基因humSOCS-2的分离与克隆

采用国际ＧｅｎＢａｎｋ ＥＳＴ数据库同源筛选的策略,筛选到１个与小鼠细胞因子信号传导抑制因子基因ｍｍＳＯＣＳ－２高度同源的ＥＳＴ９ｇｂＡＡ１１５２３９）,在人胎盘ｃＤＮＡ分子库中步移获得一长１０１１ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,包含一个长５９４ｂｐ的开放阅读框,编码了１９８个氨基酸残基,经ＮＣＢＩ数据库检索是一个全新的基因。     

耐旱植物厚叶旋蒴苣苔BDN1脱水素基因的克隆及表达特性分析

根据已知植物脱水素基因保守区域设计引物,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法从耐旱植物厚叶旋蒴苣苔的总ｃＤＮＡ中扩增出一个５００ｂｐ的与植物脱水素基因同源的序列。结合５’ＲＡＣＥ获得了植物脱水素基因家族一个新成员ＢＤＮ１的全长ｃＤＮＡ（１１４８ｂｐ）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明,ＢＤＮ１基因在厚叶旋蒴苣苔基因组中以单拷贝形式存在,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明,该基因的表达受干旱,寒冷及ＡＢＡ的诱导。推测该基因与     

与水稻光敏核不育性相关的cDNA片段的鉴定和染色体定位

对利用ｃＤＮＡ－ＲＡＰＤ技术获得的光敏核不育水稻可育和不育幼穗ｍＲＮＡ差异表达的ｃＤＮＡ片段进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交鉴定,获得１个与光敏核不育性相关的阳性片段ＲＰＧ４３。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及相应的ＲＡＰＤ分析表明,ＲＰＧ４３为单拷贝序列,是转录后的加工产物。序列分析表明,ＲＰＧ４３长度为７４４ｂｐ,其中第１２６～１８５的６０个碱基与人类１１号染色体的ｐａｃ ｐＤＪ３５６ｄ６ ＤＮＡ序列有７２％的     

人类神经Tau具有提高DNA熔链温度的作用

在小牛胸腺ＤＮＡ溶液中加入基因重组人类神经Ｔａｎ，观察ＤＮＡ热变性时的增色效应显示：人类神经Ｔａｕ具有提高ＤＮＡ熔链温度（Ｔ_ｍ）的作用，可将Ｔｍ由 ６７℃提高至 ８１℃；并将质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ⅱ ＳＫ的熔链温度由７５℃提高到８５℃．动力学实验表明，Ｔａｕ蛋白能明显减慢ＤＮＡ在热变性时的动力学过程．以上结果提示， Ｔａｕ蛋白可能具有稳定 ＤＮＡ双螺旋空间结构的作用．     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

CD2胞内区结合蛋白的分子克隆与鉴定

为了探讨 ＣＤ２分子的信号传递功能，以编码ＣＤ２胞内区（Ｔｈｒ２１１－Ｇ１ｎ３３６）肽段的ｃＤＮＡ为“钓饵”，采用酵母双杂交系统从激活的人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中筛选与之相互作用蛋白的ｃＤＮＡ序列．并采用免疫共沉淀法鉴定该蛋白在体内与ＣＤ２胞内区结合的特异性．克隆并鉴定了一个与ＣＤ２胞内区特异性结合的胞内蛋白分子，与ｖ－ｆｏｓ转化效应蛋白（Ｆｔｅ－１）同源 Ｆｔｅ－１参与细胞转化、生长、蛋白合成及向线粒体转运蛋白质．蛋白数据库检索表明，Ｆｔｅ－１具有蛋白激酶ＰＫＣ的结合与作用位点，提示Ｆｔｅ－１参与ＣＤ２分子介导的信号传递     

人纺锤体素cDNA 的克隆定位和组织表达谱分析

纺锤体是细胞有丝分裂及配子成熟分裂过程中特有的亚细胞结构,它的结构和功能物正常与直接影响生物个体的发育、分化、生长和繁殖、最近的研究表明,小鼠Ｍｏｓ／ＭＡＰＫ途径对纺锤体的作用与纺锤体素蛋白的磷酸化过程密切相关,采用同源筛选方法从人睾丸ＣＤＮＡ分子克隆到一个与小鼠纺锤体素基因编码序列高度同源,长１９２９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,计算机软件分析发现,该ｃＤＮＡ的２７１－９８４ｎｔ是一个完整的开放阅读框（Ｏ